吸量管和移液器的使用校正與數(shù)據(jù)處理

吸量管和移液器的使用校正與數(shù)據(jù)處理第一頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馍锘瘜W(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度和實(shí)驗(yàn)要求掌握刻度吸管的分類和使用方法，達(dá)到穩(wěn)、捷、準(zhǔn)掌握微量可調(diào)式移液器的原理和使用方法，了解可調(diào)式移液器的校正方法建立實(shí)驗(yàn)誤差、準(zhǔn)確度和精確度的概念，掌握誤差分析計(jì)算方法了解電子天平的使用方法第二頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日生化實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度和實(shí)驗(yàn)要求1.必須按教學(xué)計(jì)劃規(guī)定的時(shí)間到實(shí)驗(yàn)室，不遲到，不早退。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿實(shí)驗(yàn)服。2.保持環(huán)境的肅靜和整潔，不高聲說(shuō)話，嚴(yán)禁用器械及動(dòng)物開(kāi)玩笑。3.嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器，凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動(dòng)用。儀器發(fā)生故障、損壞、丟失時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師，凡違反操作規(guī)程而損壞儀器者，要追究責(zé)任。4.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要大膽、細(xì)心，認(rèn)真觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象并記錄好原始數(shù)據(jù)；節(jié)約試劑，節(jié)約水電。5.實(shí)驗(yàn)完畢，洗凈所用器材，固體舍棄物(如用過(guò)的濾紙、電泳用凝膠條等)切勿倒入水槽內(nèi)，以免堵塞。須經(jīng)指導(dǎo)教師同意，方能離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。6.值日生負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生，倒盡垃圾，關(guān)好水、電、門(mén)窗，經(jīng)教師檢查后方可離開(kāi)。第三頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日試劑使用1.仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，確定所需試劑及濃度。2.吸量管與所需試劑號(hào)碼務(wù)必對(duì)準(zhǔn)。3.用后蓋好瓶蓋(切勿張冠李戴)歸還原處，以免影響他人使用。第四頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)考核生化總成績(jī)理論考試卷面成績(jī)(60%)實(shí)驗(yàn)成績(jī)(30%)平時(shí)成績(jī)(10%)

實(shí)驗(yàn)成績(jī)平時(shí)實(shí)驗(yàn)成績(jī)(60%)實(shí)驗(yàn)考試成績(jī)(40%)第五頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日平時(shí)實(shí)驗(yàn)成績(jī)?nèi)糠郑嚎记?20%)+實(shí)驗(yàn)操作(40%)+實(shí)驗(yàn)報(bào)告(40%)考勤：遲到，扣10分；曠課，本次實(shí)驗(yàn)成績(jī)?yōu)?分操作：不穿白大褂扣10分，不帶實(shí)驗(yàn)教材扣10分。沒(méi)有預(yù)先預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)扣10分。實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范扣5分；過(guò)失造成玻璃器皿損壞扣5分；過(guò)失造成儀器損壞扣10分。沒(méi)有清洗玻璃器皿和還原儀器原狀扣10分。沒(méi)做清潔扣10分。

第六頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

沒(méi)有實(shí)驗(yàn)?zāi)康目?分沒(méi)有實(shí)驗(yàn)原理扣5分沒(méi)有實(shí)驗(yàn)過(guò)程扣10分，盡可能用圖、表來(lái)表示涂改實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)扣20分。沒(méi)有分析與實(shí)驗(yàn)討論（或者思考題）扣15分沒(méi)有報(bào)告臨床意義扣5分態(tài)度（書(shū)寫(xiě)、條理、通順）

預(yù)習(xí)報(bào)告（每次實(shí)驗(yàn)課前檢查）實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒃?、試劑、操作步驟和臨床意義第七頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日本學(xué)期實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1刻度吸管、可調(diào)式移液器的校正與誤差分析2分光光度法測(cè)定物質(zhì)的濃度

3血清總蛋白和白/球比值的測(cè)定4酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制5血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離6血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳7血清堿性磷酸酶活性測(cè)定8血糖測(cè)定9質(zhì)粒DNA的提取10DNA的瓊脂糖凝膠電泳分析11血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性測(cè)定12直接膽紅素與總膽紅素測(cè)定13實(shí)驗(yàn)考試第八頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日生物化學(xué)課程網(wǎng)站訪問(wèn)路徑：“三峽大學(xué)”-“求索學(xué)堂”-“課程總攬”-“醫(yī)學(xué)院”-“醫(yī)用生物化學(xué)”網(wǎng)站內(nèi)有理論課和實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)大綱、ppt，習(xí)題集，考試方法和考試樣卷等，同學(xué)們可根據(jù)需要下載學(xué)習(xí)第九頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日刻度吸管和微量可調(diào)式移液器的使用、校正與誤差分析問(wèn)題：將一定量的溶液從一容器轉(zhuǎn)移到另一個(gè)容器。用什么量具？是否精準(zhǔn)？第十頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日一、刻度吸管(pipette)的分類和操作方法

分類：10ml,5ml,2ml,1ml,0.5ml,0.2ml,0.1ml（吹?）移液管吸量管第十一頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日

刻度吸管的操作方法1．使用前：首先要看刻度吸管標(biāo)記、刻度標(biāo)線位置等。2．吸液：用右手的拇指和中指捏住刻度吸管的上端，將管的下口插入欲吸取的溶液中；左手拿洗耳球，將洗耳球內(nèi)空氣排出，接在管的上口把溶液慢慢吸入至刻度以上，立即用右手的食指按住管口。3．調(diào)節(jié)液面：將刻度吸管向上提升離開(kāi)液面，略為放松食指（有時(shí)可微微轉(zhuǎn)動(dòng)吸管）使管內(nèi)溶液慢慢從下口流出，直至溶液的彎月面底部與標(biāo)線相切為止（看刻度時(shí)，應(yīng)將刻度吸管的刻度與眼睛平行），立即用食指壓緊管口。將尖端的液滴靠壁去掉，移出刻度吸管，插入承接溶液的器皿中。4．放出溶液：

刻度吸管下端緊靠錐形瓶?jī)?nèi)壁，稍松開(kāi)食指，讓溶液沿瓶壁慢慢流下，流完后管尖端接觸瓶?jī)?nèi)壁停留數(shù)秒后，再將刻度吸管移去；若刻度吸管上標(biāo)有“吹”，則需將管內(nèi)殘余液體吹出。第十二頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日法國(guó)GILSON

芬蘭Labsystems日本NICHIRYO美國(guó)TOMOS德國(guó)Brand德國(guó)Eppendorf

美國(guó)JENCONS芬蘭雷勃Finnpipette

工欲善其事，必先利其器二、微量可調(diào)式移液器（micropipette,俗稱“加樣槍”）的構(gòu)造和使用方法

第十三頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日微量可調(diào)式移液器的規(guī)格

用途規(guī)格：5ml移液器(1000-5000ul)1ml移液器(200-1000)200ul移液器(20-200)100ul移液器(20-100ul)10ul移液器(0.5-10ul)2ul移液器(0.1-2ul)第十四頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日

移液器及配套吸嘴（俗稱槍頭，tip）0.5-20μl20-200μl100-1000μl第十五頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日1.5ml0.2ml2ml

移液器常用的盛接容器

酶標(biāo)板

離心管第十六頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日微量可調(diào)式移液器的構(gòu)造

扭動(dòng)轉(zhuǎn)軸，即可調(diào)整和改變移液器容量

手指把手

吸頭的排出器

容量指示

吸頭排出器套筒

吸頭圓錐體第十七頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日微量可調(diào)式移液器的原理1956年，由德國(guó)生理化學(xué)研究所的科學(xué)家Schnitger發(fā)明.活塞沖程加樣活塞沖程(空氣墊)加樣器的結(jié)構(gòu)是空氣墊、活塞?？諝鈮|的作用是將吸于塑料吸頭內(nèi)的液體樣本與加樣器內(nèi)的活塞分隔開(kāi)來(lái)；活塞在加樣器內(nèi)作彈簧樣運(yùn)動(dòng)，通過(guò)空氣墊帶動(dòng)液體進(jìn)入吸頭中。第十八頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日移液器的操作方法-11.量程的調(diào)節(jié)：

千萬(wàn)不要將按鈕旋出量程以外（！?。。?，否則會(huì)卡住內(nèi)部機(jī)械裝置而損壞了移液槍。

(a):P-20Model6.86ml(b):P-200Model132.4ml(c):P-1000Model262ml

第十九頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日移液器的操作方法-22.槍頭（吸頭）的裝配將加樣槍垂直插入槍頭（pipettetips）中，稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可使其緊密結(jié)合。

注意：不要使勁地在槍頭盒子上敲，這樣會(huì)導(dǎo)致移液槍的內(nèi)部配件（如彈簧）因敲擊產(chǎn)生的瞬時(shí)撞擊力而變得松散，甚至?xí)?dǎo)致刻度調(diào)節(jié)旋鈕卡住。Exampleoftipsizes:第二十頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日移液器的操作方法-33.吸液吸取液體前，先用大拇指將按鈕按下至第一停點(diǎn)，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液面下2－3毫米。然后慢慢松開(kāi)按鈕回原點(diǎn)，取出加樣槍。第二十一頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日移液器的操作方法-44．放出溶液將加樣槍加入盛接溶液的器皿中，將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)（終點(diǎn)）吹出殘余的液體。最后松開(kāi)按鈕。

(a)StartDispensing

(b)1stStop=Dispense(c)2ndStop=Expel第二十二頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日移液器的操作方法-55.棄槍頭按下加樣槍上的槍頭推出桿，將槍頭打入指定位置。Pressejectorbuttontodiscardtip.第二十三頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日移液器的完整操作步驟1.量程的調(diào)節(jié)：

千萬(wàn)不要將按鈕旋出量程（！?。。?，否則會(huì)卡住內(nèi)部機(jī)械裝置而損壞了移液槍。2.槍頭（吸頭）的裝配將加樣槍垂直插入槍頭（pipettetips）中，稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可使其緊密結(jié)合。不要使勁地在槍頭盒子上敲，這樣會(huì)導(dǎo)致移液槍的內(nèi)部配件（如彈簧）因敲擊產(chǎn)生的瞬時(shí)撞擊力而變得松散，甚至?xí)?dǎo)致刻度調(diào)節(jié)旋鈕卡住。3.吸液吸取液體前，先用大拇指將按鈕按下至第一停點(diǎn)，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液面下2－3毫米。然后慢慢松開(kāi)按鈕回原點(diǎn)，取出加樣槍。4．放出溶液將加樣槍加入盛接溶液的器皿中，將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)（終點(diǎn)）吹出殘余的液體。最后松開(kāi)按鈕。5.棄槍頭按下加樣槍上的槍頭推出桿，將槍頭打入指定位置。第二十四頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日注意事項(xiàng)移液器的正確放置當(dāng)移液器槍頭里有液體時(shí)，切勿將移液器水平放置或倒置，以免液體倒流腐蝕活塞彈簧。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)的注意事項(xiàng)（1）如不使用，要把移液槍的量程調(diào)至最大值的刻度，使彈簧處于松弛狀態(tài)以保護(hù)彈簧；（2）最好定期清洗移液槍，可以用肥皂水或60％的異丙醇，再用蒸餾水清洗，自然晾干。（3）校準(zhǔn)是可以在20-25度環(huán)境中，通過(guò)重復(fù)幾次秤量蒸餾水的方法來(lái)進(jìn)行。第二十五頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)處理

（AccuracyandPrecision）概念：準(zhǔn)確度(accuracy)：絕對(duì)誤差、相對(duì)誤差誤差（error）：系統(tǒng)誤差、偶然誤差精確度（precision)偏差（deviation）：絕對(duì)偏差、相對(duì)偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差第二十六頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日（一）準(zhǔn)確度和誤差

（Accuracyanderror）1.定義準(zhǔn)確度（Accuracy）：分析結(jié)果與真值相接近的程度準(zhǔn)確度的高低用誤差表示誤差（error）：測(cè)定結(jié)果（X）與真實(shí)值（XT）之間的差值系統(tǒng)誤差影響準(zhǔn)確度的高低2.表示方法:絕對(duì)誤差和相對(duì)誤差

絕對(duì)誤差（Absoluteerror）：E=X-XT

相對(duì)誤差（Relativeerror）:第二十七頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日系統(tǒng)誤差由于分析過(guò)程中某些固定的原因所造成的誤差.1.性質(zhì)（1）單向性、重復(fù)性（2）與測(cè)定次數(shù)無(wú)關(guān)（3）可以校正，大小、正負(fù)可以測(cè)定

2.產(chǎn)生的原因（1）方法誤差（2）儀器和試劑誤差（3）操作誤差（4）主觀誤差

3.校正：改變方法，校正儀器，采用高等級(jí)試劑等第二十八頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日偶然誤差

1、性質(zhì)：（1）大小可變（2）方向不定，有時(shí)正、有時(shí)負(fù)。（3）只能減小，不能消除。

2、產(chǎn)生的原因：

溫度、氣壓、濕度、儀器性能的微小改變、人為的終點(diǎn)判斷的變化等。

3、校正：不能消除，只有增加平行實(shí)驗(yàn)次數(shù)第二十九頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日（二）精密度與偏差

(precisionanddeviation)

1.定義:

精密度:在相同條件下,各次分析結(jié)果相互間接近的程度.精密度的高低用偏差表示.

偏差:測(cè)定結(jié)果（X）與平均值（）之間的差值偏差小,表示數(shù)據(jù)集中,精密度高;反之,數(shù)據(jù)分散,精密度低.偶然誤差影響分析結(jié)果的精密度.

第三十頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日（二）精密度與偏差

(precisionanddeviation)2.表示方法:(1)絕對(duì)偏差和相對(duì)偏差:

絕對(duì)偏差(absolutedeviation,di)

：

di=單個(gè)測(cè)量值(Xi)－平均值()

相對(duì)偏差(relativedeviation,dr)

：

Mean:

X=

第三十一頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日

(2)標(biāo)準(zhǔn)偏差(standarddeviation，SDorS)

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RelativeStandardDeviation,RSD)，又稱變異系數(shù)(CoefficientofVariation,CV)

第三十二頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日Threetargetswiththreearrowseachtoshoot.Canyouhitthebull's-eye?BothaccurateandprecisePrecisebutnotaccurateNeitheraccuratenorpreciseHowdotheycompare?第三十三頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日

體積準(zhǔn)確度

（平均誤差）精確度

（重現(xiàn)性）

ul誤差（ul）誤差（％）S.D.（ul）R.S.D.（ul）P202±0.1±5.0≤0.03≤1.55±0.1±2.0≤0.04≤0.8010±0.1±1.0≤0.05≤0.5020±0.2±1.0≤0.06≤0.30P10020±0.35±1.8≤0.10≤0.550±0.40±0.8≤0.12≤0.24100±0.80±0.8≤0.15≤0.15P20050±0.5±1.0≤0.20≤0.40100±0.8±0.8≤0.25≤0.25200±1.6±0.8≤0.30≤0.15P1000200±3±1.5≤0.60≤1.30500±4±0.8≤1.0≤0.201000±8±0.8≤1.5≤0.15移液器的準(zhǔn)確度與精確度第三十四頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日微量可調(diào)式移液器系統(tǒng)誤差的校正校準(zhǔn)方法？必須考慮的環(huán)境與儀器的影響因素？溫度、濕度、天平的精度、水的純度等如何消除偶然誤差的影響？第三十五頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日電子天平用電磁力平衡被稱物體重力的天平稱之為電子天平。它是傳感技術(shù)、模擬電子技術(shù)、數(shù)字電子技術(shù)和微處理器技術(shù)發(fā)展的綜合產(chǎn)物，具有自動(dòng)校準(zhǔn)、自動(dòng)顯示、去皮重、自動(dòng)數(shù)據(jù)輸出、自動(dòng)故障尋跡、超載保護(hù)等多種功能。

電子天平的心臟-重力電磁傳感器簧片，細(xì)而薄,極易受損，使用中應(yīng)特別注意保護(hù),不要向天平上加載重量超過(guò)其稱量范圍的物體（注意稱量范圍）電子天平對(duì)環(huán)境高度敏感,使用時(shí)應(yīng)小心操作,安裝臺(tái)面應(yīng)無(wú)明顯振動(dòng)；注意要調(diào)整底角螺絲使水平指示器的氣泡居中（調(diào)水平）

第三十六頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日電子天平的使用方法：操作方法開(kāi)機(jī)去皮稱量：記錄數(shù)據(jù)，回“零”注意水平放置稱量范圍精度第三十七頁(yè)，共四十頁(yè)，2022年，8月28日Thedensityofwateratdiffere