實驗報告-質(zhì)粒提取及檢測

：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢一、實驗目DNA二、實驗原質(zhì)粒一種外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，載體要把一個有用的外源通過工程，轉(zhuǎn)化到細胞中去進行繁殖和表達，的質(zhì)粒、λ噬菌體、M13噬菌體、噬菌粒外，還有酵母人工載體以及動、植物病分離質(zhì)粒DNA堿裂解溶液Ⅰ：50mmol/L，10mmol/EDTA-Na，25mmol/LTris-HClDNA溶液Ⅱ：0.4mol/LNaOH，2%SDS，1：1作用：細胞在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變1 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢溶液Ⅲ：5mol/L60ml，11.5ml，電帶電荷的物質(zhì)，在電場中的趨向運動稱為電泳。DNA200bp50kbDNADNA（U（TDNA度是非常重要的。提取質(zhì)DNADNA閉環(huán)超螺旋DNA。當提取的質(zhì)粒DNA電泳時,同一質(zhì)粒DNA泳動速度：閉環(huán)超螺旋〉線核酸含量有關(guān)。三、實驗材儀恒溫搖床，高壓滅菌鍋，超凈工作臺，、 材2 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢試LB（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeast瓊脂（固體培養(yǎng)基）15g，1NNaOHpH7.5;氨芐青霉素抽提液（飽和酚：氯仿：異戊醇無水乙 作用：除去DNA水化層，使DNA沉淀 作用：純化質(zhì)粒DNA。g.TE緩沖液或ddH2O DNAGoldview（DNA1×TAE上樣緩沖液四、方法和質(zhì)粒DNA的提370C1.5mLEppendorf，10000rpm×2min，100μLI，10200μL2~35150μL3-53 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢15（6）10000rpm×5min，混勻，10000rpm×10min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中；加入等體積（370μL）氯仿/異戊醇（24:1），混勻，10000rpm2min2200C（10）12000rpm×5min，800μL70%12000rpm1min，倒盡上清液，吸水紙吸干液體，30min，直至變得透明無乙醇味；20μLddH2ODNA5μL-200CDNA瓊脂糖凝膠電泳檢瓊脂糖凝膠板的650C（不燙手為宜），1μLGoldview氣泡，緩慢倒入事先準備的制膠有機玻璃槽（插入樣品槽模板梳子）30min膠板放入電泳槽中（樣品孔位于負極），1×TAE5mm，用取液DNA5μL1μL（6×）1~2cm4 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢DNA五、結(jié)果及DNADNADNA3DNADNA，常以超螺旋形式存在；如果兩條鏈DNADNA分子。DNAcccDNA>線性>ocDNADNA的泳動速度最快，電泳速度最快的條帶顯色最深。閉合環(huán)狀DNA、開環(huán)DNA和線性DNA分子；DNA條帶不是特別清晰，分析有以下幾個原因：DNA部分降解、電泳緩沖液陳舊、DNA上樣量過多、有蛋白污染、DNA變性。5：同實驗者：2017410題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢六、討核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的和過高濃度的金屬離子其他生物大分子（如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子）DNARNApH4~10機械剪切力的主要危害對象是大分子量的線型DNA分子，如真核細胞的DNA；對分子量小的環(huán)狀DNA分子，如質(zhì)粒DNA及RNA分子則相對少一些。0~4RNApoly(A)RNA(25:24:1)混合液可使者兩個問題迎刃而6生命科學學