紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定概述：血液由血漿和血細(xì)胞兩部分組成。通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個(gè)組織器官密切聯(lián)系參與機(jī)體各項(xiàng)生理功能活動(dòng)，維持機(jī)體正常新陳代謝和內(nèi)環(huán)境平衡。在病理情況下，血液系統(tǒng)疾病除直接累及血液外，也可以影響全身組織器官，而各組織器官的病變也可直接或間接地引起學(xué)液發(fā)生變化，臨床上較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目是通過血液標(biāo)本的檢驗(yàn)來了解機(jī)體的變化。血常規(guī)檢查（BloodRoutineExamination）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）·血紅蛋白測定（Hb）白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（DifferentialCount，DC）血常規(guī)檢查對各系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別可以提供許多重要信息，是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中最常用，最重要的基本內(nèi)容。

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與Hb測定

名稱縮寫英文全稱紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RbcRedBloodCell血紅蛋白測定HbHemoglobin一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論（一）RBC來源、生成、壽命及衰亡

紅細(xì)胞系祖細(xì)胞早幼、中幼和（BFU-E和FU-E）晚幼各發(fā)育階段骨髓造血干細(xì)胞骨髓原紅細(xì)胞（CFU-S）促紅細(xì)胞生成素3~5次分裂（Erythropoietion，EPO）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞從骨髓益出至外周血的全過程約需5天時(shí)間一個(gè)原紅細(xì)胞最終可生成8~16個(gè)成熟紅細(xì)胞紅細(xì)胞的生存時(shí)間為120天珠蛋白參與再造血衰亡的RBC鐵膽紅素，參與膽紅素代謝（二）RBC的生理機(jī)能（見課件）

（三）Hb的組成及結(jié)構(gòu)

珠蛋白（含兩對肽鏈）血紅蛋白（Hb）亞鐵血紅素（Fe+4個(gè)卟啉）

α2β2（成人主要Hb，簡稱HbA占90%）α鏈（141AA）珠蛋白組合形式α2δ2（成人次要β鏈（146AA）Hb，HbA2占1~3%）

α2γ2（胎兒主要Hb，HbF占2%以下）

二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)（用已校準(zhǔn)的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul加到3.8ml稀釋液內(nèi)混勻），滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤內(nèi)，然后于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的RBC數(shù)，經(jīng)過換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。（二）試劑枸櫞酸鈉（2Na3C6H5O7·11H2O），3克甲醛（40%）1ml以上溶解后加蒸餾水100ml此配方克服了傳統(tǒng)的Hayem液的缺點(diǎn)。（三）操作見課件（四）參考值RBC（×1012/L）Hb（g/L）男：4.0~5.5120~160女：3.5~5.0110~150新生兒：6.0~7.0170~200（五）臨床意義升高：相對升高——與脫水有關(guān)（吐、瀉、汗、尿、灼、癌）絕對升高——與乏氧有關(guān)生理性（高原、胎兒、新生兒、運(yùn)動(dòng)、精神因素）病理性（心肺疾患、真性紅細(xì)胞增多癥）降低：生理性降低——妊娠、嬰幼兒、老年人病理性降低——生成降低、原料不足、造血障礙、丟失增多（失血）、破壞增多（溶血）

由于各種病因?qū)е轮車t細(xì)胞減少，即病理性貧血其貧血的病因?qū)W分類見第9頁“表2-1”三、血紅蛋白測定（一）血紅蛋白測定方法改良沙利（Sahli）氏法托爾克維斯脫（Tallgvist）氏法光電比色法硫酸銅溶液比重法酸化（堿化）光電比色法氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）測定法堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法上機(jī)分析

（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法

原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]氧化成高鐵血紅蛋白（Hi）再與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋（hemigl-obinCyanide，簡稱HiCN）。氰化高鐵血紅蛋白在波長540nm處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計(jì)進(jìn)行直接定量測定?；蛴肏iCN參考液進(jìn)行比色測定。

而幻燈片12試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見實(shí)習(xí)指導(dǎo)）

靜置操作：血液20ul+轉(zhuǎn)化液5ml———比色5分鐘計(jì)算：64458Hb（g/L）=測定吸光度（A）×————×25144×100064458是目前國際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量44是1965年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）公布的血紅蛋白摩爾吸光度。251是稀釋倍數(shù)（三）注意事項(xiàng)：必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線HiCN試劑不能貯存于塑料瓶中，應(yīng)放40C冰箱不能圖工作方便不顧質(zhì)量管理要求遇到白細(xì)胞數(shù)過多或異常球蛋白增高的血標(biāo)本，HiCN比色液會(huì)出現(xiàn)渾濁，可離心取上清夜或向比色液中加少許NaCL（約0.25g）或碳酸鉀（0.1g）氰化鉀是劇毒品，應(yīng)妥善保管，配試劑時(shí)要按劇毒品管理程序操作若用分光光度計(jì)作精度定量測定，分光光度計(jì)的波長和吸光度需校正，帶寬應(yīng)小于1nm，比色杯光徑1.00cm，允許誤差為0.5%（0.995~1.005cm），測定溫度200C~250C。HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)（1）波峰540nm±1nm，波谷504~502nm（2）A540/A504應(yīng)在（4）棕色容器保存，穩(wěn)定期長，40C下至少保存6年（5）無菌試驗(yàn)（包括厭氧培養(yǎng)）陰性（6）測定精度＜±0.1%(7)定值由指定多個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室測定廢液處理（1）按每升HiCN廢液加次氯酸鈉溶液40ml，充分混勻，敞開容器，置室溫3小時(shí)。（2）用“84”消毒液40ml代替（3）鹼性硫酸亞鐵懸液40m/每升HiCN廢液（四）方法學(xué)評價(jià)

Sahli法HiCN測定法操作簡便，但誤差較大。操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。不能轉(zhuǎn)化生理或病理中全除SHb外，其余各種Hb均可很快地轉(zhuǎn)部的Hb，對Hbco、Hbred化為HiCN.轉(zhuǎn)化很慢或轉(zhuǎn)化不完全.Hb轉(zhuǎn)化時(shí)間較長，5分鐘HiCN在540nm處吸收峰較寬，可用一轉(zhuǎn)化88%，10分鐘轉(zhuǎn)化95%般分光光度計(jì)進(jìn)行比色。2小時(shí)才基本轉(zhuǎn)化完畢。終點(diǎn)反應(yīng)不明顯，比色過顯色快而穩(wěn)定，因此HiCN液可制成程不易標(biāo)準(zhǔn)化。在相當(dāng)長時(shí)間（至少6年）內(nèi)穩(wěn)定不變的標(biāo)準(zhǔn)液，這對進(jìn)行質(zhì)量控制較為有利。有摩爾消光系數(shù)可通過分光光度計(jì)測定吸光度值直接計(jì)算測定誤差小.

SDS-Hb測定法AHD-575測定法優(yōu)點(diǎn)：無劇毒試劑單一，操作簡操作簡單單，易行，