動物蛋白質(zhì)的胃蛋白酶消化率(體外消化)

動物蛋白質(zhì)的胃蛋白酶消化率〔體外消化〕一、適用范圍：二、原理：用脫脂的樣本在一個熱的胃蛋白酶溶液中，穩(wěn)定地不斷攪拌約16蛋白質(zhì)全部作為可消化的，并用其對粗蛋白質(zhì)的百分率來表示。三、設(shè)備：1、恒溫水浴振蕩器：45±2℃。2、測定粗蛋白質(zhì)的全套設(shè)備。3、過濾裝置。、索氏脂肪浸提器。四、試劑：除測定粗蛋白質(zhì)用的試劑外，尚需以下試劑：10.26.1ml1L0.2%胃蛋白酶溶液。21：3000342—45℃，2g,輕輕地攪動，使其溶解0.2%胃蛋白酶溶液。五、測定步驟：11g脫脂試樣，放入300ml〔42—45℃〕0.2150ml，蓋好塞子，在45℃16化管中，依據(jù)測定粗蛋白質(zhì)含量的方法，測定不消化物中的粗蛋白質(zhì)含量。率。六、測定結(jié)果計算與分析：1、計算：A-B動物蛋白質(zhì)胃蛋白酶消化率〔%〕= ×100A式中：A—試樣中粗蛋白質(zhì)的含量〔%。B—試樣中的不消化物粗蛋白質(zhì)的含量〔%。2、分析：合格的魚粉，其粗蛋白質(zhì)的胃蛋白酶消化率應(yīng)不小于85%；羽毛粉應(yīng)在75%以上。植物油脂檢驗不皂化物測定法GB 5535-85本標(biāo)準(zhǔn)適用于商品植物油不皂化物的測定。油脂中不皂化物即油脂皂化時，與堿不起作用的，不溶于水的物質(zhì)，包括留醇，脂溶性維生素的色素等。一、儀器和用具：錐形瓶：250ml冷凝管恒溫水浴鍋電爐分液漏斗：250ml量筒：50ml索氏抽提器燒杯、等二、試劑：1.0N氫氧化鉀乙醇溶液0.5N氫氧化鉀水溶液乙醇、乙醚(2：1)三、操作方法：5g〔W〕1.0NKOH50ml，連接30min，煮到溶液清亮透亮為止。用50ml蒸餾水將50ml1min后，靜止分層。將下層皂化液放入其次只分液漏斗中，每次用50ml乙醚提取兩次。合并20ml20ml猛烈振搖洗滌兩次。次。最終用水洗至加酚酞指示劑時不顯紅色為止。1h，冷卻稱3030ml0.02N氫氧化鉀滴定至粉紅色。四、結(jié)果計算：油脂中不皂化物含量按以下公式計算：不皂化物〔%〕100(W1W028VN)式中：W1——殘留物重量，gW——試樣重量，gV——滴定所消耗的氫氧化鉀溶液體積，mlN——氫氧化鉀溶液的當(dāng)量濃度0.28——每毫克當(dāng)量的油酸重量，g數(shù)點后第一位。過氧化值的測定一、適用范圍：二、原理：油脂氧化過程中，產(chǎn)生的過氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘；以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算含量。三、試劑：114g10ml解，冷卻后貯于棕色瓶中?，F(xiàn)用現(xiàn)配。240ml60ml3、0.02mol/L5g〔NaSO·5HO〕223 2〔或3g無水硫代硫酸鈉1000ml水中，緩緩煮沸10分鐘，冷卻。放置兩周后過濾備用。4、1%0.5g，50ml四、測定步驟：250ml30ml1.00ml75ml1ml終點。同時作空白試驗。五、測定結(jié)果的計算與分析：1、計算：X=[〔V-V0〕×N×0.1269]/m式中：X—樣品的過氧化值，%。V—樣品消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，ml。ml。0N—硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的麾爾濃度，mol/L。2、分析：0.15%。附：0.02mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定1、標(biāo)定：0.15g120325ml2g20ml20%10min加150m水，用配制好的硫代硫酸鈉溶液滴定。近終點時加 3ml淀粉指示液(5g/L)，連續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色。同時作空白試驗。2、計算:C= m(V1V0)0.04903式中：C—硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之物質(zhì)的量濃度，mol/L。m—重鉻酸鉀之質(zhì)量，g。Vml。1Vml。01.00mlC=1.0mol/L】相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜闹劂t酸鉀的質(zhì)量。一、原理：

揮發(fā)性鹽基氮的測定(VBN)〔半微量定氮法〕蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計算含量。二、試劑：氧化鎂混懸液〔10g/1.0g100ml硼酸吸取液〔20g/L〕鹽酸[c〔HCl〕=0.010mol/L]或硫酸[c〔1/2HSO〕=0.010mol/L]的標(biāo)準(zhǔn)滴2 4定溶液。甲基紅—乙醇指示劑〔2g/L〕次甲基藍(lán)指示劑〔1g/L〕臨時將上述兩種指示液等量混合為混合指示劑。三、儀器：半微量定氮器0.01ml四、分析步驟：試樣處理：將試樣除去脂肪、骨及腱后，絞碎攪勻，稱取約10.0g，置于錐100ml30min后過濾,濾液幟置冰箱備用。10ml5滴~6滴混合指示液的錐形瓶置于冷凝5.0ml上述試樣濾液于蒸5ml氧化鎂混懸液(10g/L)，快速蓋塞，并加水以防漏氣，通〔0.010mol/L〕或硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，終點至藍(lán)紫色。同時做試劑空白試驗。五、計算結(jié)果：試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量按式⑴進(jìn)展計算。12XV Vc12

100m5/100式中：V1——測定用樣液消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為毫升〔ml〕V2——試劑空白消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，單位為毫升〔ml〕m——試樣質(zhì)量，單位為克〔g〕六、周密度：10%。三甲胺的測定一、原理：10.03化膽堿的含量。二、儀器與試劑：同粗蛋白質(zhì)的測定。三、測定步驟：10.45gN?？?1g10次左右，取出濾紙及殘留物烘干，以凱氏定氮法測定含氮量，即為載體含氮量N133g100ml，0.55ml進(jìn)展蒸餾，測其含氮量，即為水溶氮。四、測定結(jié)果的計算與分析：1、計算：N-N-N

總 1 210.03三甲胺的含量%=水溶氮的含量 59142、允許差：1%，取其算術(shù)平均值為測定結(jié)果。烏洛托品鑒別〔六次甲基四胺〕氫氧化鉀；硫酸溶液：6+100；鈉氏試劑；100ml20ml棕色中保存；pH4.5～8.0〔紅→藍(lán)二、鑒別方法：0.5g10ml20ml驗溶液。10ml參加2g氫氧化鉀，連續(xù)加熱產(chǎn)生的蒸汽能使?jié)櫇竦募t色石蕊試紙變藍(lán)，證明有甲醛和氨產(chǎn)生，判定樣品中含有六次甲基四胺。TBA一、原理：油脂受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反響，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與TBA〔硫代巴比妥酸〕作用生成粉紅色化合物，在538nm波特長有吸取頂峰，利用此性質(zhì)即能測出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。二、試劑：100ml〔TBA100ml0.02M；三氯乙酸混合液：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸〔分析純〕7.5g0.1gEDTA，用水溶100ml；氯仿〔分析純；丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至100ug10ml，100ml，ml10ug，備用。三、操作步驟：⑴標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制測定步驟進(jìn)展，測得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。⑵樣品測定：5-10g100ml25ml三氯乙酸混合液，振搖半小時〔保持油脂融溶狀態(tài)，如冷結(jié)即在70℃水浴上略微加熱使之溶化后連續(xù)振搖過濾一次。準(zhǔn)確移取上述濾液5ml置于25ml5mlTBA90℃40min1h，5min，上清25ml5ml532nm〔同時做空白試驗。四、計算丙二醛含量〔mg/kg〕C205m式中：C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù)〔ug〕m——樣品質(zhì)量〔g〕光密度：TBA〔A532/kg〕=A532〔V1VmV

10001式中：V——油脂用三氯乙酸定容體積，mlVml1VTBAml2飼料中粗脂肪的測定一、適用范圍：本方法適用于各種單一、混合、協(xié)作飼料和預(yù)混料。二、原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取風(fēng)干試樣中的脂肪，計算樣品的失重。其中粗脂肪或乙醚提取物。三、儀器設(shè)備：1、試驗室用樣品粉碎機(jī)或研缽。20.45mm〔40。30.0001g。4、電熱恒溫水浴鍋：室溫—100℃。5、枯燥箱：50℃—200℃。6、索氏脂肪提取器〔帶球形冷凝器100150ml。7、濾紙：中速、脫脂。8、枯燥器：用變色硅膠為枯燥劑。四、試劑：無水乙醚〔分析純。五、試樣的選取和制備：50g，40六、測定步驟：1、將棉線繩剪成適當(dāng)大小置于無水乙醚中浸泡24小時〔留意密閉、防火〕后取出，曬干備用。將濾紙置于105℃22、將待測試樣粉碎過40目后，取適量于135℃枯燥箱內(nèi)枯燥40分鐘，制成風(fēng)干樣品。并用處理好的棉線繩系好。460—100ml無水乙醚，在40—45℃的水浴中加熱，使乙醚回流。待3小時左右〔油高的5小時〕用濾紙檢查抽提管流出的乙醚，揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點。5、取出試樣后，置于恒重的鋁盒內(nèi)，于135℃4030七、測定結(jié)果的計算和表達(dá)：1、風(fēng)干樣中粗脂肪含量：M-〔M-M-M〕EE%=0 3 2 1 ×100M0其中：M0M1M2M3

為風(fēng)干試樣重，g。為濾紙恒重，g。為鋁盒恒重，g。為烘后鋁盒+濾紙包重，g。2、原樣中粗脂肪含量：EE%=〔1-原樣中水份含量〕×風(fēng)干樣中粗脂肪含量3、重復(fù)性：每個試樣取兩個平行樣進(jìn)展測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。10%以上〔10%〕3%；105%。油脂酸敗試驗〔間苯三酚試紙法〕一、儀器和用具：電爐移液管、棕色瓶等二、試劑：間苯三酚試紙：取長7cm4cm的濾紙條，浸入0.1%間苯三酚-乙醇3min鹽酸3、操作方法：5ml5～620min。試紙變紅為陽性，表示有醛類存在，試樣已發(fā)生酸敗；試紙呈黃色或橙色時為陰性。玉米脂肪酸值的測定一、原理：在室溫下用無水乙醇提取玉米中的脂肪酸，用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鉀溶液滴定，計算脂肪酸值。二、試劑和材料：除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。1、無水乙醇2、酚酞-乙醇溶液〔10g/L：1.0g100ml95%〔V/V〕乙醇。3、c〔KOH〕=0.01mol/L氫氧化鉀-95%乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c〔KOH〕=0.5mol/LCO2〔20ml〕24h中。c〔KOH〕=0.5mol/L50ml不含CO2蒸餾水中，滴加酚酞-乙醇指示劑3～5滴，用配制的氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏液滴定至微紅色，以30s不褪色為終點，登記所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏液ml〔V1，同時做空白試驗〔不加鄰苯二甲酸氫鉀，同上操作，登記所耗氫ml〔V0。按下式計算氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏液濃度。C〔KOH〕= 1000m (1 V V)204(1 式中：c〔KOH〕——氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏液濃度，mol/L1000——換算系數(shù)m——稱取鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，gV1——滴定所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏液體積，mlV0——空白試驗所耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏液體積，ml204.22——鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量，g/mol注：氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)儲藏溶液按要求定時復(fù)標(biāo)4、c〔KOH〕=0.01mol/L氫氧化鉀-95%乙醇標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液20.0ml0.5mol/L1000ml，盛放于聚乙烯塑料瓶中，臨用前稀釋。三、儀器與設(shè)備：具塞磨口錐形瓶：250ml移液管：50.0ml、25.0ml微量滴定管：5ml，0.02ml；10ml0.05ml0.01g/min四、分析步驟：1、試樣處理：10g0.01g250ml10min100/min。1～2min，在玻璃漏斗中放入折疊濾紙過濾，并加蓋濾紙。棄去最初幾滴濾25ml2、測定：150ml50mlCO2呈微紅色，30s-95%乙醇溶液體積〔V1〕CO2參照相比有色差時，即可視為已到滴定終點。3、空白試驗：25.0ml150ml50mlCO23～-95%乙醇溶液體積〔V0〕五、結(jié)果計算：脂肪酸值〔KOHmg/100g〕=11220 (V1V0)cm

× 100 100w式中：V1——滴定試樣所耗氫氧化鉀-95%乙醇溶液體積，mlV0——滴定空白所耗氫氧化鉀-95%乙醇溶液體積，mlc——氫氧化鉀-95%乙醇溶液的準(zhǔn)確濃度，mol/L50——提取試樣用無水乙醇的體積，ml25——用于滴定的濾液的體積，ml干〕試樣的質(zhì)量，gm——試樣的質(zhì)量，g100gg六、結(jié)果表示：每份試樣取兩個公平樣進(jìn)展測定，以其算術(shù)平均值為測定結(jié)果，計算結(jié)果保存小數(shù)點后一位數(shù)。七、重復(fù)性：2mgKOH/100g。氟的測定⒈原理：

離子選擇性電極法2.303RT式〔E=Eo-F

lgc。FElgcF

呈線性關(guān)系。2.303RT/F為該直線的斜率〔25℃時為59.16。在水溶液中，易與氟離子形成絡(luò)合物的三價鐵Fe3+、三價鋁Al3+〕及硅酸根SiO2-〕等3離子干擾氟離子測定，其他常見離子對氟離子測定無影響。在測量溶液的酸度為pH5～6，用總離子強(qiáng)度緩沖液消退干擾離子及酸度的影響。⒉試劑和溶液試劑均為分析純；GB/T6682全部溶液貯于聚乙烯塑料瓶中。⑴c〔CHCOONa?3HO〕=3mol/L3 2稱取204g〔CHCOONa3H300ml1mol/L3 2乙酸〔GB/T676〕pH7.0500ml⑵c〔NaCHO?2HO〕=0.75mol/L3657 2稱取110g檸檬酸鈉〔NaCHO2HO，溶于約300ml水中，加高氯酸〔HClO〕14ml，移入3657 2 4500ml⑶總離子強(qiáng)度緩沖液乙酸鈉溶液〔1〕與檸檬酸鈉溶液〔2〕等量混合，臨用時配制。⑷c〔HCl〕=1mol/L量取10ml鹽酸〔GB/T622，加水稀釋至120ml。⑸氟標(biāo)準(zhǔn)溶液氟標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取經(jīng)100℃4h〔GB/T1264〕0.2210g，溶于水，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，混勻，貯備于塑料瓶中，置冰箱內(nèi)保存，此液每毫升相當(dāng)于1.0mg10.00ml100ml100.0ug10.00ml100ml10.0ug⒊儀器、設(shè)備氟離子選擇電極：測量范圍10-1mol/L～×10-7mol/L，pF-1甘汞電極：232磁力攪拌器。酸度計：測量范圍0.0～-1400mV，pHS-30.0001g。納氏比色管：50ml。容量瓶：50，100ml。超聲波提取器。⒋試樣制備2kg，250g，0.42mm品瓶，密閉保存，備用。⒌分析步驟⑴氟標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備吸取氟標(biāo)準(zhǔn)稀溶液0.50、1.00、2.00、5.00、10.00ml，再吸取氟標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00、5.00ml，分別置于50ml5.00ml0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、10.0ug/ml。⑵試液制備a、飼料試液制備〔除飼料級磷酸鹽外〕準(zhǔn)確稱取約含2023ug氟的試樣〔準(zhǔn)確至0.0002g，置于50ml納氏比色管中，參加鹽酸溶液5.0ml，密閉提取1h〔不時輕輕搖動比色管，應(yīng)盡量避開樣品粘于管壁上，或置于超聲20min25ml濾液供測定用。b、磷酸鹽試液制備0.5～1g〔0.0002g〕置于100ml5.00ml50ml25ml度，混勻。供測定用。⑶測定將氟電極和甘汞電極與測定儀器的負(fù)端和正端聯(lián)接，將電極插入盛有水的50ml聚乙烯塑料燒杯中，并預(yù)熱儀器，在磁力攪拌器上以恒速攪拌，讀取平衡電位值，更換2～3次水，待電位值平衡后，即可進(jìn)展標(biāo)準(zhǔn)液和試樣液的電位測定。由低到高濃度分別測定氟標(biāo)準(zhǔn)工作液的平衡電位。同法測定試液的平衡電位。⒍分析結(jié)果計算和表述⑴飼料中氟含量計算飼料〔除飼料添加劑級磷酸鹽外〕按式①計算出試樣中氟的含量：501000X=m1000

50 ①m式中：X——試樣中氟的含量，mg/kg；ρ——試樣中氟的濃度，ug/ml；m——試樣質(zhì)量，g；50——測試液體積，ml。磷酸鹽按式②計算出試樣中氟的含量：501000X=m1000

100 5

1000 ②m⑵結(jié)果表示每個試樣取兩個平行樣進(jìn)展測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果，結(jié)果表示到0.1mg/kg。⒎允許差同一分析者對同一飼料同時或快速連續(xù)地進(jìn)展兩次測定，所得結(jié)果之間的相對偏差：50mg/kg10%；50mg/kg5%。飼料酸結(jié)合力的測定方法儀器設(shè)備：1000ml容量瓶，酸式滴定管，250ml燒杯，分樣篩，鐵架臺，玻棒。試劑：NaOH校準(zhǔn)濃度。飼料樣品：實行肯定數(shù)量的玉米、豆粕、小麥、菜粕、棉粕、次粉、小麥麩、魚粉、磷酸氫鈣、石粉、乳清粉、酸化劑、玉米蛋白粉、肉粉等飼料樣品，粉碎并通過肯定規(guī)格的分樣篩。測定方法：粉碎的樣品進(jìn)展篩分〔<0.25m，后用四分法取樣。準(zhǔn)確稱取10.0g于枯燥250ml90ml的去離子水，在恒溫水浴中加熱，至溫度37℃±1℃內(nèi)。將酸度計電極插入溶液中，待pH值恒定后登記1ml，滴入后至pH值恒定時記錄數(shù)值。植物油脂檢驗皂化值的測定 GB5524一、定義：在規(guī)定條件下皂化1g油脂所需的氫氧化鉀毫克數(shù)為皂化值。二、原理：在回流條件下將樣品和氫氧化鉀-滴定過量的氫氧化鉀。三、試劑：全部試劑必需是分析純級，使用水為蒸餾水或與其相當(dāng)純度的水。10.5mol/L95%〔V/V〕乙醇中。此溶液應(yīng)為無色或淡黃色。通過以下步驟可制得穩(wěn)定的無色溶液。8g5g1L1h，馬上蒸餾。將需要量的氫將此液貯存在配有橡皮塞的棕色或黃色玻璃瓶中備用。2、鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c〔HCI〕=0.5mol/L10g/L95%〔V/V〕6B20g/L95%〔V/V〕乙醇。、助沸物：玻璃珠或瓷粒。四、儀器：2、回流冷凝管：帶有連接錐形瓶的磨玻璃接頭。3、加熱裝置：如水浴鍋、電熱板或其他