新型抗體臨床前評(píng)價(jià)

新型抗體臨床前評(píng)價(jià)新型抗體研究概況新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)一般原則新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)策略報(bào)告內(nèi)容本次報(bào)告僅介紹以下新型抗體：抗體-藥物偶聯(lián)物（Antibody-drugconjugate，ADC）工程抗體（Engineeredantibody）雙特異性抗體（Bispecificantibody）非免疫球蛋白配體（Non-immunoglobulinligands）新型抗體概況新型抗體概況

抗體分子一般結(jié)構(gòu)輕鏈可變區(qū)(CDR)重鏈鉸鏈區(qū)新型抗體概況

ADC結(jié)構(gòu)抗體分子小分子毒素人源化單抗(IgG1)微管蛋白聚合抑制劑Maytansines(DM1,DM4)Auristatins(MMAE,MMAF)DNA損傷劑CalicheamicinsDuocarmycinsAnthracyclines(doxorubicin)連接分子化學(xué)鍵：二硫鍵、腙鍵、肽鍵連接部位：FcHCLC新型抗體概況

工程抗體結(jié)構(gòu)工程抗體（Engineeredantibody）：恒定區(qū)或可變區(qū)進(jìn)行改構(gòu),糖基化或氨基酸突變較多新型抗體概況

雙特異抗體結(jié)構(gòu)靶點(diǎn)1靶點(diǎn)2雙特異抗體（bispecificantibodies）：兩個(gè)CDR區(qū)分別作用于不同靶點(diǎn)，如靶點(diǎn)1為藥效學(xué)靶點(diǎn)、靶點(diǎn)2為免疫細(xì)胞活化靶點(diǎn)新型抗體概況

非免疫球蛋白配體結(jié)構(gòu)錨蛋白重復(fù)片段（ankyrin-likerepeats）：自然界遍存在于生物體中的一種蛋白質(zhì)序列模體新型抗體概況

非免疫球蛋白配體結(jié)構(gòu)Monobody技術(shù)：以III型纖維蛋白結(jié)構(gòu)域?yàn)楣羌?，連接抗體可變區(qū)的非免疫球蛋白配體FN3CDR新型抗體概況

非免疫球蛋白配體結(jié)構(gòu)Nanobody技術(shù)：即為單結(jié)構(gòu)域抗體（single-domainantibody，sdAb），僅保留單個(gè)抗體可變區(qū)的抗體片段分子量大；組織穿透性有限；生產(chǎn)成本高；用藥劑量較大；可能存在免疫原性；………新型抗體概況

傳統(tǒng)單克隆抗體面臨問(wèn)題將細(xì)胞毒藥物選擇性投遞到靶組織中提高靶組織藥物濃度降低系統(tǒng)性暴露新型抗體概況

ADC優(yōu)勢(shì)減毒增效ChemotherapyChemotherapy藥物劑量毒作用劑量(MTD)藥效劑量(MED)治療窗治療窗化療毒作用劑量(MTD)藥效劑量(MED)ADC改構(gòu)Fc段，改進(jìn)體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為改構(gòu)Fc段，提高或降低ADCC和CDC作用改變糖基化，降低免疫原性改構(gòu)Fab段，提高與靶抗原的親和力，提高藥效

新型抗體概況

工程抗體優(yōu)勢(shì)靶向作用+免疫細(xì)胞激活作用

新型抗體概況

雙特異抗體優(yōu)勢(shì)Chemotherapy無(wú)抗體支架，對(duì)配體修飾實(shí)現(xiàn)抗體樣治療功能;分子量小，約為抗體1/10；組織穿透性好；生產(chǎn)成本較低；免疫原性較小；不需要翻譯后修飾。新型抗體概況

非免疫球蛋白配體優(yōu)勢(shì)2015抗體研究情況8個(gè)抗體（alirocumab、evolocumab、daratumumab、dinutuximab、idarucizumab、mepolizumab、elotuzumab、necitumumab）獲批準(zhǔn)上市53個(gè)進(jìn)入臨床III期（2014年為39個(gè)）

新型抗體概況

抗體藥物進(jìn)展數(shù)據(jù)來(lái)源：JaniceM.Reichert《Antibodiestowatchin2016》2001年10月首例ADC藥物Mylotarg（gemtuzumabozogamicin）經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市，2010年由FDA撤市；2011年2月第2例ADC藥物Adcetris（Brentuximabvedotin）經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市；2013年2月第3例ADC藥物Kadcyla（Trastuzumabemtansine）經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市。新型抗體概況

已批準(zhǔn)ADC藥物2012年協(xié)和發(fā)酵麒麟的mogamalizumab，首例糖基化抗體，用于CC-趨化因子受體4(CCR4)表達(dá)T細(xì)胞白血病-淋巴瘤和外周T細(xì)胞淋巴瘤(PTCL)的成年患者；2013年11月Genentech的糖基化抗體obinutuzumab（靶點(diǎn)為CD20）治療難治性慢性淋巴細(xì)胞白血病

；Ecromeximab，Benralizumab等。新型抗體概況

已批準(zhǔn)的工程抗體Amgen的雙特異抗體blinatumomab（CD19和CD3特異性）治療急性B淋巴細(xì)胞白血病

；2014年12月由FDA批準(zhǔn)上市TrionPharma的雙特異抗體Catumaxomab（EpCAM和CD3特異性）治療EpCAM陽(yáng)性腫瘤，2009年4月由EMA批準(zhǔn)上市新型抗體概況

已批準(zhǔn)的雙特異性單抗處于臨床或臨床前試驗(yàn)階段，尚無(wú)獲批藥物AGN-150998由Allergan公司開(kāi)發(fā)，VEGF和PDGFB靶點(diǎn)，用于治療濕性AMD，處于臨床Ⅱa新型抗體概況

非免疫球蛋白配體新型抗體研究概況新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)一般原則新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)策略報(bào)告內(nèi)容抗體分子：生物大分子性質(zhì)（免疫原性、過(guò)敏原性、ADCC作用、CDC作用）、抗原介導(dǎo)的靶向結(jié)合和非特異性結(jié)合毒性、免疫細(xì)胞Fc受體結(jié)合或胞飲作用連接分子：腙鍵、二硫鍵、肽鍵，影響細(xì)胞毒藥物的解離：脫靶毒性細(xì)胞毒藥物：決定ADC的主要毒效應(yīng)譜DAR：2~4治療窗最大，DAR過(guò)高易被視為異物，DAR過(guò)低攜帶效率低工藝復(fù)雜：抗體結(jié)構(gòu)變化可能造成聚合、裂解、空間結(jié)構(gòu)變化新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)

ADC毒性風(fēng)險(xiǎn)FDA對(duì)IND中20個(gè)ADC藥物總結(jié)：動(dòng)物試驗(yàn)：主要為造血系統(tǒng)毒性、肝毒性和生殖毒性，部分還存在皮膚毒性和腎毒性。臨床試驗(yàn)：小分子細(xì)胞毒藥物引起的骨髓抑制相關(guān)作用（中性粒細(xì)胞減少、敗血癥和出血）、肝毒性和腎毒性、注射反應(yīng)。新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)

ADC臨床前及臨床試驗(yàn)常見(jiàn)毒性結(jié)合到兩個(gè)不同的抗原細(xì)胞因子釋放免疫原性多樣半衰期改變新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)

雙特異抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)Catumaxomab進(jìn)行一系列種屬交叉反應(yīng)試驗(yàn)，包括狨猴、食蟹猴、恒河猴均為不相關(guān)動(dòng)物。未進(jìn)行長(zhǎng)毒試驗(yàn)，僅進(jìn)行有限的急毒試驗(yàn)，無(wú)明顯毒性。Blinatumomab臨床前主要為免疫系統(tǒng)相關(guān)毒性，如WBC、LYM、LUC減少、T、B、NK、NKT細(xì)胞耗竭、脾臟減輕及脾臟白髓細(xì)胞減少、多數(shù)淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞減少。新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)

雙特異抗體臨床前毒性風(fēng)險(xiǎn)Catumaxomab臨床使用主要副作用為發(fā)熱、疼痛、惡心和嘔吐，主要與細(xì)胞因子釋放有關(guān)。Blinatumomab說(shuō)明書黑框警告兩個(gè)副作用：細(xì)胞因子釋放綜合征、神經(jīng)毒性，可危及生命或致死。臨床試驗(yàn)中還可見(jiàn)可見(jiàn)發(fā)熱、頭痛、周圍水腫、發(fā)熱性中性粒細(xì)胞減少、惡心、低血鉀、震顫、皮疹和便秘等不良反應(yīng)新型抗體臨床前及臨床毒性風(fēng)險(xiǎn)

雙特異單抗臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的毒性新型抗體研究概況新型抗體毒性風(fēng)險(xiǎn)新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)一般原則新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)策略報(bào)告內(nèi)容T-DM1（Trastuzumabemtansine）是Roche開(kāi)發(fā)用于HER2高表達(dá)的乳腺癌的ADC藥物，2013年2月22日由FDA批準(zhǔn)上市

Trastuzumab（針對(duì)HER2）+mertansine通過(guò)二硫鍵連接新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例

Kadcyla新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例

Kadcyla試驗(yàn)類型種屬ADC/游離細(xì)胞毒分子結(jié)果單次給藥毒性大鼠、猴T-DM1食蟹猴30mg/kg未見(jiàn)明顯異常大鼠60mg/kg肝毒性、免疫毒性、動(dòng)物死亡等重復(fù)給藥毒性（3個(gè)月、6個(gè)月）猴T-DM1輕度、可逆的肝毒性（Kupffer細(xì)胞肥大、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、多核肝細(xì)胞）；表皮細(xì)胞有絲分裂象增多；坐骨神經(jīng)、脊髓可見(jiàn)不可逆性軸突變性HNSTD為10mg/kg心血管安全藥理猴T-DM130mg/kg無(wú)作用組織交叉反應(yīng)猴、人T-DM1存在廣泛的組織交叉溶血/血液相容性猴、人T-DM15mg/mL無(wú)作用單次給藥毒性（應(yīng)FDA要求）大鼠DM1與大鼠T-DM1暴露量一致時(shí)，毒性程度相似，T-DM1毒性主要由DM1造成Herg體外DM1鉀通道抑制性較小遺傳毒性體外、大鼠DM1采用DM1進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、微核試驗(yàn)（結(jié)果為陽(yáng)性，與DM1機(jī)理相符合三個(gè)月重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)：0、3、10、30mg/kg每3周給藥一次、共4次給藥途徑：靜脈注射指標(biāo)：體重；臨床觀察、攝食量、臨床病理學(xué)、眼科檢查、體格檢查、神經(jīng)學(xué)檢查、ECGs、毒代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)、免疫原性和免疫毒性、大體病理學(xué)、組織病理學(xué)新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例

Kadcyla2014年12月Amgen的的雙特異抗體blinatumomab（CD19和CD3特異性）治療急性B淋巴細(xì)胞白血病靶點(diǎn)為CD19+B淋巴細(xì)胞，銜接CD3+T細(xì)胞組織交叉顯示僅與人和大猩猩T、B淋巴細(xì)胞結(jié)合新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例

Blinatumomab新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例

Blinatumomab試驗(yàn)類型種屬測(cè)試分子結(jié)果4周重復(fù)給藥毒性小鼠鼠源性替代分子0,0.2,1,5mg/kg，每天一次,所有劑量組均出現(xiàn)藥效相關(guān)作用：血液學(xué)：WBC、LYM、LUC減少；免疫表型：T、B、NK、NKT細(xì)胞耗竭；臟器重量：脾臟減輕組織病理學(xué)：脾臟白髓細(xì)胞減少、多數(shù)淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞減少3個(gè)月重復(fù)給藥毒性小鼠鼠源性替代分子0,0.2,1,5mg/kg/次，每天兩次10mg/kg組兩只動(dòng)物死亡不能排除供試品關(guān)系，其余毒性與4周毒性試驗(yàn)基本一致5周重復(fù)給藥毒性黑猩猩Blincyto0和0.1ug/kg，每周一次，共5次。出現(xiàn)藥效相關(guān)毒性：體溫升高、血壓降低；B和T淋巴細(xì)胞減少、T淋巴細(xì)胞激活、IL-2、IL-6、IFN-γ細(xì)胞因子表達(dá)升高組織交叉反應(yīng)猴、人Blincyto存在廣泛的組織交叉小鼠胚胎-胎仔發(fā)育小鼠鼠源性替代分子0,1,5mg/kg/次，GD6和GD19各一次，未見(jiàn)胎仔毒性，母體毒性與重復(fù)給藥基本一致CNS安全藥理（Irwin）小鼠鼠源性替代分子0,0.042,0.978mg/kg，每天一次,共7天，未見(jiàn)明顯異常單次毒性、遺傳毒性、致癌性、I段生殖N/AN/A未進(jìn)行三個(gè)月小鼠重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)：0、0.2、1、5mg/kg/次，每天兩次，共13周，恢復(fù)期4周給藥途徑：皮下給藥指標(biāo)：體重、臨床觀察、攝食量、臨床病理學(xué)（血液學(xué)、凝血、血清生化）、眼科檢查、免疫細(xì)胞表型、大體病理學(xué)。組織病理學(xué)、免疫原性、毒代動(dòng)力學(xué)檢查。未進(jìn)行尿液檢查。新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例

Blinatumomab

5周黑猩猩重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)2001年啟動(dòng)該試驗(yàn)，而小鼠4周和13周試驗(yàn)分別于2011和2012年啟動(dòng)遵從GLP，提供QA聲明0（1只雌性）和0.1ug/kg（雌雄各1只），每周一次，共5次給藥途徑：靜脈給藥指標(biāo)：體重、臨床觀察、攝食量、臨床病理學(xué)（血液學(xué)、凝血、血清生化、尿液分析）、給藥部位觀察、淋巴結(jié)活檢、毒代動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞因子檢查、眼科檢查、伴隨安全藥理（血壓、體溫、心電圖）、體格檢查、免疫細(xì)胞檢查。未進(jìn)行解剖終點(diǎn)相關(guān)（大體病理、組織病理學(xué)、臟器重量）的檢查。新型抗體臨床前評(píng)價(jià)案例

Blinatumomab

2013年11月Genentech的糖基化抗體obinutuzumab治療難治性慢性淋巴細(xì)胞白血病

；工程化后減少海藻糖分子，ADCC作用高于美羅華，與FcγRIIIa/b的親和力也高于美羅華；組織交叉顯示與人和猴有交叉，嚙齒類動(dòng)物不交叉。新型抗體臨床前評(píng)價(jià)案例

Obinutuzumab新型抗體臨床前評(píng)價(jià)案例

Obinutuzumab試驗(yàn)類型種屬結(jié)果重復(fù)給藥毒性（4周）食蟹猴0,30,120mg/kg，每周一次,120mg/kg一只動(dòng)物因?yàn)楦腥竞透篂a瀕死、各劑量組B細(xì)胞減少/T細(xì)胞增多（可逆性、主要靶器官為胸腺、脾臟、淋巴結(jié)。重復(fù)給藥毒性（3個(gè)月）食蟹猴0,10,30,100mg/kg，每周一次，共13周100mg/kg兩只動(dòng)物由于感染瀕死（可能與供試品免疫抑制作用有關(guān)），各劑量組B細(xì)胞減少（可逆性）、NK細(xì)胞一過(guò)性降低（ADCC作用相關(guān)）、全身性炎癥重復(fù)給藥毒性（6個(gè)月）食蟹猴0,5,25和50mg/kg，每周一次，共26周。各劑量組均有動(dòng)物瀕死/死亡（給藥相關(guān)），各劑量組全身性單核細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥、超敏反應(yīng)，B細(xì)胞耗竭（可逆性）組織交叉反應(yīng)猴、人存在廣泛的組織交叉III段生殖食蟹猴0,25和50mg/kg，每周一次，直至生產(chǎn)母體：各劑量組均有母體死亡，組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)淋巴組織缺乏生發(fā)中心、全身多臟器炎癥、免疫介導(dǎo)腸隱窩損傷呼吸、CNS、心血管安全藥理食蟹猴伴隨重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)進(jìn)行單次毒性、遺傳毒性、致癌性N/A未進(jìn)行三個(gè)月食蟹猴重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)：0,10,30,100mg/kg，每周一次，共13周，恢復(fù)期37周給藥途徑：靜脈滴注（30分鐘）指標(biāo)：體重、臨床觀察、攝食量、臨床病理學(xué)（血液學(xué)、凝血、血清生化、尿液檢查）、眼科檢查、免疫細(xì)胞表型、大體病理學(xué)、組織病理學(xué)、免疫原性、毒代動(dòng)力學(xué)檢查、細(xì)胞因子檢查。新型抗體臨床前評(píng)價(jià)案例

Obinutuzumab新型抗體研究概況新型抗體臨床前及臨床毒性風(fēng)險(xiǎn)新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)一般原則新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)策略報(bào)告內(nèi)容組織交叉反應(yīng)試驗(yàn)：確定動(dòng)物模型和預(yù)測(cè)非靶組織毒性安全藥理試驗(yàn)：心血管、呼吸、種屬，根據(jù)研究需要必要時(shí)可采用離體器官或其他非完整動(dòng)物藥代/毒代動(dòng)力學(xué)：吸收、分布，代謝一般不需要單次給藥毒性試驗(yàn)：盡可能暴露出受試物的毒性反應(yīng)重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)：試驗(yàn)動(dòng)物、給藥劑量給藥途徑、給藥周期、恢復(fù)期應(yīng)進(jìn)行科學(xué)的設(shè)計(jì)。免疫毒性試驗(yàn)遺傳毒性試驗(yàn)：?jiǎn)慰挂话悴贿M(jìn)行王海學(xué)等《單抗類生物制品非臨床研究和評(píng)價(jià)的考慮要點(diǎn)》單克隆抗體安全性評(píng)價(jià)一般考慮

試驗(yàn)類型遺傳毒性試驗(yàn)：?jiǎn)慰挂话悴贿M(jìn)行生殖和發(fā)育毒性：根據(jù)產(chǎn)品、臨床適應(yīng)癥和擬用患者人群致癌試驗(yàn)：標(biāo)準(zhǔn)致癌試驗(yàn)一般不適用局部用藥耐受性：可整合在單次和重復(fù)毒性試驗(yàn)中單克隆抗體安全性評(píng)價(jià)一般考慮

試驗(yàn)類型王海學(xué)等《單抗類生物制品非臨床研究和評(píng)價(jià)的考慮要點(diǎn)》生物活性/藥效學(xué)研究動(dòng)物種屬/模型選擇動(dòng)物數(shù)/性別給藥途徑/劑量選擇免疫原性單克隆抗體安全性評(píng)價(jià)一般考慮

重點(diǎn)關(guān)注王海學(xué)等《單抗類生物制品非臨床研究和評(píng)價(jià)的考慮要點(diǎn)》尚無(wú)針對(duì)性的指導(dǎo)原則根據(jù)ICH

S6（生物技術(shù)藥），治療類生物制品多數(shù)新型抗體為抗腫瘤藥物，參考ICHS9，抗腫瘤藥物2011年的ICHS6append:包含ADC的要求基于科學(xué)性的case-by-case原則新型抗體安全性評(píng)價(jià)策略

指導(dǎo)原則新型抗體研究概況新型抗體床毒性風(fēng)險(xiǎn)新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)案例抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)一般原則新型抗體臨床前安全性評(píng)價(jià)策略報(bào)告內(nèi)容新型抗體本質(zhì)上為抗體，通過(guò)抗原抗體特異性結(jié)合起作用，根據(jù)組織交叉反應(yīng)結(jié)果選擇動(dòng)物種屬；非免疫球蛋白配體如Monobody和Nanobody存在多肽類生物制品性質(zhì)；新型抗體安全性評(píng)價(jià)策略

動(dòng)物種屬選擇ADC至少在一個(gè)種屬上進(jìn)行游離小分子毒素的安全性評(píng)價(jià)大分子抗體通常無(wú)嚴(yán)重毒性，常根據(jù)藥效學(xué)劑量和臨床擬用劑量選擇毒理學(xué)劑量；給藥期限設(shè)置根據(jù)抗體分子的藥代和臨床擬用頻率；ADC藥物系統(tǒng)暴露主要由抗體分子決定。需注意改構(gòu)抗體的藥代特性變化；非免疫球蛋白抗體不具有抗體特性，而與多肽類似。新型抗體安全性評(píng)價(jià)策略

劑量/給藥期限/給藥周期設(shè)置常規(guī)終點(diǎn)： 體重、攝食量、臨床觀察、臨床病理學(xué)、眼科檢查、體

格檢查、安全藥理指標(biāo)、大體病理學(xué)、組織病理學(xué)免疫毒性： 免疫球蛋白、補(bǔ)體、免疫細(xì)胞表型、免疫組織化學(xué)特異性指標(biāo)：

特殊亞型的細(xì)胞分群、細(xì)胞因子、可能毒性的監(jiān)測(cè)指標(biāo)藥效學(xué)指標(biāo)：

受體占位