梅毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)檢驗(yàn)科

關(guān)于梅毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)檢驗(yàn)科第一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒概況梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。人體受感染后，螺旋體很快播散到全身，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時(shí)顯時(shí)隱，病程較長(zhǎng)?中華人民共和國(guó)傳染病防治法?規(guī)定要管理的性病是艾滋病、淋病和梅毒，應(yīng)加以重點(diǎn)防治。衛(wèi)生部?性病防治管理辦法?則規(guī)定除上述3種病以外，還有生殖器皰疹、尖銳濕疣、軟下疳、非淋菌性尿道炎（NGU）、性病淋巴肉芽腫均為監(jiān)測(cè)性疾病梅毒早期主要侵犯皮膚及粘膜，晚期除侵犯皮膚、粘膜外，還可侵犯心臟血管系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等全身各個(gè)系統(tǒng)；另一方面，梅毒又可多年無(wú)癥狀而呈潛伏狀態(tài)第二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒的分期一期梅毒：主要表現(xiàn)為單個(gè)、無(wú)痛性的硬下疳，通常在感染梅毒螺旋體后3~4周出現(xiàn)二期梅毒：一期梅毒不經(jīng)治療，梅毒螺旋體在幾周至幾個(gè)月后會(huì)播散至血液中，引起二期梅毒。二期梅毒的臨床表現(xiàn)多種多樣，常見(jiàn)的有發(fā)熱、淋巴結(jié)病、彌漫性皮疹、生殖道或會(huì)陰濕疣等。一、二期梅毒統(tǒng)稱為早期梅毒三期或晚期梅毒：一般在最初感染的數(shù)年至十?dāng)?shù)年后發(fā)生，可累及任何器官，常見(jiàn)的有梅毒瘤性梅毒、心血管梅毒及神經(jīng)梅毒隱性梅毒：無(wú)癥狀但梅毒血清學(xué)試驗(yàn)呈陽(yáng)性。分為早期隱性梅毒（病程一年以內(nèi)）和晚期隱性梅毒（病程一年以上）第三頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日生物學(xué)特性

梅毒螺旋體即蒼白密螺旋體的蒼白亞種，人是其唯一宿主。直徑0.1—0.15μm，全長(zhǎng)7--8μm。在電鏡下可見(jiàn)有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜。新鮮標(biāo)本在暗視野顯微鏡下可觀察其形態(tài)和活潑的運(yùn)動(dòng)方式。梅毒螺旋體主要有兩種抗原：1、密螺旋體抗原即梅毒螺旋體表面的特異抗原，與雅司、地方性梅毒、品他病等3種密螺旋體有共同抗原，可交叉反應(yīng)。2、非螺旋體抗原即磷脂類抗原，可刺激機(jī)體產(chǎn)生反應(yīng)素，其與牛心肌的心脂質(zhì)抗原發(fā)生反應(yīng)，此法敏感性高，但有假陽(yáng)性。梅毒螺旋體對(duì)外界的抵抗力極弱，離體后1—2小時(shí)即死亡，對(duì)熱和干燥特別敏感，在體外干燥環(huán)境下1—2小時(shí)或加1.5℃經(jīng)1小即死亡。血液中4℃放置3天可死亡，因此4℃血庫(kù)存放3天以上的血液無(wú)傳染梅毒的危險(xiǎn)。對(duì)肥皂水和常用化學(xué)消毒劑亦敏感，1%--2%石炭酸內(nèi)數(shù)分鐘就死亡。梅毒的免疫屬感染性免疫，有梅毒螺旋體感染時(shí)才有免疫力，一旦螺旋體被殺滅，其免疫力隨之消失。機(jī)體對(duì)梅毒螺旋體感染可產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，體液免疫中有兩種抗體：一種是梅毒特異性抗體，主要是IgG、IgM，對(duì)螺旋體有制動(dòng)作用，當(dāng)有補(bǔ)體存在時(shí)，可將其殺死和溶解，對(duì)機(jī)體的再感染有保護(hù)作用。另一種是抗脂質(zhì)抗體的反應(yīng)素，為IgG和IgM的混合物，對(duì)機(jī)體無(wú)保護(hù)作用。第四頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日

Ⅰ期梅毒病人取硬下疳滲出液，Ⅱ期梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴抽出液。對(duì)Ⅰ期梅毒末期以后（大約感染3—4周以后）的病人可分離血清檢查有無(wú)梅毒螺旋體抗體和反應(yīng)素。檢驗(yàn)方法：1、

顯微鏡鏡檢滲出液涂片后可直接用暗視野顯微鏡檢。直接鏡檢適合ⅠⅡ期梅毒的檢查。（現(xiàn)已經(jīng)不常用）2、

血清學(xué)試驗(yàn)包括非螺旋體抗體和密螺旋體抗體兩類1）

非螺旋體抗體試驗(yàn)（NtrAT）用正常牛心肌脂質(zhì)作為抗原，測(cè)定病人血清中的反應(yīng)素。均為初篩試驗(yàn)。2）

密螺旋體抗體試驗(yàn)（TrAT）采用Nichols株梅毒螺旋體作為抗原，測(cè)定血清中梅毒螺旋體特異抗體，特異性強(qiáng)，可用作梅毒證實(shí)試驗(yàn)。送檢標(biāo)本和檢驗(yàn)方法第五頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒的治療非口服途徑的青霉素可用于各期梅毒的治療早期梅毒的治療首選240萬(wàn)單位芐星青霉素G單次肌肉注射。對(duì)青霉素過(guò)敏者，替代治療方案有強(qiáng)力霉素（口服，100mg一次，每日2次，持續(xù)2周）或四環(huán)素（口服，500mg一次，每日4次，持續(xù)2周）早期隱性梅毒的治療方案與早期梅毒相同。晚期隱性梅毒的首選治療方案為每周一次肌肉注射240萬(wàn)單位芐星青霉素G，持續(xù)3周；對(duì)青霉素過(guò)敏者，替代治療方案有強(qiáng)力霉素（口服，100mg一次，每日2次，持續(xù)4周）或四環(huán)素（口服，500mg一次，每日4次，持續(xù)4周）合并HIV感染者的治療方案同晚期隱性梅毒梅毒瘤性梅毒和心血管梅毒的治療方案與晚期隱性梅毒相同。神經(jīng)梅毒的治療只能采用青霉素，具體方案為靜脈注射水溶性青霉素G（每4小時(shí)300萬(wàn)~400萬(wàn)單位，持續(xù)10~14天）或肌肉注射普魯卡因青霉素G（240萬(wàn)單位一天，持續(xù)10~14天）同時(shí)口服丙磺舒（500mg一次，每日4次，持續(xù)10~14天）孕婦的治療只能采用青霉素，青霉素過(guò)敏者需經(jīng)脫敏后再進(jìn)行治療第六頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日暗視野顯微鏡檢查法：主要的梅毒病原學(xué)診斷方法。是最特異的一期梅毒檢測(cè)方法。取材部位以硬下疳為主，亦可從宮頸、陰道、淋巴結(jié)等處取材。陽(yáng)性可確診，陰性不能排除梅毒（須在3周內(nèi)不同的3天采樣檢測(cè)，才能得出陰性結(jié)果）。暗視野顯微鏡法診斷的準(zhǔn)確性受操作者的經(jīng)驗(yàn)、病灶中活螺旋體的數(shù)量及口腔、肛門破損處存在的非致病性螺旋體等因素影響鍍銀染色法：與暗視野檢查法的臨床意義基本相同。利用梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染成棕黑色，再通過(guò)普通高倍顯微鏡進(jìn)行觀察直接免疫熒光法（DFA)：是目前國(guó)外采用較多的方法，其特異性及敏感性均優(yōu)于暗視野檢查法。將特異性的抗梅毒螺旋體單克隆抗體用熒光素標(biāo)記，如標(biāo)本中存在梅毒螺旋體，則通過(guò)抗原抗體特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)到發(fā)蘋果綠色的梅毒螺旋體。此法可區(qū)分梅毒螺旋體和其他非致病性或條件致病性螺旋體梅毒的病原學(xué)檢測(cè)（一）第七頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：PCR能對(duì)生殖器潰瘍進(jìn)行早期的鑒別診斷，區(qū)分梅毒、生殖器皰疹和軟下疳。它又可分為PCR和RT-PCR。PCR的設(shè)計(jì)主要針對(duì)編碼梅毒螺旋特異性抗原和TpN47的DNA開(kāi)放編碼區(qū)，常見(jiàn)的引物有K03A、K04、47-1、47-2、47-3、47-4等。由于在PCR中會(huì)偶然出現(xiàn)非特異的PCR產(chǎn)物而干擾結(jié)果，這就必須用特異性的DNA探針進(jìn)行DNA-DNA雜交來(lái)提高PCR的特異性及敏感性。此外，由于TpN47的保守性，雅司螺旋體可產(chǎn)生類似的PCR產(chǎn)物，所以這種設(shè)計(jì)的PCR不能區(qū)分梅毒和雅司；但可以區(qū)分梅毒螺旋體和引博氏疏螺旋體，這就可以解決梅毒與萊姆病之間血清診斷中的免疫交叉問(wèn)題。另一種是RT-PCR，常見(jiàn)的設(shè)計(jì)是針對(duì)梅毒螺旋體的16srRNA366bp片段，這種方法污染少，特異性敏感性高，但價(jià)格稍高。PCR在梅毒持續(xù)感染中的診斷價(jià)值目前尚無(wú)一致意見(jiàn)，理論上PCR可查出死亡的TP，所以治療后PCR陽(yáng)性并不意味著治療失敗，但死亡的TP從機(jī)體內(nèi)清除較快（15～30天），而存活的TP從機(jī)體內(nèi)清除至少需120天，所以治療數(shù)周后PCR陽(yáng)性意味著持續(xù)感染的可能

。此外，也有將PCR用于產(chǎn)前診斷和神經(jīng)梅毒診斷的報(bào)道

梅毒的病原學(xué)檢測(cè)（二）第八頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日人類對(duì)梅毒無(wú)先天免疫性，尚無(wú)疫苗接種進(jìn)行人工免疫，僅能在受感染后產(chǎn)生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測(cè)出，早期梅毒抗梅治療3～9個(gè)月后或晚期梅毒治療2年后，大部分病人IgM可轉(zhuǎn)陰性，再感染時(shí)又出現(xiàn)陽(yáng)性，故IgM型抗體的存在是活動(dòng)性梅毒的表現(xiàn)感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間，IgG抗體仍可通過(guò)記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測(cè)出梅毒的免疫性（一）第九頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒的免疫性（二）另一種具有抗體性質(zhì)的物質(zhì)叫反應(yīng)素（reagin），是梅毒螺旋體破壞人體組織過(guò)程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體。反應(yīng)素一般在感染后5～7周（或下疳出現(xiàn)后2～3周）產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失胎兒在宮內(nèi)感染梅毒螺旋體后，胚胎晚期（6～9個(gè)月）已能合成IgM型抗體，出生后第3個(gè)月開(kāi)始形成IgG型抗體；IgM抗體不能通過(guò)胎盤，而IgG抗體能通過(guò)胎盤，如在患兒血清中檢側(cè)出IgM抗梅毒螺旋體抗體是診斷先天性梅毒的有力證據(jù)（但I(xiàn)gM陰性并不能排除先天性梅毒）第十頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日NTrAT非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗(yàn)及療效觀察?？梢苑譃橐韵滤姆N試驗(yàn)，原理基本相同

1、性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL)

：試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，且要在顯微鏡下觀察結(jié)果，故國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但VDRL是診斷神經(jīng)性梅毒最特異的血清學(xué)方法

2、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR)：試劑無(wú)需現(xiàn)配現(xiàn)用，但仍要在顯微鏡下觀察結(jié)果，現(xiàn)已很少使用

3、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)：在特制的紙片上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn)凝集，用肉眼可觀察結(jié)果

4、甲苯胺紅不加熱試驗(yàn)（TRUST)：在試劑中以紅色的甲苯胺紅顆粒代替黑色的炭粉顆粒，使結(jié)果更易于觀察

非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（一）第十一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的缺陷

1、特異性：在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、結(jié)締組織病、腫瘤、靜脈吸毒者、老年人以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)

2、敏感性：感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)時(shí)間晚于特異性梅毒螺旋體抗體，因此非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)對(duì)一期梅毒的漏檢率較高。RPR或TRUST有時(shí)出現(xiàn)弱陽(yáng)性或陰性結(jié)果，而臨床上又像二期梅毒，此時(shí)應(yīng)將此血清稀釋后做定量試驗(yàn)，如出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則為抗體過(guò)量引起的“鉤狀效應(yīng)”，1~2％的二期梅毒病人可出現(xiàn)此現(xiàn)象而發(fā)生假陰性反應(yīng)。此外，晚期梅毒反應(yīng)素轉(zhuǎn)陰率高，再加上這類試驗(yàn)對(duì)隱性梅毒也不太敏感，因此用此類試驗(yàn)進(jìn)行梅毒篩查時(shí)，存在著相當(dāng)數(shù)量的漏檢非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)

1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)陽(yáng)性的患者往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，臨床上即可開(kāi)展治療

2、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)表現(xiàn)為滴度隨成功的治療而逐漸下降，故可以作為療效觀察的指標(biāo)

3、此類方法價(jià)格低廉非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（二）第十二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日測(cè)定非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的滴度進(jìn)行療效觀察

1、治療成功：早期梅毒患者在治療后6個(gè)月內(nèi)癥狀消失且非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)滴度有至少4倍的下降。晚期梅毒或隱性梅毒患者在治療后12~24個(gè)月內(nèi)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)滴度有至少4倍的下降

2、治療失敗：治療后癥狀持續(xù)或重新出現(xiàn)；治療后非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)滴度反而上升了4倍或以上；非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)初始滴度較高（1:32或以上）但在六個(gè)月內(nèi)沒(méi)有達(dá)到4倍的下降?？姑范局委熓〉牟∪藨?yīng)考慮合并HIV感染及神經(jīng)梅毒的可能性

3、血清固定：經(jīng)正規(guī)治療后，梅毒患者非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)一般都會(huì)轉(zhuǎn)為陰性，但有1~3%的病人即使經(jīng)足量抗梅治療，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)滴度仍持續(xù)呈低滴度陽(yáng)性，這種現(xiàn)象稱為血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升則提示再次感染梅毒非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（三）第十三頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日TrAT梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，但不能用作療效觀察的指標(biāo)。常用的有以下五種方法：

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)2、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）

3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA)4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）5、梅毒螺旋體化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（TP-CLIA)

6、梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（一）第十四頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)FTA-ABS是所有螺旋體試驗(yàn)中最敏感的方法，特異性也很高，被認(rèn)為是檢測(cè)梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”。且該試驗(yàn)可分開(kāi)檢測(cè)IgM和IgG

但是，該方法在技術(shù)操作上也是最困難的，試驗(yàn)的操作以及結(jié)果的判讀都必須加以核實(shí)。試驗(yàn)可靠性的關(guān)鍵是標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)果判斷、高質(zhì)量的熒光標(biāo)記抗體以及適當(dāng)?shù)南♂尪取Ｓ捎趯?shí)驗(yàn)室操作繁瑣以及主觀判讀經(jīng)常產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果，因此增加標(biāo)記熒光標(biāo)記染料的復(fù)染可以減低標(biāo)準(zhǔn)化過(guò)程中的錯(cuò)誤并增加其可讀性及重復(fù)性由于該試驗(yàn)需有優(yōu)質(zhì)的熒光顯微鏡和技術(shù)熟練的操作人員才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果，故常不被臨床實(shí)驗(yàn)室作為常規(guī)方法開(kāi)展

特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（二）第十五頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）原理：用超聲裂解的梅毒螺旋體為抗原，致敏經(jīng)醛化、鞣化的羊或禽類紅細(xì)胞，此致敏紅細(xì)胞與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可觀察的凝集反應(yīng)優(yōu)點(diǎn)：該方法比FTA-ABS易操作且穩(wěn)定性好，它的敏感性除早期梅毒外與FTA-ABS相似，對(duì)大樣本進(jìn)行批量檢測(cè)時(shí)，TPHA也比FTA-ABS易操作不足：由于紅細(xì)胞具有生物活性，可能產(chǎn)生非特異性凝集，且保存時(shí)間較短，批間差較大，故實(shí)際使用中也存在一些問(wèn)題特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（三）第十六頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日

梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）原理：TPPA的原理與TPHA基本相同，但它以人工合成的惰性明膠顆粒代替TPHA中的紅細(xì)胞作為載體，是TPHA的升級(jí)產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：1、試劑穩(wěn)定，批間差小

2、結(jié)果判讀更為清晰明確

3、敏感性和特異性較TPHA進(jìn)一步提高不足：較難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，結(jié)果判定主觀特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（四）第十七頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標(biāo)記抗原，形成雙抗原夾心，同時(shí)檢測(cè)IgG和IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，使用酶標(biāo)記抗人IgG或IgM，分開(kāi)檢測(cè)IgG或IgM

優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性和特異性較高

2、價(jià)格較低，適合于對(duì)大量樣品的篩查

3、可實(shí)現(xiàn)操作的自動(dòng)化、客觀化不足：ELISA試劑盒品牌眾多，各家采用的抗原和工藝不同，使敏感性和特異性產(chǎn)生較大的差異，臨床實(shí)驗(yàn)室在選用ELISA試劑前應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行評(píng)估

特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（五）第十八頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)梅毒螺旋體IgM抗體原理：ELISA間接法或捕獲法，以捕獲法的敏感性和特異性為佳。由于血液中IgG的量大大高于IgM，為避免交叉反應(yīng)所引起的假陽(yáng)性，一般須對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)處理，先去除其中的IgG然后再進(jìn)行IgM

測(cè)定。分離去除IgG的常用方法為柱層析法或免疫沉淀法（沉淀劑為抗人IgG等）用途：1、先天性梅毒的診斷

2、活動(dòng)性梅毒（新近感染）的診斷及療效觀察

3、梅毒再感染的診斷結(jié)果解釋：IgM陽(yáng)性是先天性梅毒或活動(dòng)性梅毒的重要證據(jù)，但陰性結(jié)果并不能排除感染的可能性

特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（六）第十九頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（TP-CLIA）原理：目前以微孔板式的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定最為常見(jiàn)，其原理與ELISA方法基本相同，只是以化學(xué)發(fā)光底物取代了發(fā)色底物，檢測(cè)的信號(hào)則由光密度（A值）變?yōu)楣庾訑?shù)

優(yōu)點(diǎn)：較之ELISA方法，其分析敏感性更低，可報(bào)告范圍更寬不足：與ELISA試劑盒的不足基本相同特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（七）第二十頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體快速檢測(cè)試驗(yàn)（TP-RT）原理：雙抗原夾心免疫層析試驗(yàn)或間接法免疫滲濾試驗(yàn)，多采用膠體金進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)檢測(cè)IgG、IgM抗體（雙抗原夾心法）或單測(cè)IgG抗體（間接法）優(yōu)點(diǎn)：1、簡(jiǎn)便、快速，不需要特殊的儀器

2、適合于單人份操作，可用于較緊急和實(shí)驗(yàn)室條件差的場(chǎng)合不足：1、臨床評(píng)估資料不多，敏感性、特異性尚有待進(jìn)一步考查

2、無(wú)法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，結(jié)果判斷主觀

3、測(cè)定結(jié)果受溫度和時(shí)間的影響較大

4、價(jià)格較高特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（八）第二十一頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日免疫印跡試驗(yàn)梅毒的免疫印跡試驗(yàn)（Westernblot）與作為HIV抗體確認(rèn)的免疫印跡試驗(yàn)采用相同的原理和技術(shù)既可檢測(cè)IgG抗體，也可檢測(cè)IgM抗體目前已有商品化的試劑盒供應(yīng)，但價(jià)格高昂檢測(cè)特異性的梅毒抗體條帶，其分子量分別為15.5、17、45.5和47kd梅毒IgG免疫印跡試驗(yàn)的敏感性和特異性均可達(dá)到甚至超過(guò)FTA-ABS的水平有文獻(xiàn)報(bào)道，梅毒IgM免疫印跡試驗(yàn)對(duì)先天性梅毒的診斷可能很有意義，其特異性至少達(dá)到90%，而敏感性達(dá)83%以上，高于FTA-ABS19SIgM73%的水平第二十二頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日方法學(xué)比較

1.

非螺旋體抗體試驗(yàn)（NtrAT）

這類方法敏感性高，其抗體滴度與病變活動(dòng)性有關(guān)，病灶出現(xiàn)后1-2周就可測(cè)出反應(yīng)素，Ⅰ期梅毒陽(yáng)性率約為70%，Ⅱ期梅毒陽(yáng)性率可達(dá)100%，Ⅲ期梅毒陽(yáng)性率較低，先天性梅毒陽(yáng)性率可達(dá)80%-100%，但此類試驗(yàn)特異性不高，常有假陽(yáng)性反應(yīng)。因此，在分析結(jié)果時(shí)應(yīng)結(jié)合病史和臨床癥狀，并做密螺旋體抗原試驗(yàn)加以確診。2.

密螺旋體抗體試驗(yàn)（TrAT）

1）TPHA（梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)）是一種間接血凝試驗(yàn)，以SRBC為載體，將梅毒螺旋體Nichols株，經(jīng)純化后超聲擊碎成密螺旋體抗原，致敏SRBC，加入待檢病人血清作間接血凝試驗(yàn)，具有敏感性高，快速，簡(jiǎn)便，易于觀察等特點(diǎn)。2）TPPA（梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)）與TPHA基本相同。3）WB（免疫印跡試驗(yàn)）是分子水平的試驗(yàn)，本法綜合了SDS的高分辯力和ELISA的高特異性和敏感性，對(duì)梅毒的確診，尤其對(duì)早期梅毒的確診具有特殊的價(jià)值，對(duì)二期，三期梅毒的診斷率很高。4）FTA-ABS（熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)）為間接熒光抗體檢測(cè)法。本法敏感性和特異性均高，是Ⅰ期，Ⅱ期梅毒首先出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的血清學(xué)試驗(yàn)，且病人經(jīng)藥物治療后，反應(yīng)仍不轉(zhuǎn)陰，可用于確診但不能用作療效評(píng)價(jià)。密螺旋體抗原試驗(yàn)的特異性雖強(qiáng)，但仍不能區(qū)分雅司、地方性梅毒、品他病，也可有1%生物學(xué)假陽(yáng)性存在。因此，這些試驗(yàn)的結(jié)果的判定，仍需結(jié)合臨床資料來(lái)分析。第二十三頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒血清學(xué)試驗(yàn)假陽(yáng)性的原因原因非密螺旋體抗體試驗(yàn)(NTrAT)密螺旋體抗體試驗(yàn)(TrAT)自身免疫病瘧疾新近免疫接種皮膚病心血管病結(jié)核麻風(fēng)靜脈注射毒品病毒感染熱性病妊娠HIV感染其他性傳播病老年人多次輸血萊娒病地方性密螺旋體病原因不明技術(shù)誤差＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－＋－＋＋＋＋－－＋＋－＋－－＋－－－＋－＋＋＋＋第二十四頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑評(píng)估結(jié)果試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號(hào)敏感性特異性RPR上?？迫A2007062097.2%93.4%TRUST上海榮盛2007050195.4%95.1%TRUST蘭州生物所2007020192.2%96.2%TRUST廈門英科新創(chuàng)200806760297.2%93.4%TRUST鄭州安圖綠科2007050987.1%94.4%TRUST北京萬(wàn)泰MZ007030184.3%92.0%參比試劑：美國(guó)BD公司生產(chǎn)的RPR試劑盒（批號(hào)8095883）第二十五頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑(ELISA)評(píng)估結(jié)果試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號(hào)敏感性特異性ELISA-TP珠海麗珠試劑2008061899.6%99.6%ELISA-TP廈門英科新創(chuàng)200807750699.6%98.3%ELISA-TP北京華大吉比愛(ài)2008091299.6%97.1%ELISA-TP北京萬(wàn)泰N2008060699.2%99.6%ELISA-TP北京現(xiàn)代高達(dá)20080600398.9%99.6%ELISA-TP北京金豪20080707698.9%98.3%ELISA-TP上?？迫A2008071497.7%93.8%參比試劑：日本富士公司生產(chǎn)的TPPA試劑盒（批號(hào)VN80807）+免疫印跡法（批號(hào)D081009A1）第二十六頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑(快速法)評(píng)估結(jié)果試劑名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號(hào)敏感性特異性快速(膠體金)北京萬(wàn)泰02008080398.1%96.3%快速(膠體金)廈門英科新創(chuàng)02712270295.8%93.8%快速(膠體金)韓國(guó)SD02503591.6%99.2%快速(膠體金)杭州艾康20081021687.8%100%參比試劑：日本富士公司生產(chǎn)的TPPA試劑盒（批號(hào)VN80807）+免疫印跡法（批號(hào)D081009A1）第二十七頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（一）先以非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（RPR、TRUST等）進(jìn)行初篩，再以梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA、TPHA、ELISA等）進(jìn)行確認(rèn)優(yōu)點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)價(jià)格低廉，使梅毒檢測(cè)的成本可以保持在低水平缺點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的敏感性較差，導(dǎo)致臨床上易出現(xiàn)漏檢的情況同時(shí)進(jìn)行梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)和非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：這是從技術(shù)上而言的最佳方案缺點(diǎn)：人力和試劑成本較高先進(jìn)行梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，陽(yáng)性時(shí)再進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)第二十八頁(yè)，共三十三頁(yè)，2022年，8月28日關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（二）

TrAT梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA等）（-）陰性報(bào)告（+）NtrAT非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（RPR等）（+）現(xiàn)癥梅毒抗梅治療，療效觀察（-）詢問(wèn)梅毒既往感染和治療史（有）既往感染（無(wú)）隨訪或抗梅治療第二十九