第八章植物基因工程總結(jié)課件

第八章植物基因工程第八章植物基因工程1轉(zhuǎn)基因植物將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)，獲得能夠表達(dá)外源基因的植物稱為轉(zhuǎn)基因植物?？瓜x(chóng)抗病抗逆生產(chǎn)藥物轉(zhuǎn)基因植物2第一節(jié)植物的轉(zhuǎn)基因技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線轉(zhuǎn)基因的受體系統(tǒng)外源基因?qū)胫参锏姆椒ǖ谝还?jié)植物的轉(zhuǎn)基因技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)3一、植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線分離目的基因?qū)⒛康幕蚺c載體連接，形成重組DNA利用細(xì)菌繁殖擴(kuò)增重組DNA將與表達(dá)載體相連的重組DNA導(dǎo)入到目標(biāo)植物的細(xì)胞中篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，并誘導(dǎo)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植株轉(zhuǎn)基因植株大規(guī)模種植一、植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線4三、外源基因?qū)胫参锏姆椒ǎㄒ唬〥NA直接轉(zhuǎn)移法化學(xué)刺激法PEG、PNA（肽核酸）、磷酸鈣、氯化鈣電擊法基因槍法花粉通道法將外源DNA片段在自花授粉后的特定時(shí)期注入柱頭或花柱，外源DNA沿花粉管通道或傳遞組織通過(guò)珠心進(jìn)入胚囊，轉(zhuǎn)化不具備細(xì)胞壁的受精卵，合子或早期胚體細(xì)胞。三、外源基因?qū)胫参锏姆椒?（二）載體介導(dǎo)法Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序植物病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染程序（略）（二）載體介導(dǎo)法61Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)與功能雙子葉植物尤其豆科植物的根部常常會(huì)由于植物根部被土壤桿菌農(nóng)桿根瘤菌（A.tumefaciens）形成根瘤，其致瘤特性是由該菌細(xì)胞內(nèi)的野生型質(zhì)粒Ti質(zhì)粒（Tumor-inducingplasmid）介導(dǎo)的，又稱腫瘤誘導(dǎo)質(zhì)粒。1Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序7（1）Ti質(zhì)粒的圖譜區(qū)整個(gè)質(zhì)粒160-240kb

T-DNA區(qū)、Vir區(qū)、Con區(qū)、Ori區(qū)（1）Ti質(zhì)粒的圖譜區(qū)8①轉(zhuǎn)移DNA

T-DNA（transfer-DNA）左邊界右邊界生長(zhǎng)素基因細(xì)胞分裂素基因冠癭堿合成tmstmttmrT-DNA12-24kbtms的編碼：合成吲哚乙酸t(yī)mr的編碼：合成植物分裂素tmt的編碼：合成氨基酸衍生物冠癭堿在T-DNA的兩端還含有左右2個(gè)邊界，長(zhǎng)為25bp的末端重復(fù)順序，在切除及整合過(guò)程具有重要意義。①轉(zhuǎn)移DNAT-DNA（transfer-DNA）左邊界右9②毒性基因（vir）決定土壤農(nóng)桿菌對(duì)植物的感染和T-DNA的轉(zhuǎn)移，

進(jìn)入和整合。使根癌農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性。③Con區(qū)(regionsencodingconjugations，接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū))：該區(qū)段上存在與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移的有關(guān)基因，調(diào)控Ti質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。④Ori區(qū)(originofreplication，復(fù)制起始區(qū))：Ori區(qū)上的基因調(diào)控Ti質(zhì)粒的自我復(fù)制。②毒性基因（vir）決定土壤農(nóng)桿菌對(duì)植物的感染和T-DNA10第八章植物基因工程總結(jié)課件11第一步:植物受傷乙酰丁香酮、羥基乙酰丁香酮誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒的毒性基因表達(dá)。第二步感染植物膿桿菌吸附于植物的表面?zhèn)诓课坏谌蕉拘曰颍╲ir）表達(dá)第四步T-DNA轉(zhuǎn)移單鏈T-DNA被切下來(lái)，整合到植物基因組中。第五步誘導(dǎo)冠癭瘤T-DNA上的產(chǎn)物催化產(chǎn)生過(guò)量的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，形成植物冠癭瘤。(2).農(nóng)桿菌的感染和生存第一步:植物受傷(2).農(nóng)桿菌的感染和生存12裸子植物、雙子葉被子植物、禾谷類單子葉植物（玉米）能夠自發(fā)地整合到植物的染色體上。能轉(zhuǎn)化多種植物。強(qiáng)啟動(dòng)子

(3).Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的對(duì)象(4).Ti質(zhì)粒作為載體的可能性T-DNA的opine合成酶基因上有一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子，能啟動(dòng)外源基因的表達(dá)。裸子植物、雙子葉被子植物、禾谷類單子葉植物（玉米）能夠自發(fā)13野生型Ti分子大（200kb）操作起來(lái)十分麻煩；各種限制型酶切位點(diǎn)多，切割產(chǎn)生很大片段。且單一的酶切位點(diǎn)很少；tms和tmr基因產(chǎn)物干擾植物內(nèi)源激素的平衡，產(chǎn)生冠癭瘤，阻礙轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的分化和再生；無(wú)大腸桿菌的復(fù)制起點(diǎn)和作為轉(zhuǎn)化載體的選擇標(biāo)記基因。(5)

天然Ti質(zhì)粒作載體的缺點(diǎn)野生型Ti分子大（200kb）操作起來(lái)十分麻煩；(5)天14（6）Ti質(zhì)粒的改造除去T-DNA上的tmt，tms和tmr生物合成基因；除去Ti質(zhì)粒的其它非必需序列，安裝大腸桿菌復(fù)制子，安裝植物細(xì)胞的篩選標(biāo)記，如neor基因，使用植物基因的啟動(dòng)子和polyA化信號(hào)序列；插入人工多克隆位點(diǎn)，以利于外源基因的克隆。（6）Ti質(zhì)粒的改造15改造后的Ti質(zhì)粒載體模式leftrightMCSAMProriVirselect改造后的Ti質(zhì)粒載體模式leftrightMAMProri16(7)Ti載體的類型共整合載體（cointegratevectors）由比利時(shí)科學(xué)家P.Zambrisky等1983年改造的pGV3850受體載體，需要同源重組才能插入外源基因。雙元載體（binaryvectors）既有大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)也有農(nóng)桿菌復(fù)制起點(diǎn)，是個(gè)穿梭載體。(7)Ti載體的類型共整合載體（cointegratev17①pGV3850特點(diǎn)：外源基因不能直接插入，需要借助于pBR322質(zhì)粒作為中間載體選擇標(biāo)記膿桿菌選擇標(biāo)記宿主土壤農(nóng)桿菌的選擇標(biāo)記是位于中間載體pBR322上的卡那霉素抗性（Kanr）基因。卡那霉素抗性（Kanr）基因（卡那霉素對(duì)植物有劇毒?。┳罱K受體植物的選擇標(biāo)記位于T-DNA右半部分的胭脂堿合成酶基因（nos）。①pGV385018第八章植物基因工程總結(jié)課件19外源基因插入pGV3850的過(guò)程外源基因插入pGV3850的過(guò)程20外源基因KanrpBR322土壤農(nóng)桿菌含pGV3850植物組織卡那霉素篩選胭脂堿篩選抗卡那霉素的土壤農(nóng)桿菌外源基因表達(dá)鑒定轉(zhuǎn)化插入感染pBR322與pGV3850重組整合到染色體上pBR322不能在土壤農(nóng)桿菌中復(fù)制，只能同pGV3850重組。只有這樣，土壤農(nóng)桿菌才能得到抗卡那霉素性狀。外源基因KanrpBR322土壤農(nóng)桿菌植物組織卡那霉素篩21轉(zhuǎn)化后可誘導(dǎo)愈傷組織分化成轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)化后可誘導(dǎo)愈傷組織分化成轉(zhuǎn)基因植物22共整合轉(zhuǎn)化程序第八章植物基因工程總結(jié)課件23②雙元載體（binaryvectors）能在大腸桿菌和農(nóng)桿菌中復(fù)制，是穿梭載體。雙元載體的結(jié)構(gòu)Ti質(zhì)粒被剔除了T-DNA、冠癭堿代謝基因、vir基因。大幅度減小質(zhì)粒的體積。（<10kb）Ti的精髓：Vir基因（轉(zhuǎn)移）和左右界（整合）②雙元載體（binaryvectors）Ti的精髓：Vir24第八章植物基因工程總結(jié)課件25雙元載體的轉(zhuǎn)化基因插入轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌之前，所有的克隆步驟都在大腸桿菌里操作。幫助質(zhì)粒（helperplasmid）受體農(nóng)桿菌內(nèi)要求帶有整套vir基因（但缺失T-DNA及左右邊界）的“幫助質(zhì)?！碧峁﹙ir產(chǎn)物。雙元載體的轉(zhuǎn)化26左右外源基因雙元載體Vir幫助質(zhì)粒農(nóng)桿菌Vir農(nóng)桿菌左右外源基因感染植物轉(zhuǎn)化左右外源基因進(jìn)入植物細(xì)胞核，整合，表達(dá)E.coli左右外源基因雙元載體Vir幫助質(zhì)粒農(nóng)桿菌Vir農(nóng)桿菌左右外源27雙元系統(tǒng)是穿梭質(zhì)粒和Ti質(zhì)粒兩個(gè)質(zhì)粒

，在接合后可以自主性地共存于同一農(nóng)桿菌細(xì)胞中。穿梭質(zhì)粒編碼植物選擇標(biāo)記、表達(dá)信號(hào)、多克隆位點(diǎn)、兩個(gè)T-DNA雙元系統(tǒng)中的Ti具有Vir基因和農(nóng)桿菌復(fù)制起始子(OriA)，但沒(méi)有T-DNA邊界序列。接合后，兩個(gè)質(zhì)?？梢宰灾鞴泊嬗谕晦r(nóng)桿菌細(xì)胞中。穿梭質(zhì)?？稍谵r(nóng)桿菌內(nèi)自主復(fù)制插入外源基因的重組穿梭質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)化含有Ti質(zhì)粒的根瘤農(nóng)桿菌，經(jīng)篩選后直接感染植物細(xì)胞。雙元系統(tǒng)的特點(diǎn)雙元系統(tǒng)是穿梭質(zhì)粒和Ti質(zhì)粒兩個(gè)質(zhì)粒，在接合后可以自主性地28第三節(jié)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)在植物品種改良中的應(yīng)用控制果實(shí)成熟的轉(zhuǎn)基因植物抗病蟲(chóng)害的轉(zhuǎn)基因植物抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植物改變花卉形狀和顏色的轉(zhuǎn)基因植物抗環(huán)境壓力的轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)高品質(zhì)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因植物第三節(jié)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)在植物品種改良中的應(yīng)用29轉(zhuǎn)基因育種的程序基因分離體外重組轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化體安全性評(píng)價(jià)結(jié)合常規(guī)育種轉(zhuǎn)基因品種遺傳穩(wěn)定性評(píng)價(jià)市場(chǎng)開(kāi)發(fā)載體的構(gòu)建農(nóng)桿菌介導(dǎo)基因槍轟擊篩選轉(zhuǎn)基因育種的程序基因分離體外重組轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化體安全性評(píng)價(jià)結(jié)合常規(guī)30

轉(zhuǎn)基因植物引發(fā)的安全事件英國(guó)Pusztai事件康奈爾大學(xué)斑蝶事件加拿大“超級(jí)雜草”事件墨西哥玉米事件中國(guó)Bt抗蟲(chóng)棉事件七、轉(zhuǎn)基因生物潛在危害轉(zhuǎn)基因植物引發(fā)的安全事件七、轉(zhuǎn)基因生物潛在危害31

潛在危害轉(zhuǎn)基因食品可能具有毒性;轉(zhuǎn)基因食品可能產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng);抗生素標(biāo)記基因可能使人和動(dòng)物產(chǎn)生抗藥性;病毒重組,發(fā)生基因重組,產(chǎn)生新的病毒,產(chǎn)生變異,或產(chǎn)生新病毒轉(zhuǎn)基因作物的生態(tài)安全性問(wèn)題轉(zhuǎn)基作物本身可能演變?yōu)檗r(nóng)田雜草潛在危害32對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響：植物的“轉(zhuǎn)基因逃逸”種苗的散失/殘缺組織的再生花粉的傳播對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響：植物的“轉(zhuǎn)基因逃逸”33

“轉(zhuǎn)基因逃逸”造成的危害：誘發(fā)害蟲(chóng)和野草的抗性問(wèn)題誘發(fā)基因轉(zhuǎn)移跨越物種屏障誘發(fā)自然生物種群的改變基因污染食物鏈的破壞“轉(zhuǎn)基因逃逸”造成的危害：34演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！35第八章植物基因工程第八章植物基因工程36轉(zhuǎn)基因植物將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)，獲得能夠表達(dá)外源基因的植物稱為轉(zhuǎn)基因植物。抗蟲(chóng)抗病抗逆生產(chǎn)藥物轉(zhuǎn)基因植物37第一節(jié)植物的轉(zhuǎn)基因技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線轉(zhuǎn)基因的受體系統(tǒng)外源基因?qū)胫参锏姆椒ǖ谝还?jié)植物的轉(zhuǎn)基因技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)38一、植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線分離目的基因?qū)⒛康幕蚺c載體連接，形成重組DNA利用細(xì)菌繁殖擴(kuò)增重組DNA將與表達(dá)載體相連的重組DNA導(dǎo)入到目標(biāo)植物的細(xì)胞中篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，并誘導(dǎo)產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植株轉(zhuǎn)基因植株大規(guī)模種植一、植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本路線39三、外源基因?qū)胫参锏姆椒ǎㄒ唬〥NA直接轉(zhuǎn)移法化學(xué)刺激法PEG、PNA（肽核酸）、磷酸鈣、氯化鈣電擊法基因槍法花粉通道法將外源DNA片段在自花授粉后的特定時(shí)期注入柱頭或花柱，外源DNA沿花粉管通道或傳遞組織通過(guò)珠心進(jìn)入胚囊，轉(zhuǎn)化不具備細(xì)胞壁的受精卵，合子或早期胚體細(xì)胞。三、外源基因?qū)胫参锏姆椒?0（二）載體介導(dǎo)法Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序植物病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染程序（略）（二）載體介導(dǎo)法411Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)與功能雙子葉植物尤其豆科植物的根部常常會(huì)由于植物根部被土壤桿菌農(nóng)桿根瘤菌（A.tumefaciens）形成根瘤，其致瘤特性是由該菌細(xì)胞內(nèi)的野生型質(zhì)粒Ti質(zhì)粒（Tumor-inducingplasmid）介導(dǎo)的，又稱腫瘤誘導(dǎo)質(zhì)粒。1Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)化程序42（1）Ti質(zhì)粒的圖譜區(qū)整個(gè)質(zhì)粒160-240kb

T-DNA區(qū)、Vir區(qū)、Con區(qū)、Ori區(qū)（1）Ti質(zhì)粒的圖譜區(qū)43①轉(zhuǎn)移DNA

T-DNA（transfer-DNA）左邊界右邊界生長(zhǎng)素基因細(xì)胞分裂素基因冠癭堿合成tmstmttmrT-DNA12-24kbtms的編碼：合成吲哚乙酸t(yī)mr的編碼：合成植物分裂素tmt的編碼：合成氨基酸衍生物冠癭堿在T-DNA的兩端還含有左右2個(gè)邊界，長(zhǎng)為25bp的末端重復(fù)順序，在切除及整合過(guò)程具有重要意義。①轉(zhuǎn)移DNAT-DNA（transfer-DNA）左邊界右44②毒性基因（vir）決定土壤農(nóng)桿菌對(duì)植物的感染和T-DNA的轉(zhuǎn)移，

進(jìn)入和整合。使根癌農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性。③Con區(qū)(regionsencodingconjugations，接合轉(zhuǎn)移編碼區(qū))：該區(qū)段上存在與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移的有關(guān)基因，調(diào)控Ti質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。④Ori區(qū)(originofreplication，復(fù)制起始區(qū))：Ori區(qū)上的基因調(diào)控Ti質(zhì)粒的自我復(fù)制。②毒性基因（vir）決定土壤農(nóng)桿菌對(duì)植物的感染和T-DNA45第八章植物基因工程總結(jié)課件46第一步:植物受傷乙酰丁香酮、羥基乙酰丁香酮誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒的毒性基因表達(dá)。第二步感染植物膿桿菌吸附于植物的表面?zhèn)诓课坏谌蕉拘曰颍╲ir）表達(dá)第四步T-DNA轉(zhuǎn)移單鏈T-DNA被切下來(lái)，整合到植物基因組中。第五步誘導(dǎo)冠癭瘤T-DNA上的產(chǎn)物催化產(chǎn)生過(guò)量的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，形成植物冠癭瘤。(2).農(nóng)桿菌的感染和生存第一步:植物受傷(2).農(nóng)桿菌的感染和生存47裸子植物、雙子葉被子植物、禾谷類單子葉植物（玉米）能夠自發(fā)地整合到植物的染色體上。能轉(zhuǎn)化多種植物。強(qiáng)啟動(dòng)子

(3).Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的對(duì)象(4).Ti質(zhì)粒作為載體的可能性T-DNA的opine合成酶基因上有一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子，能啟動(dòng)外源基因的表達(dá)。裸子植物、雙子葉被子植物、禾谷類單子葉植物（玉米）能夠自發(fā)48野生型Ti分子大（200kb）操作起來(lái)十分麻煩；各種限制型酶切位點(diǎn)多，切割產(chǎn)生很大片段。且單一的酶切位點(diǎn)很少；tms和tmr基因產(chǎn)物干擾植物內(nèi)源激素的平衡，產(chǎn)生冠癭瘤，阻礙轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的分化和再生；無(wú)大腸桿菌的復(fù)制起點(diǎn)和作為轉(zhuǎn)化載體的選擇標(biāo)記基因。(5)

天然Ti質(zhì)粒作載體的缺點(diǎn)野生型Ti分子大（200kb）操作起來(lái)十分麻煩；(5)天49（6）Ti質(zhì)粒的改造除去T-DNA上的tmt，tms和tmr生物合成基因；除去Ti質(zhì)粒的其它非必需序列，安裝大腸桿菌復(fù)制子，安裝植物細(xì)胞的篩選標(biāo)記，如neor基因，使用植物基因的啟動(dòng)子和polyA化信號(hào)序列；插入人工多克隆位點(diǎn)，以利于外源基因的克隆。（6）Ti質(zhì)粒的改造50改造后的Ti質(zhì)粒載體模式leftrightMCSAMProriVirselect改造后的Ti質(zhì)粒載體模式leftrightMAMProri51(7)Ti載體的類型共整合載體（cointegratevectors）由比利時(shí)科學(xué)家P.Zambrisky等1983年改造的pGV3850受體載體，需要同源重組才能插入外源基因。雙元載體（binaryvectors）既有大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)也有農(nóng)桿菌復(fù)制起點(diǎn)，是個(gè)穿梭載體。(7)Ti載體的類型共整合載體（cointegratev52①pGV3850特點(diǎn)：外源基因不能直接插入，需要借助于pBR322質(zhì)粒作為中間載體選擇標(biāo)記膿桿菌選擇標(biāo)記宿主土壤農(nóng)桿菌的選擇標(biāo)記是位于中間載體pBR322上的卡那霉素抗性（Kanr）基因。卡那霉素抗性（Kanr）基因（卡那霉素對(duì)植物有劇毒?。┳罱K受體植物的選擇標(biāo)記位于T-DNA右半部分的胭脂堿合成酶基因（nos）。①pGV385053第八章植物基因工程總結(jié)課件54外源基因插入pGV3850的過(guò)程外源基因插入pGV3850的過(guò)程55外源基因KanrpBR322土壤農(nóng)桿菌含pGV3850植物組織卡那霉素篩選胭脂堿篩選抗卡那霉素的土壤農(nóng)桿菌外源基因表達(dá)鑒定轉(zhuǎn)化插入感染pBR322與pGV3850重組整合到染色體上pBR322不能在土壤農(nóng)桿菌中復(fù)制，只能同pGV3850重組。只有這樣，土壤農(nóng)桿菌才能得到抗卡那霉素性狀。外源基因KanrpBR322土壤農(nóng)桿菌植物組織卡那霉素篩56轉(zhuǎn)化后可誘導(dǎo)愈傷組織分化成轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)化后可誘導(dǎo)愈傷組織分化成轉(zhuǎn)基因植物57共整合轉(zhuǎn)化程序第八章植物基因工程總結(jié)課件58②雙元載體（binaryvectors）能在大腸桿菌和農(nóng)桿菌中復(fù)制，是穿梭載體。雙元載體的結(jié)構(gòu)Ti質(zhì)粒被剔除了T-DNA、冠癭堿代謝基因、vir基因。大幅度減小質(zhì)粒的體積。（<10kb）Ti的精髓：Vir基因（轉(zhuǎn)移）和左右界（整合）②雙元載體（binaryvectors）Ti的精髓：Vir59第八章植物基因工程總結(jié)課件60雙元載體的轉(zhuǎn)化基因插入轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌之前，所有的克隆步驟都在大腸桿菌里操作。幫助質(zhì)粒（helperplasmid）受體農(nóng)桿菌內(nèi)要求帶有整套vir基因（但缺失T-DNA及左右邊界）的“幫助質(zhì)?！碧峁﹙ir產(chǎn)物。雙元載體的轉(zhuǎn)化61左右外源基因雙元載體Vir幫助質(zhì)粒農(nóng)桿菌Vir農(nóng)桿菌左右外源基因感染植物轉(zhuǎn)化左右外源基因進(jìn)入植物細(xì)胞核，整合，表達(dá)E.coli左右外源基因雙元載體Vir幫助質(zhì)粒農(nóng)桿菌Vir農(nóng)桿菌左右外源62雙元系統(tǒng)是穿梭質(zhì)粒和Ti質(zhì)粒兩個(gè)質(zhì)粒

，在接合后可以自主性地共存于同一農(nóng)桿菌細(xì)胞中。穿梭質(zhì)粒編碼植物選擇標(biāo)記、表達(dá)信號(hào)、多克隆位點(diǎn)、兩個(gè)T-DNA雙元系統(tǒng)中的Ti具有Vir基因和