金鳳花種子 超低溫保存技術(shù)規(guī)程

T/CSMAXXXX－2018金鳳花種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了金鳳花[Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.]種子超低溫保存過(guò)程中的術(shù)語(yǔ)和定義、種子的選擇、種子前處理、種子保存量、種子冷凍方式、恢復(fù)培養(yǎng)等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于金鳳花種子的超低溫長(zhǎng)期貯藏。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)GB/T3543.6農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程水分測(cè)定GB/T3543.7農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程其他項(xiàng)目檢驗(yàn)術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。金鳳花Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.為豆科（Leguminosae）云實(shí)屬（CaesalpiniaLinn.）常綠小喬木，是一種觀賞性藥用植物，別稱洋金鳳、黃蝴蝶。以根、莖皮入藥，有解表、出汗之功效。此外，其花冠橙紅色，邊緣金黃色，如火焰蝴蝶般常年于枝頭盛開(kāi)，常用作園林栽培。收載于《中國(guó)中藥資源志要（1994）》。金鳳花果實(shí)Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.fruits莢果扁長(zhǎng)圓形，基部稍彎，長(zhǎng)6~10cm，寬1.5~2cm，果莢木質(zhì)，花果期幾乎全年，成熟時(shí)為淺褐色至黑褐色。內(nèi)含6~9顆種子。金鳳花種子Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.seeds金鳳花的播種材料為完整種子，貯藏特性判斷為頑拗性種子。種子黃綠色，倒卵形或三角狀倒卵形，扁平；表面具水紋狀橫向網(wǎng)紋，種臍位于種子基部頂端，為灰白色長(zhǎng)卵形小點(diǎn)，周圍具黑褐色暈圈。種子超低溫保存seedofcryopreservation指將經(jīng)過(guò)前處理的金鳳花種子置于液氮（-196℃）中保存。種子的選擇果實(shí)采收花果期幾乎全年，當(dāng)果莢為淺褐色至黑褐色時(shí)，即可采收，去除果莢，取出種子。種子選擇挑選發(fā)育飽滿、完整、健康的種子，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫ù娣艜r(shí)間不超過(guò)2個(gè)月）。種子前處理發(fā)芽率檢測(cè)根據(jù)《GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)》對(duì)種子進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，能正常發(fā)芽的種子即為具活力的種子。清洗干凈發(fā)芽盒，內(nèi)鋪一層濾紙，純凈水浸濕。隨機(jī)選取50粒種子，清水洗凈，整齊安放于發(fā)芽盒內(nèi)，種粒之間保持一定距離以減少霉菌蔓延感染，定期觀察發(fā)芽情況并記錄。發(fā)芽率計(jì)算對(duì)發(fā)芽結(jié)果進(jìn)行觀察鑒定。記錄正常幼苗、不正常幼苗、硬實(shí)、新鮮不發(fā)芽種子和死種子數(shù)。計(jì)算：發(fā)芽率=正常幼苗種子數(shù)/總的種子數(shù)×100%待保存的金鳳花種子發(fā)芽率應(yīng)≥80%。含水量范圍用尼龍網(wǎng)袋包裹金鳳花種子，置于盛有變色硅膠的干燥器內(nèi)，硅膠與種子的體積比為7500:1，室溫條件下干燥處理1~35h，在干燥過(guò)程中定期測(cè)定種子含水量，將種子含水量由20%~25%降至15%~19%。參照GB/T3543.6中的高恒溫烘干法（130℃烘干1h）測(cè)定種子含水量（W0），W0=（鮮重-絕干重）/鮮重×100%。種子保存量金鳳花種子保存量不少于300粒，以便后期的活力檢測(cè)使用。種子冷凍方式金鳳花種子超低溫保存的冷凍方式為分步冷凍法，即將待保存的金鳳花種子放入加有PVS2（室溫）的5mL凍存管（每管25粒種子）中，置于4℃冰箱中0.5h，取出立即放入-20℃冰柜中1h，之后迅速投入液氮中保存。恢復(fù)培養(yǎng)種子解凍處理液氮中至少凍存24h后，取出2個(gè)凍存管，立即放入40℃水浴中快速解凍2min，然后用洗滌液DS（每升MS溶液中含1.2mol蔗糖）浸泡5min，并用無(wú)菌水洗滌3次。凍后種子生活力檢測(cè)取出25粒解凍后的種子，參照5.1~5.2生活力檢測(cè)方法，進(jìn)行超低溫保存后的初始生活力檢測(cè)