乙醇脫氫酶(ADH)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

第第3頁(yè)，共2頁(yè)貨號(hào)規(guī)格管/96樣乙醇脫氫酶（ADH）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)微量法注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義：ADH重要作用。哺乳動(dòng)物ADHADHADH測(cè)定原理：ADHNADHNAD+，NADH340nmNAD+340nmADH自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。試劑組成和配制：試劑一：液體×1瓶，室溫保存。試劑二：液體×1，4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中，4℃試劑三：粉劑×1，－20℃保存。試劑四：液體×1支，4℃保存。粗酶液提?。?（g：試劑一體積(mL)1：5~10（0.1g1mL）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃20min，取上清置冰上待測(cè)。2104個(gè)：試劑一體積mL）為500~1001（建議1mL，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（300w，373mi；16000g，4℃20min，取上清液置冰上待測(cè)。3、血清等液體：直接測(cè)定。ADH測(cè)定操作：分光光度計(jì)/30min，340nm，蒸餾水調(diào)零。25℃30min?？瞻坠埽涸谖⒘渴⒈壬?9620μL160μL20μL340nm15s75sA2?！鰽=A1-A2。測(cè)定管：在微量石英比色皿/9620μL160μL20μL340nm15s75sA4?！鰽=A3-A4。注意：空白管只需測(cè)定一次。計(jì)算公式：使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下按照蛋白濃度計(jì)算活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/mgprot)=[(△A測(cè)定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106]÷(Cpr×V樣)÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/g=[(△A–△A)÷ε÷d×V×106樣總)÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)÷W按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/104cell)[(△A–△A)÷ε÷d×V×106×V樣÷V樣總)÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計(jì)算活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/mL)=[(△A測(cè)定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106]÷V樣÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)ε：NADH，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1L；Cpr：中上清液體積，20μL=0.02mL；V，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。96按照蛋白濃度計(jì)算活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/mgprot)=[(△A測(cè)定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106]÷(Cpr×V樣)÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/g=[(△A–△A)÷ε÷d×V×106樣總)÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)÷W按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/104cell)[(△A–△A)÷ε÷d×V×106×V樣÷V樣總)÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計(jì)算活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1μmolNADH為1個(gè)酶活單位。ADH(μmol/min/mL)=[(△A測(cè)定管–△A空白管)÷ε÷d×V反總×106]÷V樣÷T=1.61×(△A測(cè)定管–△A空白管