江蘇省血培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室操作指南

〔試行〕目錄第一節(jié) 一、 血流感染定義二、 其次節(jié) 樣本采集和運(yùn)送一、 二、 采血時(shí)機(jī)三、 四、 采血量五、 血液標(biāo)本在需氧瓶和厭氧瓶中的安排六、 采血要求七、 標(biāo)本的運(yùn)送要求和拒收標(biāo)準(zhǔn)第三節(jié)血培育標(biāo)本分別病原菌的關(guān)鍵要素一、采血量二、血-肉湯比例三、培育基的選擇四、孵育條件五、培育周期六、培育瓶搖動七、監(jiān)控頻率第四節(jié)特別類型的血培育一、 真菌血培育二、 分枝桿菌血培育三、 導(dǎo)管相關(guān)的血流感染〔CRBSI〕四、 第五節(jié)結(jié)果報(bào)告一、培育結(jié)果報(bào)告原則二、 培育結(jié)果的分級報(bào)告制度第六節(jié)血培育的質(zhì)量把握一、 二、 分析中質(zhì)量保證三、 第一節(jié)血培育的臨床意義一、血流感染定義：是指各種病原微生物侵入血循環(huán)，在血液中生殖，釋放S能障礙綜合征S，是一種嚴(yán)峻的全身感染性疾病。病人血流中存在活的微生物對診斷和預(yù)后都有重〔或〕〔或感染灶〕去除，同時(shí)從血中分別的病原菌類型對預(yù)后也有重要的提示信息。其次節(jié)樣本采集和運(yùn)送一、血培育送檢指征：當(dāng)病人消滅以下系統(tǒng)炎癥反響的臨床或試驗(yàn)室特征時(shí)應(yīng)次/PaCO2＜32mmHg；白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞12*109/L或＜4*109/L。二、采血時(shí)機(jī)前采血培育。1患者有利，故做出以上建議。二、血培育的次數(shù)2—3套血培育，至少做到“雙瓶雙側(cè)”。嬰幼兒患者，推舉同時(shí)采集2次(不同部位)血培育標(biāo)本。1采集一套血培育。一次靜脈采血注入到多個(gè)培育瓶中應(yīng)視為單個(gè)血培育。l2380％90%。單瓶的血培育檢出率不高，而且結(jié)果很難做出臨床解釋。2525天內(nèi)，血液中的細(xì)菌不會馬上消逝。一般來說菌血癥(真菌血癥)患者可通過臨床表現(xiàn)來推斷療效，無需復(fù)查血〔或真菌血癥〕是否被去除可被用于評估和指導(dǎo)治療；其次4896小時(shí)的追蹤可以很好的推想簡潔的金黃色葡萄球菌菌血癥。三、采血量10ml5ml，2ml〔1。說明：血標(biāo)本采集的量是影響檢出率的最重要的因素，成人血培育采血量在2-30m11ml同于成人。試驗(yàn)室必需依據(jù)血培育瓶廠家的建議，采集足夠的血液標(biāo)本。血液量是否符合要求，并準(zhǔn)時(shí)反響給臨床，這是質(zhì)量保證的一項(xiàng)重要指標(biāo)。四、血液標(biāo)本在需氧瓶和厭氧瓶中的安排當(dāng)采血量不能滿足推舉的采血量時(shí)，應(yīng)首先滿足需氧瓶的需要。說明：承受一對(需氧瓶+厭氧瓶)組合比承受二個(gè)需氧瓶的組合可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細(xì)菌和厭氧菌。五、采血要求〔一〕皮膚消毒：推舉使用碘酊、次氯酸和洗必泰或碘伏作為皮膚消毒劑說明：碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要優(yōu)于碘伏；消毒劑要有足夠的作用時(shí)間以保證消毒效果〔301.5-2；洗必泰的作2〔二〕推舉從外周靜脈采集血液標(biāo)本。說明：不建議采集：1，動脈血，因其診斷價(jià)值不大；2，靜脈留置導(dǎo)管，集另外一個(gè)血培育標(biāo)本，以幫助陽性結(jié)果的判讀?！踩橙绾蜗鳒p污染170％異丙醇酒精消毒并枯燥，然后再進(jìn)展穿刺部位的皮膚消毒。2、嚴(yán)格依據(jù)皮膚消毒步驟操作(酒精、碘酊、酒精)，并等待足夠的消毒時(shí)間3、嚴(yán)格無菌操作，不允許在消毒后按壓靜脈，除非帶有無菌手套。4、不推舉采血后更換注射器針頭接種血培育瓶，承受真空采血裝置能降低污染率。六、標(biāo)本的運(yùn)送要求和拒收標(biāo)準(zhǔn)〔一〕運(yùn)送要求11小時(shí)內(nèi)送往試驗(yàn)室。2、接種前或后的血培育瓶均不得冷藏或冷凍。〔二〕拒收標(biāo)準(zhǔn)：如遇以下狀況，試驗(yàn)室應(yīng)拒收并要求重送1、標(biāo)簽錯(cuò)誤或未貼標(biāo)簽。2、血培育瓶破損或滲漏。3、血液凝固。第三節(jié)血培育標(biāo)本分別病原菌的關(guān)鍵要素一、培育設(shè)備：提倡使用全自動血培育儀，可以更早覺察病人的菌血癥。二、〔〕-肉湯比例〔例如：補(bǔ)體、溶菌酶、抗體、抗生素〔假設(shè)病人采血前已承受抗生素治療。為了削減這些抑菌因子濃度從而降低其抑菌活性，通常血-1:51:10，一些商品化血培育瓶使用的血-1:5是由于在其中增加了與血中抑制因子結(jié)合并使其失活的特別物質(zhì)；兒科病人的血標(biāo)本可以被接種入專為兒科設(shè)計(jì)的血培育瓶，這些瓶子可以接種較少的血容量卻保持了合理的血-肉湯比例。四、培育基的選擇推舉使用商品化的培育基。(如樹脂或活性碳)五、孵育條件1、溫度：35℃，35℃2、氣體：商品化的需氧血培育瓶中參與了不等量的二氧化碳，厭氧瓶中則參與了二氧化碳和氮?dú)庖岳诓煌N類細(xì)菌的生長。五、培育周期57天。5天后陰性標(biāo)本無需進(jìn)展常規(guī)轉(zhuǎn)種。95％—973—4〔1028。六、培育瓶搖動24瓶的。七、監(jiān)控頻率查來檢查細(xì)菌生長狀況。和厭氧血培育瓶中細(xì)菌生長曲線。當(dāng)消滅提示生長的陽性信號時(shí)進(jìn)展次代培育。第三節(jié) 特別類型的血培育一、真菌血培育：疑心真菌菌血癥的患者承受需氧血培育瓶采集標(biāo)本。2-5〔如光滑念珠菌、型隱球菌〕則需要更長的孵育時(shí)間。雙相真菌雖然可以在多數(shù)商業(yè)化的需氧血培育瓶中生長，但檢測可能需要2-4周的時(shí)間，因此全自動血培育系統(tǒng)不適用于雙相真菌的檢測，一旦疑心為雙相真菌或絲狀真菌感染，血二、分枝桿菌血培育425-30℃。補(bǔ)充白蛋白、脂肪酸和二氧化碳，日內(nèi)瓦分枝桿菌、嗜血分枝桿菌等菌還需要添加分枝菌素、血紅素、血紅蛋白、枸櫞酸鐵銨等物質(zhì)。三、導(dǎo)管相關(guān)的血流感染〔CRBSI〕〔一〕短期外周導(dǎo)管2〔雙側(cè)雙瓶Maki半定量培育。5cm，15〔4℃保存不超2〕。試驗(yàn)室人員用無菌鑷子將導(dǎo)管在血瓊脂平板上穿插滾動415結(jié)果解釋如下：假設(shè)一套或多套血培育陽性，同時(shí)導(dǎo)管片段培育為陽性(半定量≥15個(gè)菌CRBSI。CRBSI。CRBSI。CRBSI?！捕持行撵o脈導(dǎo)管及靜脈留置口：方法一：至少實(shí)行2套血培育，其中至少一套來自外周靜脈，并做好標(biāo)記，接近，各自做好標(biāo)記。結(jié)果解釋如下：CBBSI。假設(shè)兩套血培育陽性且為同一種細(xì)菌，而且來自導(dǎo)管的血培育報(bào)陽時(shí)間比120分鐘，而兩套血培育陽性為同一種細(xì)菌且耐藥譜全都，同時(shí)缺乏其它感染證據(jù)，也提CBBSI。5倍于外周CFUs／mlCRBSI,(適用于手工定量血培育系統(tǒng))。CRBSI，可能為寄生菌或采集時(shí)污染。·假設(shè)僅呈來自外周靜脈的血培育為陽性，不能定為CRBSI，但如培育結(jié)果為CRBSI。CRBSI。方法二：從獨(dú)立的外周靜脈無菌采集2套血培育。無菌狀態(tài)下取出導(dǎo)管并剪下5cmMaki半定量平板滾動培育。結(jié)果解釋如下：CRBSI。假設(shè)一套或多套血培育陽性，同時(shí)導(dǎo)管末梢培育為陰性：如培育結(jié)果為金認(rèn)可能要求血培育陽性結(jié)果且是同一種細(xì)菌作為結(jié)果支持。CRBSICRBSI。四、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎24小時(shí)內(nèi)仍報(bào)25套。30分鐘之內(nèi)抽取血培育。301小時(shí)之內(nèi)連續(xù)抽取數(shù)套血培育，管的血培育會伴有很高的污染風(fēng)險(xiǎn)從而導(dǎo)致錯(cuò)誤的心內(nèi)膜炎的結(jié)論。第五節(jié)結(jié)果報(bào)告一、血培育結(jié)果報(bào)告原則：緊急處理和優(yōu)先原則：血培育的結(jié)果，無論陰性和陽性結(jié)果，對患者的治療都很緊急!測的進(jìn)展?fàn)顩r，該系統(tǒng)應(yīng)包括：血培育已開單但未收到血培育已收到，符合采樣要求血培育已收到，不符合采樣要求檢測中，尚無結(jié)果24小時(shí)無生長48小時(shí)無生長陽性報(bào)警，分別培育和藥敏進(jìn)展中，初步涂片染色結(jié)果陽性培育結(jié)果(細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)的最終結(jié)果)二、血培育結(jié)果的分級報(bào)告制度〔一〕初步報(bào)告：緊急口頭()報(bào)告60分鐘內(nèi)，馬上進(jìn)展革蘭染色、顯微鏡鏡檢，并將結(jié)果向臨床主管醫(yī)生進(jìn)展緊急口頭()4小時(shí)內(nèi)將數(shù)據(jù)錄入信息系統(tǒng)?？陬^報(bào)告包含以下內(nèi)容，并記錄在案：報(bào)告的時(shí)間(無論成功或不成功)所聯(lián)系醫(yī)生的全名(或工號)報(bào)告鏡檢結(jié)果并強(qiáng)調(diào)其緊急價(jià)值〔二〕最終結(jié)果(書面)報(bào)告無菌生長陽性培育結(jié)果：最終鑒定結(jié)果和藥敏結(jié)果〔三〕其他報(bào)告和記錄標(biāo)本被柜收時(shí)，需即刻通知臨床馬上重采血，并記錄在案最終結(jié)果與緊急口頭報(bào)告結(jié)果不符，需要變更時(shí)，需即刻與臨床溝通，做采集份數(shù)不夠等信息第六節(jié)血培育的質(zhì)量把握一、 檢測前的質(zhì)量保證和處理〔一〕病人評估：試驗(yàn)室應(yīng)制定指南，明確血培育的臨床指征〔二〕血培育標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)的制定和培訓(xùn)血培育標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)包括：·采血指征·采血時(shí)機(jī)·采血標(biāo)準(zhǔn)流程·標(biāo)本的運(yùn)送要求·血培育結(jié)果報(bào)告所需的檢驗(yàn)工程，標(biāo)準(zhǔn)的診斷名稱，以及相關(guān)試驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)室必需為SOP〔三〕標(biāo)本采集52毫升)，并嚴(yán)格把握無菌操作規(guī)程。定期統(tǒng)計(jì)以下數(shù)據(jù)，作為QA指標(biāo)：血培育污染率(應(yīng)低于3％)低于建議的采血量的血培育樣本比例單次或單瓶的比例被拒收的比例〔四〕2小時(shí)QA2小時(shí)的比例?！参濉硺颖窘邮蘸吞幚戆ㄔu估是否可被接收、柜收標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)室接收記錄和接種流程等。被柜收的標(biāo)本需馬上通知臨床。QA舉例：被拒收血培育標(biāo)本的臨床溝通文件。二、分析中質(zhì)量保證SOP，做出明確和具體的規(guī)定血培育微生物檢測的步驟菌株鑒定和相關(guān)菌株的藥敏要求結(jié)果的解讀時(shí)，須有試驗(yàn)室主管確實(shí)認(rèn)意見)陽性和陰性結(jié)果的解釋可能消滅的假陰性和假陽性結(jié)果，并分析緣由釋結(jié)果的信息地記錄。三、分析后的質(zhì)量保證包括報(bào)告、標(biāo)本和記錄的治理、詢問〔一〕報(bào)告血培育的報(bào)告在發(fā)出前