臨床生化干擾實(shí)驗(yàn)批準(zhǔn)指南-課件

臨床生化干擾實(shí)驗(yàn)批準(zhǔn)指南臨床生化干擾實(shí)驗(yàn)批準(zhǔn)指南1作用

對(duì)廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛在干擾物質(zhì),量化干擾效應(yīng),證實(shí)病人樣本中的干擾,確認(rèn)分析方法對(duì)干擾物質(zhì)的敏感性,評(píng)估潛在的風(fēng)險(xiǎn),并將有意義的干擾聲明提供給用戶。關(guān)于臨床實(shí)驗(yàn)室來說,通過EP7的調(diào)查策略,規(guī)定數(shù)據(jù)收集和分析要求,確認(rèn)干擾聲明,研究明確的干擾物質(zhì)帶來的結(jié)果差異,確保分析方法符合臨床要求。作用對(duì)廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛2主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論適用范圍干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)干擾分析前的質(zhì)量保證干擾測定用病人標(biāo)本評(píng)價(jià)干擾建立、確認(rèn)和驗(yàn)證干擾聲明調(diào)查分析與臨床不一致的病人結(jié)果主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論3術(shù)語分析物(Analyte):實(shí)驗(yàn)室測試的物質(zhì)或者成分干擾物(Interferent):樣本中不同于分析物并能引起測量偏倚的成分干擾:在臨床生化中,由于另一成分影響或樣本的特性,待測一定濃度的被分析物出現(xiàn)有臨床意義的偏倚干擾標(biāo)準(zhǔn):干擾物所允許的最大結(jié)果偏倚干擾敏感度:某一分析方法對(duì)來自其他成分或者樣本特性的干擾引起誤差的敏感性

術(shù)語分析物(Analyte):實(shí)驗(yàn)室測試的物質(zhì)或者成分4術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述干擾篩選:分析系統(tǒng)評(píng)價(jià)中,利用高濃度樣品進(jìn)行一系列能鑒別有估計(jì)發(fā)生干擾的物質(zhì)差異結(jié)果//異常結(jié)果//假性結(jié)果(Discrepantresult//Anomalousresults//Spuriousresults):一種與臨床不一致的結(jié)果,或同一標(biāo)本的另一個(gè)不同結(jié)果,或與其他方法不同結(jié)果,或與已確定的臨床診斷不相符的結(jié)果術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述5

術(shù)語內(nèi)源性干擾:樣本中的一些生理物質(zhì)(例如膽紅素、血紅蛋白),可對(duì)另一些物質(zhì)分析時(shí)引起干擾。外源性干擾:一種源自體外的物質(zhì)(例如,藥物或其代謝物,防腐劑,污染物),可對(duì)樣本中另一物質(zhì)的分析引起干擾。術(shù)語內(nèi)源性干擾6術(shù)語驗(yàn)證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),證實(shí)能夠滿足某期望用途的特定要求。(users’requirementshavebeenmet(e、g、,accuracyrequirementsforpatients’results)確認(rèn)(verification):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),確認(rèn)滿足了特定的要求。(specifiedcriteriahavebeenmet(e、g、,interferencecriteriaorinterferenceclaims)術(shù)語驗(yàn)證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù)7適用范圍1、適用大部分析方法和儀器,特別方法估計(jì)需要必要的調(diào)整,如分離技術(shù)和免疫學(xué)分析方法在附錄A中被討論。2、血清、血漿、全血、腦脊液、尿和其它大多數(shù)體液等標(biāo)本類型都可用本指南評(píng)估適用范圍1、適用大部分析方法和儀器83、適用以下干擾物質(zhì):

病理情況下的代謝物,如膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等;病人治療期間引入的物質(zhì),如藥物、腸外營養(yǎng)、血漿代用品、抗凝劑等;病人吸收的物質(zhì),如藥品濫用、營養(yǎng)補(bǔ)充等;標(biāo)本準(zhǔn)備引入的物質(zhì),如抗凝劑、防腐劑等;標(biāo)本處理過程中引入的污染物,如手霜、滑石粉、促凝劑等;標(biāo)本自身的基質(zhì)效應(yīng),其理化性質(zhì)跟理想的新鮮標(biāo)本不同。適用范圍3、適用以下干擾物質(zhì):適用范圍91、干擾對(duì)不準(zhǔn)確度的影響

不準(zhǔn)確度(總分析誤差)包括不周密度、方法特異性偏倚和樣本特異性偏倚(干擾),對(duì)干擾物質(zhì)的敏感性能夠引起系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差?；靖拍罨靖拍?02、分析前效應(yīng)

分析前分析物或者它的濃度的改變通常稱為“分析前效應(yīng)”,這些作用估計(jì)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的臨床應(yīng)用,但不能視作“分析干擾”。這些作用:體內(nèi)藥物作用,如使用藥物后因生理響應(yīng)使激素濃度變化標(biāo)本處理,由于蒸發(fā)、溶血或者血清長時(shí)間不分離使電解質(zhì)、蛋白、水含量改變標(biāo)本收集,如在靜脈滴注時(shí)(內(nèi)含分析物)取樣

基本概念2、分析前效應(yīng)基本概念113、絕對(duì)干擾與相對(duì)干擾

干擾作用可看成是絕對(duì)的或相對(duì)的絕對(duì)干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),一旦它的存在即會(huì)引起干擾。相對(duì)干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),其含量相關(guān)于混合樣品中的平均濃度,不同病人樣品中含有該物質(zhì)的濃度變化引起干擾作用的變化,相對(duì)干擾作用在臨床實(shí)驗(yàn)中更有意義?；靖拍?、絕對(duì)干擾與相對(duì)干擾基本概念12基本概念

相對(duì)干擾一些方法能夠校正干擾物的平均濃度做補(bǔ)償,以使病人標(biāo)本中的干擾效應(yīng)減小到最低,有代表性的方法包括樣品前處理、設(shè)置空白對(duì)比、標(biāo)準(zhǔn)血清校準(zhǔn)和數(shù)學(xué)校正,當(dāng)干擾物的濃度大于或者小于病人樣本中的平均濃度時(shí)將引起誤差。基本概念

相對(duì)干擾13基本概念4、干擾機(jī)制由于某干擾物的存在以多種方式影響分析過程,主要機(jī)制:物理作用干擾物具有的物理性質(zhì),使它與分析物一樣被檢測出來,如顏色、光散射(光吸收)、洗脫位置、電極響應(yīng)等。干擾物估計(jì)會(huì)改變標(biāo)本的物理特性,如表面張力、黏度、濁度、離子強(qiáng)度等,干擾檢測結(jié)果?；靖拍?、干擾機(jī)制14基本概念干擾機(jī)制化學(xué)作用

干擾物估計(jì)會(huì)影響酶活力,例如,阻止金屬激活劑結(jié)合到活性中心上去,氧化必須的巰基等。干擾物也可破壞或阻止反應(yīng),例如,破壞試劑或抑止指示反應(yīng)。干擾物也可改變分析物的形式,例如,形成復(fù)合物或沉淀?；靖拍罡蓴_機(jī)制15基本概念4、干擾機(jī)制非特異性干擾物估計(jì)和分析物以同樣的方式參與反應(yīng),例如,苦味酸肌酐方法中酮酸干擾,重氮膽紅素方法重吲哚酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學(xué)方法中干擾物和抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。例如,茶堿方法中咖啡因的干擾?；靖拍?、干擾機(jī)制16基本概念4、干擾機(jī)制水取代作用非水物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)),由于取代了血漿中部分水體積,影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用,取決于要求的結(jié)果是以總體積的濃度表示,依然以血漿水的濃度來表示。基本概念4、干擾機(jī)制17干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)

為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)操作之前就確定。建立可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí),必須考慮臨床意義和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義兩者之間的差別。干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)操181、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)基于生理變異源于臨床經(jīng)驗(yàn)基于被分析物變異干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)

1、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)192、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義在確定一個(gè)物質(zhì)是否存在干擾前,首先確定所得到的結(jié)果是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、分析物檢測濃度干擾應(yīng)該在兩種醫(yī)學(xué)決定濃度被評(píng)估,假如在一種濃度上進(jìn)行測試,要注意有估計(jì)漏過在其他分析物濃度水平上有臨床意義的干擾。干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)2、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)20干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度決定一種物質(zhì)在“最壞情況”的條件下是否會(huì)產(chǎn)生干擾,干擾篩選應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室期望觀察到的最高濃度水平的病人樣本中進(jìn)行。5、潛在的干擾物質(zhì)干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度21干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個(gè)干擾實(shí)驗(yàn)之前,必須進(jìn)行:培訓(xùn)和熟悉周密度確認(rèn)--EP5《臨床生化設(shè)備性能的周密度評(píng)價(jià)》準(zhǔn)確度確認(rèn)--EP9《利用病人樣本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評(píng)估》攜帶污染評(píng)價(jià)質(zhì)量控制--C24《內(nèi)部質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn):原理和定義》標(biāo)準(zhǔn)化防范—M29《實(shí)驗(yàn)室工作人員幸免職業(yè)感染》安全性和廢物處置--參照廠商的標(biāo)簽和材料安全數(shù)據(jù)表(MSDS)干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個(gè)干擾實(shí)驗(yàn)之前,必須進(jìn)行:22干擾測定(Determinationofinterferencecharacteristics)第一種方法:評(píng)價(jià)潛在的干擾物添加到樣本后的干擾效應(yīng)(干擾篩選)第二種方法:評(píng)價(jià)個(gè)別有代表性的病人結(jié)果與高特異性的比較方法的結(jié)果偏倚(用病人標(biāo)本評(píng)價(jià)干擾)干擾測定(Determinationofinterfer23干擾篩選

將陽性干擾物加入測定樣品中,與不加的對(duì)比組比較有無偏移,稱為“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn)。一般最有效的方法是在較高濃度下對(duì)系列估計(jì)的干擾物作初步篩選,假如臨床顯著意義,則該物質(zhì)不是干擾物,無須進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。反之,具有臨床顯著意義的,應(yīng)進(jìn)一步評(píng)價(jià)以確定干擾物濃度與干擾程度間的關(guān)系,這類實(shí)驗(yàn)稱為“劑量效應(yīng)”(dose－response)實(shí)驗(yàn)干擾篩選將陽性干擾物加入測定24實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、測試組和對(duì)比組在同一個(gè)分析批內(nèi)完成;2、計(jì)算重復(fù)測量次數(shù):有臨床意義的最小差異值;假設(shè)檢驗(yàn)水準(zhǔn);重復(fù)性(批內(nèi)周密度)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、測試組和對(duì)比組在同一個(gè)分析批內(nèi)完成;25實(shí)驗(yàn)材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)

從幾個(gè)健康的、沒有進(jìn)行藥物治療的個(gè)體獲得適當(dāng)類型(血清、尿等)的新鮮樣本,基礎(chǔ)樣本應(yīng)能反映樣本基質(zhì),能反映分析物的特點(diǎn)。合適的冰凍或凍干樣本,確認(rèn)測試材料是否與臨床樣本相似計(jì)算所需樣本量測定基礎(chǔ)標(biāo)本中分析物的濃度并用合適的純物質(zhì)調(diào)整測試管的分析物濃度到醫(yī)學(xué)決定濃度,應(yīng)幸免加入分析物時(shí)引入其他物質(zhì),推薦的分析物測試濃度見附錄B。實(shí)驗(yàn)材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)26實(shí)驗(yàn)材料2、貯存液獲得合適而純的潛在干擾物,或者該物質(zhì)最接近體內(nèi)循環(huán)狀態(tài)的形式選擇一種能夠充分溶解分析物的溶劑盡估計(jì)小地稀釋樣本基質(zhì),最好小于5%。假如溶解度允許,通常配制成濃縮的20倍的貯存溶液有機(jī)溶劑需要特別的對(duì)待,氯仿至少要求1:100的稀釋倍數(shù),乙醇濃度大于1～2％時(shí)能夠使抗體變性。實(shí)驗(yàn)材料2、貯存液273、對(duì)比樣本用制備貯存液相同體積的溶劑替代測試干擾物,其他要求與測試樣本相同。假如對(duì)比樣本中存在測試物質(zhì)(比如膽紅素),使用合適的分析方法確定它的濃度。假如對(duì)比樣本中被分析物濃度與基礎(chǔ)樣本中明顯的不相符,考慮溶劑為潛在的干擾物。實(shí)驗(yàn)材料3、對(duì)比樣本實(shí)驗(yàn)材料28重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)當(dāng)有效假設(shè)檢驗(yàn)不能確定干擾的方向(正的或負(fù)的)時(shí)使用雙側(cè)檢驗(yàn),當(dāng)有效假設(shè)檢驗(yàn)包括干擾的方向(正的或負(fù)的)時(shí)使用單側(cè)檢驗(yàn)重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)29重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗(yàn):Z1-/2:100(1－?)%的置信水平,z1－?

:100(1－?)％檢驗(yàn)效能,s是重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差。dmax是分析物在測試濃度范圍內(nèi)的最大允許干擾。單側(cè)檢驗(yàn):

用Z1-代替Z1-/2重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗(yàn):30

z百分位值:重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求31

z百分位值:舉例:檢測可接受干擾程度為1、5mg/dL的干擾效應(yīng),95％(＝0、05)檢驗(yàn)水準(zhǔn)時(shí),重復(fù)性(批內(nèi)周密度)為1、0mg/dL,計(jì)算重復(fù)次數(shù):重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求32批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):

95％(＝0、05)檢驗(yàn)水準(zhǔn)時(shí)檢測不同的干擾效應(yīng)所需的重測次數(shù)如下:

重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求33批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):舉例在1mg/dL肌酐濃度水平,批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差為0、075mg/dL,實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為0、1mg/dL是一個(gè)有意義的干擾。需要測定多少次,估計(jì)干擾能被檢測到？首先,把不精確度表述為批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù):

0、1mg/dL/0、075mg/dL=1、33。將1、33向前舍入一位為1、3,上表決定重復(fù)測定次數(shù),得出在95％(＝0、05)檢驗(yàn)水準(zhǔn)時(shí),每個(gè)對(duì)比和測試樣品需要重復(fù)測定16次。重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求34實(shí)驗(yàn)程序

“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn):

1)合適的分析物濃度;2)建立有臨床意義差別的標(biāo)準(zhǔn)(dmax);3)確定每個(gè)樣品所需的重復(fù)測量次數(shù);4)準(zhǔn)備臨床基礎(chǔ)標(biāo)本;5)準(zhǔn)備20倍的濃縮貯存液(潛在干擾物),假如使用另外一種濃度)確定,依照步驟6和8稀釋(推薦濃度見附表C);實(shí)驗(yàn)程序

“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn):356)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,稱為測試樣品,7)用基礎(chǔ)液補(bǔ)足到刻度體積,充分混勻;8)用吸管吸取1/20容器體積的制備貯存液的溶劑到第二個(gè)容量瓶,稱為對(duì)比樣品。9)基礎(chǔ)液補(bǔ)足體積,充分混勻;10)準(zhǔn)備能夠被n整除的測試樣本和對(duì)比樣本,重復(fù)測定次數(shù)n由第三步確定;實(shí)驗(yàn)程序

6)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,3611)按交互的順序分析測試(T)和對(duì)比(C)樣本;假如檢測系統(tǒng)受攜帶污染影響,增加額外的樣本使對(duì)比樣本免受來自測試樣本攜帶污染的影響。增加的額外對(duì)比樣品Cx結(jié)果應(yīng)舍棄。12)記錄結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)程序

11)按交互的順序分析測試(T)和對(duì)比(C)樣本;實(shí)驗(yàn)程序

37數(shù)據(jù)分析、1

計(jì)算觀察到的干擾效應(yīng)的“點(diǎn)估計(jì)”,即dobs,是測試樣本均值和對(duì)比樣本均值之間的差值。2計(jì)算cut-off值ｄc(雙側(cè)檢驗(yàn))ｄnull是無效假設(shè)規(guī)定的值,通常＝0,關(guān)于單側(cè)檢驗(yàn),用Z1－取代Z1－/2

。數(shù)據(jù)分析、1計(jì)算觀察到的干擾效應(yīng)的“點(diǎn)估計(jì)”,即do383、計(jì)算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)95％置信區(qū)間＝數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)性的批內(nèi)周密度,n是每個(gè)樣本的重復(fù)測量次數(shù),t0、975n-1為t檢驗(yàn)數(shù)值表中97、5%和n-1的自由度時(shí)的值(n>30,2、0是t0、975n-1的合理近似值)。3、計(jì)算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)39結(jié)果解釋

假如點(diǎn)估計(jì)dobs值小于或等于cut-off值dc,能夠得出某種物質(zhì)引起的偏倚小于dmax;否則,接受有效假設(shè),說明由該物質(zhì)引起干擾的假設(shè)成立。結(jié)果解釋假如點(diǎn)估計(jì)dobs值小于或等于40當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時(shí)考慮以下情況:由于吸樣錯(cuò)誤,真實(shí)的干擾估計(jì)不同于觀察到的“點(diǎn)估計(jì)”。假如無效假設(shè)成立,置信限100(1－)％接受它;假如有效假設(shè)檢驗(yàn)成立,置信限100(1－?)％接受它。相反置信限分別為100

％和100?

％。假如被檢物為非人血清成分檢測,估計(jì)會(huì)引入人造物品的誤差測試濃度的隨意選擇估計(jì)不顯示干擾結(jié)果解釋當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時(shí)考慮以下情況:結(jié)果解釋41當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確定不同干擾物濃度干擾程度,干擾物不同濃度可通過最高值干擾物濃度樣本和對(duì)比樣本混合制備。一般情況下,做劑量效應(yīng)曲線時(shí)每個(gè)測試濃度水平重復(fù)測量三次足夠。如計(jì)算每個(gè)濃度所需的重復(fù)測量次數(shù),也可用附錄中公式計(jì)算?！皠┝啃?yīng)”實(shí)驗(yàn)當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確42測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本2、貯存液3、高濃度樣本---用基礎(chǔ)標(biāo)本稀釋貯存液,制備成所需的濃度。4、低濃度樣本準(zhǔn)備一組低的含平均濃度的干擾物的臨床樣本,在大多數(shù)情況下,治療藥物,或血紅蛋白、膽紅素能夠忽略不計(jì),低濃度樣本的制備可參照對(duì)比樣本的制備方法測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本43測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本,通常五個(gè)濃度足夠確定一個(gè)線性的劑量效應(yīng)關(guān)系。測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本44劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;2)確定被認(rèn)為“有臨床意義”差別,假如曾做過“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn),這一步差不多完成;3)確定在每個(gè)濃度重測次數(shù)n(見附錄E),通常3次;4)準(zhǔn)備高中低系列濃度樣本;劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;45劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量;6)在同一分析批之內(nèi)檢測5個(gè)樣本的濃度,第一組依照升序測定各樣本,第二組按降序測定,第3組依照升序等等,平均系統(tǒng)漂移影響;或按隨機(jī)順序檢測所有樣本,達(dá)到最小化漂移效應(yīng);7)計(jì)算低濃度樣本的平均值,其他各組結(jié)果中減去該低濃度樣本的平均值,然后把最終凈結(jié)果填入表格中進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量46數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點(diǎn)在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,觀察劑量效應(yīng)關(guān)系曲線的形狀:線性效應(yīng)非線性效應(yīng)數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點(diǎn)在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,47線性效應(yīng)

數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸分析,在圖上劃出回歸直線,確定適合所有數(shù)據(jù)點(diǎn),其效應(yīng)曲線是線性。線性效應(yīng)數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸48與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)

五個(gè)濃度水平的劑量效應(yīng)線性關(guān)系結(jié)果與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)五個(gè)濃度水平的劑量效49線性效應(yīng)

劑量效應(yīng)回歸分析線性效應(yīng)劑量效應(yīng)回歸分析50線性效應(yīng)

線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間改變大小的函數(shù)能夠看出,在95%置信區(qū)間內(nèi)結(jié)果最可信的是中間干擾物濃度范圍

線性效應(yīng)線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間51非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計(jì)不是一個(gè)線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)據(jù)顯示是彎曲的,那么對(duì)一個(gè)給定的干擾物濃度的干擾程度的適當(dāng)估計(jì)能夠用圖解形式表示。非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計(jì)不是一個(gè)線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)52舉例:非線性效應(yīng)五個(gè)系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果舉例:非線性效應(yīng)五個(gè)系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果53非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析

任何濃度水平的干擾物的干擾程度能夠從圖表中被估計(jì),也能夠用非線性回歸方程計(jì)算。非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析54

回歸線斜率代表每單位干擾物的偏倚,y軸上的截距表示內(nèi)源性干擾濃度的校正,通過回歸方程或者圖表,任何干擾物濃度水平的干擾程度都可被估計(jì)。假如斜率是正的,實(shí)驗(yàn)顯示該物質(zhì)引起一個(gè)正的干擾。結(jié)果解釋結(jié)果解釋55分析物和干擾物聯(lián)合評(píng)價(jià)在單一的實(shí)驗(yàn)中,干擾物濃度和分析物濃度在檢測過程中有組織設(shè)置,兩個(gè)或更多潛在干擾物能被更有效同時(shí)檢測,單一成分的干擾效應(yīng)可通過單因素分析方法評(píng)估,多因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)描述,參見Box和Hunter文獻(xiàn)。優(yōu)點(diǎn):提高效率和提供更多的信息,干擾物質(zhì)之間及干擾物與分析物之間的相互作用都能被評(píng)價(jià)。不足之處是樣本準(zhǔn)備更加復(fù)雜,增加了人為誤差發(fā)生的估計(jì)性。分析物和干擾物聯(lián)合評(píng)價(jià)在單一的實(shí)驗(yàn)中,干擾物濃度和分析物濃度56干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實(shí)干擾物估計(jì)不是原來的藥物,而是代謝產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本基體并不代表典型的有問題的臨床標(biāo)本。加入的物質(zhì)與臨床標(biāo)本中的干擾物不相同,例如,蛋白結(jié)合、沉淀,或不均一性(異質(zhì)性)。實(shí)驗(yàn)水平估計(jì)選擇得太高或太低以至不真實(shí)。干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實(shí)干擾物估計(jì)不是原來的藥物,57干擾測定第二種方法:

用病人樣本評(píng)價(jià)干擾第一種方法不論考慮多么全面,在病人的血清標(biāo)本中估計(jì)遇到意想不到的干擾。為了最大程度的減少這種情況的發(fā)生,應(yīng)該分析來自病人的真實(shí)標(biāo)本以評(píng)價(jià)內(nèi)在的不同血清標(biāo)本間的變異性。假如某個(gè)標(biāo)本中出現(xiàn)一個(gè)可重復(fù)的“離群值”,則說明該標(biāo)本中有未知的干擾物質(zhì)存在。干擾測定第二種方法:

用病58實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

被評(píng)價(jià)的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方法)同時(shí)測定兩組病人樣本(測試組和對(duì)比組),假如測試組與對(duì)比組結(jié)果出現(xiàn)有意義的偏倚,存在干擾。參考方法或比較方法對(duì)干擾物有低敏感性。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

被評(píng)價(jià)的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方59測試標(biāo)本選擇原則:疾病(例如,來自心臟病、肝病或腎病病人的標(biāo)本);藥物(例如,使用過某種想了解的藥物的病人標(biāo)本);其他不正常組分(例如,具有不正常膽紅素、脂質(zhì)、血紅蛋白或蛋白的標(biāo)本)。

測試標(biāo)本選擇原則:60對(duì)比標(biāo)本

選擇原則:沒有使用目標(biāo)藥物;潛在干擾物質(zhì)在正常濃度范圍內(nèi);相同或者相似診斷;分析物分布狀態(tài)與測試標(biāo)本相似;對(duì)比樣本必須包括在每一分析批內(nèi)。對(duì)比標(biāo)本

選擇原則:61實(shí)驗(yàn)程序1、計(jì)算測試標(biāo)本和對(duì)比標(biāo)本數(shù),取決于:兩種方法周密度;干擾效應(yīng)的大小;規(guī)定的假設(shè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)。2、挑選測試組和對(duì)比組標(biāo)本;3、選擇合適的參考方法或者效果較好的比較方法;實(shí)驗(yàn)程序1、計(jì)算測試標(biāo)本和對(duì)比標(biāo)本數(shù),取決于:624、在盡估計(jì)短的時(shí)間內(nèi)(通常在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)),用兩種方法重復(fù)測定每個(gè)樣本。5、假如觀察到偏倚存在,測定樣本中藥物或者其他潛在的干擾物質(zhì)的濃度,假如估計(jì)的話,確定偏倚和干擾物濃度兩者之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)程序4、在盡估計(jì)短的時(shí)間內(nèi)(通常在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)),用兩種方法重復(fù)63數(shù)據(jù)分析

計(jì)算測試組和對(duì)比組平均值之間的差值,并與干擾標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較,然后確定干擾能否被排除或者需要進(jìn)一步的研究。數(shù)據(jù)分析計(jì)算測試組和對(duì)比組平均值之間的差值,并與干擾標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)641、與比較方法結(jié)果作偏倚圖計(jì)算重復(fù)測定結(jié)果的均值;計(jì)算每個(gè)樣本平均偏倚(測試方法結(jié)果減去比較方法結(jié)果);作圖:偏倚在垂直軸上,比較方法濃度在水平軸,測試和對(duì)比樣本用不同的記號(hào)標(biāo)識(shí);通過線性回歸分析計(jì)算每一組的Sy,x統(tǒng)計(jì)量(比較方法＝x),它可用于計(jì)算95％置信區(qū)間。數(shù)據(jù)分析

1、與比較方法結(jié)果作偏倚圖數(shù)據(jù)分析652、估計(jì)干擾的偏倚評(píng)估:數(shù)據(jù)分析(A)相關(guān)于對(duì)比組的正偏倚

(B)相關(guān)于對(duì)比組沒有偏倚－成比例的方法偏倚

(C)相關(guān)于對(duì)比組的負(fù)的偏倚

(D)相關(guān)于對(duì)比組沒有偏倚

2、估計(jì)干擾的偏倚評(píng)估:數(shù)據(jù)分析(A)相關(guān)于對(duì)比組的正偏663、以潛在干擾物繪制偏倚曲線假如病人標(biāo)本中可疑干擾物的濃度已知,能夠判斷它是否與獲得的偏倚相關(guān)。數(shù)據(jù)分析

一種與潛在干擾物濃度相關(guān)特別好的干擾效應(yīng)3、以潛在干擾物繪制偏倚曲線數(shù)據(jù)分析一種與潛在干擾物濃度相67用病人樣本評(píng)價(jià)干擾---局限性(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)變異缺乏控制對(duì)比(2)本方法并不能確定原因與作用的關(guān)系,它只能說明偏倚與估計(jì)干擾物某水平的相對(duì)關(guān)系(3)假如標(biāo)本不新鮮,將會(huì)失去某些易變組分(例如,乙酰乙酸、CO2等)用病人樣本評(píng)價(jià)干擾---局限性(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)變異缺乏控制對(duì)比68用病人樣本評(píng)價(jià)干擾—局限性4)病人通常用多種藥物,因此,難于證實(shí)何種藥物的干擾作用5)按疾病和用藥對(duì)病人分類,不是不估計(jì),至少對(duì)許多實(shí)驗(yàn)而言是特別困難的6)實(shí)驗(yàn)是一種機(jī)遇,成功取決于在檢測的病人人群的標(biāo)本中是否有此干擾存在用病人樣本評(píng)價(jià)干擾—局限性4)病人通常用多種藥物,因此,難于697)特別少有公認(rèn)的參考方法。有的參考方法難以在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中使用。另外,參考方法估計(jì)也同樣的被干擾。

不管如何,第二種方法對(duì)證實(shí)干擾物是有用的,這也是唯一的方法可檢出藥物代謝物干擾作用,它也可肯定在真實(shí)標(biāo)本中有干擾的方法。用病人樣本評(píng)價(jià)干擾---局限性7)特別少有公認(rèn)的參考方法。有的參考方法難以在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室70建立、確認(rèn)和驗(yàn)證干擾聲明EP7-A可被廠商用于驗(yàn)證和確認(rèn)特異性,建立干擾聲明,臨床實(shí)驗(yàn)室也可用它檢驗(yàn)廠商的聲明以及確認(rèn)方法的特異性是否滿足醫(yī)學(xué)要求。建立、確認(rèn)和驗(yàn)證干擾聲明EP7-A可被廠商用于驗(yàn)證和確認(rèn)特異71干擾聲明

關(guān)于商業(yè)方法來說,已知的干擾物質(zhì)應(yīng)在使用明書中闡述,實(shí)驗(yàn)證明沒有干擾的物質(zhì)也應(yīng)該闡述,以便實(shí)驗(yàn)室能夠驗(yàn)證某種方法對(duì)它所服務(wù)的病人群體的習(xí)慣性干擾聲明關(guān)于商業(yè)方法來說,已知的干擾物質(zhì)應(yīng)在使用72干擾聲明---舉例11、干擾物系列濃度的結(jié)果依照EP7文件,對(duì)AST方法進(jìn)行干擾評(píng)價(jià)。當(dāng)下列這些物質(zhì)添加到血清中時(shí),在顯示的濃度水平處產(chǎn)生干擾,偏倚超過10％考慮為干擾。測試物質(zhì)AST25U/L的干擾濃度AST200U/L的干擾濃度注釋血紅蛋白250mg/dL325mg/dL溶血N-乙酰半胱氨酸150mg/ml300mg/ml靜脈注射治療劑量為180mg/ml干擾聲明---舉例11、干擾物系列濃度的結(jié)果測試物質(zhì)AST73干擾聲明---舉例22、膽紅素方法－兩個(gè)水平的干擾篩選依照EP7文件,對(duì)膽紅素測量方法進(jìn)行干擾評(píng)價(jià),當(dāng)血清中分析物和干擾物濃度達(dá)到表中所顯示濃度時(shí),以下物質(zhì)產(chǎn)生干擾,偏倚超過0、2mg/dL考慮為干擾。

干擾物干擾濃度分析物(mg/dl)偏倚(mg/dl)注釋血紅蛋白300g/dl300g/dl1、216、5-0、4+0、5肉眼可見溶血N-乙酰半胱氨酸90mg/dl90mg/dl1、216、5<0、2-0、6靜脈注射治療劑量對(duì)氨基水揚(yáng)酸50mg/dl50mg/dl1、216、5<0、2+0、3中毒劑量干擾聲明---舉例22、膽紅素方法－兩個(gè)水平的干擾篩選干擾物74確認(rèn)干擾聲明干擾和特異性聲明可用實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn),合適的方法依賴于聲明類型。聲明類型:(1)最大干擾聲明(干擾小于一個(gè)規(guī)定的最大值)(2)實(shí)測干擾聲明(1mg/dL鎂存在時(shí),正常血清標(biāo)本組鈣離子濃度比對(duì)比組高0、14mg/dL)(3)非定量干擾聲明(據(jù)報(bào)道甲氨蝶呤對(duì)該方法可產(chǎn)生干擾)(4)特異性聲明(水楊酸鹽對(duì)該方法不產(chǎn)生干擾)確認(rèn)干擾聲明干擾和特異性聲明可用實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn),合適的方法依賴75調(diào)查與臨床不一致的病人結(jié)果

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室間或會(huì)遇到與臨床不一致的結(jié)果,該結(jié)果估計(jì)被臨床醫(yī)生認(rèn)為與診斷不相符或者與往常結(jié)果不一致,或者在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)兩種方法檢測的結(jié)果有差異。假如實(shí)驗(yàn)室對(duì)一個(gè)特定病人的結(jié)果的差異可被重復(fù),且該方法符合標(biāo)準(zhǔn),那么出現(xiàn)的差異估計(jì)由干擾引起。調(diào)查與臨床不一致的病人結(jié)果每個(gè)實(shí)驗(yàn)室間或76調(diào)查程序(1)確認(rèn)系統(tǒng)性能(2)評(píng)價(jià)樣本質(zhì)量(3)證實(shí)最初的結(jié)果(3)確定潛在的干擾物質(zhì)(4)測定估計(jì)的干擾物(5)評(píng)價(jià)干擾效應(yīng)(6)報(bào)告廠家調(diào)查程序(1)確認(rèn)系統(tǒng)性能77感謝您的聆聽！感謝您的聆聽！78臨床生化干擾實(shí)驗(yàn)批準(zhǔn)指南臨床生化干擾實(shí)驗(yàn)批準(zhǔn)指南79作用

對(duì)廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛在干擾物質(zhì),量化干擾效應(yīng),證實(shí)病人樣本中的干擾,確認(rèn)分析方法對(duì)干擾物質(zhì)的敏感性,評(píng)估潛在的風(fēng)險(xiǎn),并將有意義的干擾聲明提供給用戶。關(guān)于臨床實(shí)驗(yàn)室來說,通過EP7的調(diào)查策略,規(guī)定數(shù)據(jù)收集和分析要求,確認(rèn)干擾聲明,研究明確的干擾物質(zhì)帶來的結(jié)果差異,確保分析方法符合臨床要求。作用對(duì)廠商來說,通過EP7程序能夠篩選潛80主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論適用范圍干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)干擾分析前的質(zhì)量保證干擾測定用病人標(biāo)本評(píng)價(jià)干擾建立、確認(rèn)和驗(yàn)證干擾聲明調(diào)查分析與臨床不一致的病人結(jié)果主要內(nèi)容干擾相關(guān)概念與理論81術(shù)語分析物(Analyte):實(shí)驗(yàn)室測試的物質(zhì)或者成分干擾物(Interferent):樣本中不同于分析物并能引起測量偏倚的成分干擾:在臨床生化中,由于另一成分影響或樣本的特性,待測一定濃度的被分析物出現(xiàn)有臨床意義的偏倚干擾標(biāo)準(zhǔn):干擾物所允許的最大結(jié)果偏倚干擾敏感度:某一分析方法對(duì)來自其他成分或者樣本特性的干擾引起誤差的敏感性

術(shù)語分析物(Analyte):實(shí)驗(yàn)室測試的物質(zhì)或者成分82術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述干擾篩選:分析系統(tǒng)評(píng)價(jià)中,利用高濃度樣品進(jìn)行一系列能鑒別有估計(jì)發(fā)生干擾的物質(zhì)差異結(jié)果//異常結(jié)果//假性結(jié)果(Discrepantresult//Anomalousresults//Spuriousresults):一種與臨床不一致的結(jié)果,或同一標(biāo)本的另一個(gè)不同結(jié)果,或與其他方法不同結(jié)果,或與已確定的臨床診斷不相符的結(jié)果術(shù)語干擾聲明:一種物質(zhì)影響分析方法結(jié)果效應(yīng)的陳述83

術(shù)語內(nèi)源性干擾:樣本中的一些生理物質(zhì)(例如膽紅素、血紅蛋白),可對(duì)另一些物質(zhì)分析時(shí)引起干擾。外源性干擾:一種源自體外的物質(zhì)(例如,藥物或其代謝物,防腐劑,污染物),可對(duì)樣本中另一物質(zhì)的分析引起干擾。術(shù)語內(nèi)源性干擾84術(shù)語驗(yàn)證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),證實(shí)能夠滿足某期望用途的特定要求。(users’requirementshavebeenmet(e、g、,accuracyrequirementsforpatients’results)確認(rèn)(verification):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù),確認(rèn)滿足了特定的要求。(specifiedcriteriahavebeenmet(e、g、,interferencecriteriaorinterferenceclaims)術(shù)語驗(yàn)證(validation):通過調(diào)查及提供客觀證據(jù)85適用范圍1、適用大部分析方法和儀器,特別方法估計(jì)需要必要的調(diào)整,如分離技術(shù)和免疫學(xué)分析方法在附錄A中被討論。2、血清、血漿、全血、腦脊液、尿和其它大多數(shù)體液等標(biāo)本類型都可用本指南評(píng)估適用范圍1、適用大部分析方法和儀器863、適用以下干擾物質(zhì):

病理情況下的代謝物,如膽紅素、脂肪、蛋白質(zhì)、血紅蛋白等;病人治療期間引入的物質(zhì),如藥物、腸外營養(yǎng)、血漿代用品、抗凝劑等;病人吸收的物質(zhì),如藥品濫用、營養(yǎng)補(bǔ)充等;標(biāo)本準(zhǔn)備引入的物質(zhì),如抗凝劑、防腐劑等;標(biāo)本處理過程中引入的污染物,如手霜、滑石粉、促凝劑等;標(biāo)本自身的基質(zhì)效應(yīng),其理化性質(zhì)跟理想的新鮮標(biāo)本不同。適用范圍3、適用以下干擾物質(zhì):適用范圍871、干擾對(duì)不準(zhǔn)確度的影響

不準(zhǔn)確度(總分析誤差)包括不周密度、方法特異性偏倚和樣本特異性偏倚(干擾),對(duì)干擾物質(zhì)的敏感性能夠引起系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差。基本概念基本概念882、分析前效應(yīng)

分析前分析物或者它的濃度的改變通常稱為“分析前效應(yīng)”,這些作用估計(jì)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的臨床應(yīng)用,但不能視作“分析干擾”。這些作用:體內(nèi)藥物作用,如使用藥物后因生理響應(yīng)使激素濃度變化標(biāo)本處理,由于蒸發(fā)、溶血或者血清長時(shí)間不分離使電解質(zhì)、蛋白、水含量改變標(biāo)本收集,如在靜脈滴注時(shí)(內(nèi)含分析物)取樣

基本概念2、分析前效應(yīng)基本概念893、絕對(duì)干擾與相對(duì)干擾

干擾作用可看成是絕對(duì)的或相對(duì)的絕對(duì)干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),一旦它的存在即會(huì)引起干擾。相對(duì)干擾:一般病人標(biāo)本中含有某物質(zhì),其含量相關(guān)于混合樣品中的平均濃度,不同病人樣品中含有該物質(zhì)的濃度變化引起干擾作用的變化,相對(duì)干擾作用在臨床實(shí)驗(yàn)中更有意義?；靖拍?、絕對(duì)干擾與相對(duì)干擾基本概念90基本概念

相對(duì)干擾一些方法能夠校正干擾物的平均濃度做補(bǔ)償,以使病人標(biāo)本中的干擾效應(yīng)減小到最低,有代表性的方法包括樣品前處理、設(shè)置空白對(duì)比、標(biāo)準(zhǔn)血清校準(zhǔn)和數(shù)學(xué)校正,當(dāng)干擾物的濃度大于或者小于病人樣本中的平均濃度時(shí)將引起誤差?；靖拍?/p>

相對(duì)干擾91基本概念4、干擾機(jī)制由于某干擾物的存在以多種方式影響分析過程,主要機(jī)制:物理作用干擾物具有的物理性質(zhì),使它與分析物一樣被檢測出來,如顏色、光散射(光吸收)、洗脫位置、電極響應(yīng)等。干擾物估計(jì)會(huì)改變標(biāo)本的物理特性,如表面張力、黏度、濁度、離子強(qiáng)度等,干擾檢測結(jié)果?；靖拍?、干擾機(jī)制92基本概念干擾機(jī)制化學(xué)作用

干擾物估計(jì)會(huì)影響酶活力,例如,阻止金屬激活劑結(jié)合到活性中心上去,氧化必須的巰基等。干擾物也可破壞或阻止反應(yīng),例如,破壞試劑或抑止指示反應(yīng)。干擾物也可改變分析物的形式,例如,形成復(fù)合物或沉淀。基本概念干擾機(jī)制93基本概念4、干擾機(jī)制非特異性干擾物估計(jì)和分析物以同樣的方式參與反應(yīng),例如,苦味酸肌酐方法中酮酸干擾,重氮膽紅素方法重吲哚酚硫酸鹽的干擾。在免疫化學(xué)方法中干擾物和抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。例如,茶堿方法中咖啡因的干擾?；靖拍?、干擾機(jī)制94基本概念4、干擾機(jī)制水取代作用非水物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)),由于取代了血漿中部分水體積,影響了一些分析物的測定。這些作用考慮或不考慮為干擾作用,取決于要求的結(jié)果是以總體積的濃度表示,依然以血漿水的濃度來表示?；靖拍?、干擾機(jī)制95干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)

為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)操作之前就確定。建立可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí),必須考慮臨床意義和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義兩者之間的差別。干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)為保證客觀性,可接受標(biāo)準(zhǔn)必須在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)操961、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)基于生理變異源于臨床經(jīng)驗(yàn)基于被分析物變異干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)

1、臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)972、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義在確定一個(gè)物質(zhì)是否存在干擾前,首先確定所得到的結(jié)果是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、分析物檢測濃度干擾應(yīng)該在兩種醫(yī)學(xué)決定濃度被評(píng)估,假如在一種濃度上進(jìn)行測試,要注意有估計(jì)漏過在其他分析物濃度水平上有臨床意義的干擾。干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)2、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)98干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度決定一種物質(zhì)在“最壞情況”的條件下是否會(huì)產(chǎn)生干擾,干擾篩選應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室期望觀察到的最高濃度水平的病人樣本中進(jìn)行。5、潛在的干擾物質(zhì)干擾實(shí)驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)4、干擾物檢測濃度99干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個(gè)干擾實(shí)驗(yàn)之前,必須進(jìn)行:培訓(xùn)和熟悉周密度確認(rèn)--EP5《臨床生化設(shè)備性能的周密度評(píng)價(jià)》準(zhǔn)確度確認(rèn)--EP9《利用病人樣本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評(píng)估》攜帶污染評(píng)價(jià)質(zhì)量控制--C24《內(nèi)部質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn):原理和定義》標(biāo)準(zhǔn)化防范—M29《實(shí)驗(yàn)室工作人員幸免職業(yè)感染》安全性和廢物處置--參照廠商的標(biāo)簽和材料安全數(shù)據(jù)表(MSDS)干擾分析前的質(zhì)量保證在進(jìn)行一個(gè)干擾實(shí)驗(yàn)之前,必須進(jìn)行:100干擾測定(Determinationofinterferencecharacteristics)第一種方法:評(píng)價(jià)潛在的干擾物添加到樣本后的干擾效應(yīng)(干擾篩選)第二種方法:評(píng)價(jià)個(gè)別有代表性的病人結(jié)果與高特異性的比較方法的結(jié)果偏倚(用病人標(biāo)本評(píng)價(jià)干擾)干擾測定(Determinationofinterfer101干擾篩選

將陽性干擾物加入測定樣品中,與不加的對(duì)比組比較有無偏移,稱為“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn)。一般最有效的方法是在較高濃度下對(duì)系列估計(jì)的干擾物作初步篩選,假如臨床顯著意義,則該物質(zhì)不是干擾物,無須進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。反之,具有臨床顯著意義的,應(yīng)進(jìn)一步評(píng)價(jià)以確定干擾物濃度與干擾程度間的關(guān)系,這類實(shí)驗(yàn)稱為“劑量效應(yīng)”(dose－response)實(shí)驗(yàn)干擾篩選將陽性干擾物加入測定102實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、測試組和對(duì)比組在同一個(gè)分析批內(nèi)完成;2、計(jì)算重復(fù)測量次數(shù):有臨床意義的最小差異值;假設(shè)檢驗(yàn)水準(zhǔn);重復(fù)性(批內(nèi)周密度)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、測試組和對(duì)比組在同一個(gè)分析批內(nèi)完成;103實(shí)驗(yàn)材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)

從幾個(gè)健康的、沒有進(jìn)行藥物治療的個(gè)體獲得適當(dāng)類型(血清、尿等)的新鮮樣本,基礎(chǔ)樣本應(yīng)能反映樣本基質(zhì),能反映分析物的特點(diǎn)。合適的冰凍或凍干樣本,確認(rèn)測試材料是否與臨床樣本相似計(jì)算所需樣本量測定基礎(chǔ)標(biāo)本中分析物的濃度并用合適的純物質(zhì)調(diào)整測試管的分析物濃度到醫(yī)學(xué)決定濃度,應(yīng)幸免加入分析物時(shí)引入其他物質(zhì),推薦的分析物測試濃度見附錄B。實(shí)驗(yàn)材料

1基礎(chǔ)標(biāo)本(Basepool)104實(shí)驗(yàn)材料2、貯存液獲得合適而純的潛在干擾物,或者該物質(zhì)最接近體內(nèi)循環(huán)狀態(tài)的形式選擇一種能夠充分溶解分析物的溶劑盡估計(jì)小地稀釋樣本基質(zhì),最好小于5%。假如溶解度允許,通常配制成濃縮的20倍的貯存溶液有機(jī)溶劑需要特別的對(duì)待,氯仿至少要求1:100的稀釋倍數(shù),乙醇濃度大于1～2％時(shí)能夠使抗體變性。實(shí)驗(yàn)材料2、貯存液1053、對(duì)比樣本用制備貯存液相同體積的溶劑替代測試干擾物,其他要求與測試樣本相同。假如對(duì)比樣本中存在測試物質(zhì)(比如膽紅素),使用合適的分析方法確定它的濃度。假如對(duì)比樣本中被分析物濃度與基礎(chǔ)樣本中明顯的不相符,考慮溶劑為潛在的干擾物。實(shí)驗(yàn)材料3、對(duì)比樣本實(shí)驗(yàn)材料106重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)當(dāng)有效假設(shè)檢驗(yàn)不能確定干擾的方向(正的或負(fù)的)時(shí)使用雙側(cè)檢驗(yàn),當(dāng)有效假設(shè)檢驗(yàn)包括干擾的方向(正的或負(fù)的)時(shí)使用單側(cè)檢驗(yàn)重測次數(shù)要求重測次數(shù)取決于統(tǒng)計(jì)學(xué)假設(shè)水準(zhǔn)107重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗(yàn):Z1-/2:100(1－?)%的置信水平,z1－?

:100(1－?)％檢驗(yàn)效能,s是重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差。dmax是分析物在測試濃度范圍內(nèi)的最大允許干擾。單側(cè)檢驗(yàn):

用Z1-代替Z1-/2重測次數(shù)要求雙側(cè)檢驗(yàn):108

z百分位值:重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求109

z百分位值:舉例:檢測可接受干擾程度為1、5mg/dL的干擾效應(yīng),95％(＝0、05)檢驗(yàn)水準(zhǔn)時(shí),重復(fù)性(批內(nèi)周密度)為1、0mg/dL,計(jì)算重復(fù)次數(shù):重測次數(shù)要求z百分位值:重測次數(shù)要求110批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):

95％(＝0、05)檢驗(yàn)水準(zhǔn)時(shí)檢測不同的干擾效應(yīng)所需的重測次數(shù)如下:

重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求111批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):舉例在1mg/dL肌酐濃度水平,批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差為0、075mg/dL,實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為0、1mg/dL是一個(gè)有意義的干擾。需要測定多少次,估計(jì)干擾能被檢測到？首先,把不精確度表述為批內(nèi)重復(fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù):

0、1mg/dL/0、075mg/dL=1、33。將1、33向前舍入一位為1、3,上表決定重復(fù)測定次數(shù),得出在95％(＝0、05)檢驗(yàn)水準(zhǔn)時(shí),每個(gè)對(duì)比和測試樣品需要重復(fù)測定16次。重測次數(shù)要求批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(dmax/s)的倍數(shù):重測次數(shù)要求112實(shí)驗(yàn)程序

“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn):

1)合適的分析物濃度;2)建立有臨床意義差別的標(biāo)準(zhǔn)(dmax);3)確定每個(gè)樣品所需的重復(fù)測量次數(shù);4)準(zhǔn)備臨床基礎(chǔ)標(biāo)本;5)準(zhǔn)備20倍的濃縮貯存液(潛在干擾物),假如使用另外一種濃度)確定,依照步驟6和8稀釋(推薦濃度見附表C);實(shí)驗(yàn)程序

“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn):1136)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,稱為測試樣品,7)用基礎(chǔ)液補(bǔ)足到刻度體積,充分混勻;8)用吸管吸取1/20容器體積的制備貯存液的溶劑到第二個(gè)容量瓶,稱為對(duì)比樣品。9)基礎(chǔ)液補(bǔ)足體積,充分混勻;10)準(zhǔn)備能夠被n整除的測試樣本和對(duì)比樣本,重復(fù)測定次數(shù)n由第三步確定;實(shí)驗(yàn)程序

6)用吸管吸取1/20容器體積的濃縮貯存液到容量瓶中,11411)按交互的順序分析測試(T)和對(duì)比(C)樣本;假如檢測系統(tǒng)受攜帶污染影響,增加額外的樣本使對(duì)比樣本免受來自測試樣本攜帶污染的影響。增加的額外對(duì)比樣品Cx結(jié)果應(yīng)舍棄。12)記錄結(jié)果,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)程序

11)按交互的順序分析測試(T)和對(duì)比(C)樣本;實(shí)驗(yàn)程序

115數(shù)據(jù)分析、1

計(jì)算觀察到的干擾效應(yīng)的“點(diǎn)估計(jì)”,即dobs,是測試樣本均值和對(duì)比樣本均值之間的差值。2計(jì)算cut-off值ｄc(雙側(cè)檢驗(yàn))ｄnull是無效假設(shè)規(guī)定的值,通常＝0,關(guān)于單側(cè)檢驗(yàn),用Z1－取代Z1－/2

。數(shù)據(jù)分析、1計(jì)算觀察到的干擾效應(yīng)的“點(diǎn)估計(jì)”,即do1163、計(jì)算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)95％置信區(qū)間＝數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)性的批內(nèi)周密度,n是每個(gè)樣本的重復(fù)測量次數(shù),t0、975n-1為t檢驗(yàn)數(shù)值表中97、5%和n-1的自由度時(shí)的值(n>30,2、0是t0、975n-1的合理近似值)。3、計(jì)算95％置信區(qū)間的干擾效應(yīng)數(shù)據(jù)分析s是測量方法重復(fù)117結(jié)果解釋

假如點(diǎn)估計(jì)dobs值小于或等于cut-off值dc,能夠得出某種物質(zhì)引起的偏倚小于dmax;否則,接受有效假設(shè),說明由該物質(zhì)引起干擾的假設(shè)成立。結(jié)果解釋假如點(diǎn)估計(jì)dobs值小于或等于118當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時(shí)考慮以下情況:由于吸樣錯(cuò)誤,真實(shí)的干擾估計(jì)不同于觀察到的“點(diǎn)估計(jì)”。假如無效假設(shè)成立,置信限100(1－)％接受它;假如有效假設(shè)檢驗(yàn)成立,置信限100(1－?)％接受它。相反置信限分別為100

％和100?

％。假如被檢物為非人血清成分檢測,估計(jì)會(huì)引入人造物品的誤差測試濃度的隨意選擇估計(jì)不顯示干擾結(jié)果解釋當(dāng)解釋干擾測試結(jié)果時(shí)考慮以下情況:結(jié)果解釋119當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確定不同干擾物濃度干擾程度,干擾物不同濃度可通過最高值干擾物濃度樣本和對(duì)比樣本混合制備。一般情況下,做劑量效應(yīng)曲線時(shí)每個(gè)測試濃度水平重復(fù)測量三次足夠。如計(jì)算每個(gè)濃度所需的重復(fù)測量次數(shù),也可用附錄中公式計(jì)算?！皠┝啃?yīng)”實(shí)驗(yàn)當(dāng)一種或多種分析物的濃度出現(xiàn)干擾效應(yīng),則可通過劑量效應(yīng)曲線確120測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本2、貯存液3、高濃度樣本---用基礎(chǔ)標(biāo)本稀釋貯存液,制備成所需的濃度。4、低濃度樣本準(zhǔn)備一組低的含平均濃度的干擾物的臨床樣本,在大多數(shù)情況下,治療藥物,或血紅蛋白、膽紅素能夠忽略不計(jì),低濃度樣本的制備可參照對(duì)比樣本的制備方法測試材料1、基礎(chǔ)標(biāo)本121測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本,通常五個(gè)濃度足夠確定一個(gè)線性的劑量效應(yīng)關(guān)系。測試材料5、測試樣本---制備一系列不同濃度的干擾測試樣本122劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;2)確定被認(rèn)為“有臨床意義”差別,假如曾做過“配對(duì)差異”實(shí)驗(yàn),這一步差不多完成;3)確定在每個(gè)濃度重測次數(shù)n(見附錄E),通常3次;4)準(zhǔn)備高中低系列濃度樣本;劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

1)測定待測的最高和最低標(biāo)本濃度水平;123劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量;6)在同一分析批之內(nèi)檢測5個(gè)樣本的濃度,第一組依照升序測定各樣本,第二組按降序測定,第3組依照升序等等,平均系統(tǒng)漂移影響;或按隨機(jī)順序檢測所有樣本,達(dá)到最小化漂移效應(yīng);7)計(jì)算低濃度樣本的平均值,其他各組結(jié)果中減去該低濃度樣本的平均值,然后把最終凈結(jié)果填入表格中進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序

5)依照第三步n值的大小準(zhǔn)備每份標(biāo)本量124數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點(diǎn)在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,觀察劑量效應(yīng)關(guān)系曲線的形狀:線性效應(yīng)非線性效應(yīng)數(shù)據(jù)分析將結(jié)果點(diǎn)在圖上,y軸為干擾結(jié)果,x軸上為干擾物濃度,125線性效應(yīng)

數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸分析,在圖上劃出回歸直線,確定適合所有數(shù)據(jù)點(diǎn),其效應(yīng)曲線是線性。線性效應(yīng)數(shù)據(jù)隨機(jī)分布,大約成一條直線,用最小二乘法進(jìn)行回歸126與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)

五個(gè)濃度水平的劑量效應(yīng)線性關(guān)系結(jié)果與干擾物濃度相關(guān)線性干擾舉例:線性效應(yīng)五個(gè)濃度水平的劑量效127線性效應(yīng)

劑量效應(yīng)回歸分析線性效應(yīng)劑量效應(yīng)回歸分析128線性效應(yīng)

線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間改變大小的函數(shù)能夠看出,在95%置信區(qū)間內(nèi)結(jié)果最可信的是中間干擾物濃度范圍

線性效應(yīng)線形回歸的95%可信區(qū)間范圍從干擾物濃度與置信區(qū)間129非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計(jì)不是一個(gè)線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)據(jù)顯示是彎曲的,那么對(duì)一個(gè)給定的干擾物濃度的干擾程度的適當(dāng)估計(jì)能夠用圖解形式表示。非線性效應(yīng)干擾物濃度的干擾估計(jì)不是一個(gè)線性函數(shù),假如繪圖的數(shù)130舉例:非線性效應(yīng)五個(gè)系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果舉例:非線性效應(yīng)五個(gè)系列濃度劑量響應(yīng)非線性結(jié)果131非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析

任何濃度水平的干擾物的干擾程度能夠從圖表中被估計(jì),也能夠用非線性回歸方程計(jì)算。非線性效應(yīng)非線性劑量效應(yīng)回歸分析132

回歸線斜率代表每單位干擾物的偏倚,y軸上的截距表示內(nèi)源性干擾濃度的校正,通過回歸方程或者圖表,任何干擾物濃度水平的干擾程度都可被估計(jì)。假如斜率是正的,實(shí)驗(yàn)顯示該物質(zhì)引起一個(gè)正的干擾。結(jié)果解釋結(jié)果解釋133分析物和干擾物聯(lián)合評(píng)價(jià)在單一的實(shí)驗(yàn)中,干擾物濃度和分析物濃度在檢測過程中有組織設(shè)置,兩個(gè)或更多潛在干擾物能被更有效同時(shí)檢測,單一成分的干擾效應(yīng)可通過單因素分析方法評(píng)估,多因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)描述,參見Box和Hunter文獻(xiàn)。優(yōu)點(diǎn):提高效率和提供更多的信息,干擾物質(zhì)之間及干擾物與分析物之間的相互作用都能被評(píng)價(jià)。不足之處是樣本準(zhǔn)備更加復(fù)雜,增加了人為誤差發(fā)生的估計(jì)性。分析物和干擾物聯(lián)合評(píng)價(jià)在單一的實(shí)驗(yàn)中,干擾物濃度和分析物濃度134干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實(shí)干擾物估計(jì)不是原來的藥物,而是代謝產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本基體并不代表典型的有問題的臨床標(biāo)本。加入的物質(zhì)與臨床標(biāo)本中的干擾物不相同,例如,蛋白結(jié)合、沉淀,或不均一性(異質(zhì)性)。實(shí)驗(yàn)水平估計(jì)選擇得太高或太低以至不真實(shí)。干擾篩選的局限性在臨床標(biāo)本中的真實(shí)干擾物估計(jì)不是原來的藥物,135干擾測定第二種方法:

用病人樣本評(píng)價(jià)干擾第一種方法不論考慮多么全面,在病人的血清標(biāo)本中估計(jì)遇到意想不到的干擾。為了最大程度的減少這種情況的發(fā)生,應(yīng)該分析來自病人的真實(shí)標(biāo)本以評(píng)價(jià)內(nèi)在的不同血清標(biāo)本間的變異性。假如某個(gè)標(biāo)本中出現(xiàn)一個(gè)可重復(fù)的“離群值”,則說明該標(biāo)本中有未知的干擾物質(zhì)存在。干擾測定第二種方法:

用病136實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

被評(píng)價(jià)的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方法)同時(shí)測定兩組病人樣本(測試組和對(duì)比組),假如測試組與對(duì)比組結(jié)果出現(xiàn)有意義的偏倚,存在干擾。參考方法或比較方法對(duì)干擾物有低敏感性。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

被評(píng)價(jià)的方法和參考方法(或者其他被認(rèn)定合格的比較方137測試標(biāo)本選擇原則:疾病(例如,來自心臟病、肝病或腎病病人的標(biāo)本);藥物(例如,使用過某種想了解的藥物的病人標(biāo)本);其他不正常組分(例如,具有不正常膽紅素、脂質(zhì)、血紅蛋白或蛋白的標(biāo)本)。

測試標(biāo)本選擇原則:138對(duì)比標(biāo)本

選擇原則:沒有使用目標(biāo)藥物;潛在干擾物質(zhì)在正常濃度范圍內(nèi);相同或者相似診斷;分析物分布狀態(tài)與測試標(biāo)本相似;對(duì)比樣本必須包括在每一分析批內(nèi)。對(duì)比標(biāo)本

選擇原則:139實(shí)驗(yàn)程序1、計(jì)算測試標(biāo)本和對(duì)比標(biāo)本數(shù),取決于:兩種方法周密度;干擾效應(yīng)的大小;規(guī)定的假設(shè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)。2、挑選測試組和對(duì)比組標(biāo)本;3、選擇合適的參考方法或者效果較好的比較方法;實(shí)驗(yàn)程序1、計(jì)算測試標(biāo)本和對(duì)比標(biāo)本數(shù),取決于:1404、在盡估計(jì)短的時(shí)間內(nèi)(通常在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)),用兩種方法重復(fù)測定每個(gè)樣本。5、假如觀察到偏倚存在,測定樣本中藥物或者其他潛在的干擾物質(zhì)的濃度,假如估計(jì)的話,確定偏倚和干擾物濃度兩者之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)程序4、在盡