大腸桿菌及其檢驗

大腸桿菌及其檢驗一、大腸桿菌的生物學(xué)特性

1、簡介大腸埃希氏菌習(xí)慣稱為大腸桿菌，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬，大腸桿菌為人和動物腸道中的常居菌，一般多不致病，在一定條件下可引起腸道外感染。2、形態(tài)與染色大小0.4～0.7×1～3um,無芽胞,大多數(shù)菌株有動力。有普通菌毛與性菌毛，有些菌株有多糖類包膜，革蘭氏陰性桿菌3、培養(yǎng)特性由于此菌合成代謝能力強，在含無機鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46℃。

（1）光滑型

（2）粗糙型4、生化反應(yīng)

大部分菌株發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并發(fā)酵葡萄糖、麥芽胞、甘露醇、木膠糖、阿拉伯膠等產(chǎn)酸產(chǎn)氣。5、抗原構(gòu)造

比較復(fù)雜，主要由菌體O抗原、鞭毛H抗原、夾膜K抗原組成。6、抵抗力

該菌對熱的抵抗力較其他腸道桿菌強，55℃經(jīng)60分鐘或60℃加熱15分鐘仍有部分細菌存活。在自然界的水中可存活數(shù)周至數(shù)月，在溫度較低的糞便中存活更久。二、致瀉性大腸桿菌簡介

某些血清型菌株的致病性強，引起腹瀉，與人類疾病有關(guān)的大腸桿菌，統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌（enterovirulent

E.coli）。

一般包括四種：腸毒素性大腸桿菌（ETEC）：引起嬰幼兒和旅游者腹瀉，出現(xiàn)輕度水瀉，也可呈嚴重的霍亂樣癥狀。致病性大腸桿菌（EPEC）：是嬰兒腹瀉的主要病原菌，有高度傳染性，嚴重者可致死；成人少見。出血性大腸桿菌（EHEC）：O157：H7侵襲性大腸桿菌（EIEC）：引起散發(fā)性或暴發(fā)性出血性結(jié)腸炎

三、大腸桿菌的檢驗方法

1、樣品制備以無菌操作取25g樣品,放入裝有225mL稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi),于8000r/min均質(zhì)1～2min,制成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。從制備樣品勻液至稀釋完畢,全過程不得超過15min。

2、LST和EC初步篩選

對每個樣品,選擇適宜的三個連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL。將接種管置于36±1℃培養(yǎng)48±2h。觀察試管的產(chǎn)氣情況：檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生,用直徑為3mm的接種環(huán)將所有48±2h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于EC肉湯管中。將所有接種的EC肉湯管在30min內(nèi)放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內(nèi),培養(yǎng)48±2h。3、EMB平板

取其產(chǎn)氣管的培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍(EMB)平板,36±1℃培養(yǎng)24±2h。檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。如有典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個典型菌落；如無典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位,移種到營養(yǎng)瓊脂斜面上,36±1℃培養(yǎng)18～24h。4、生化試驗1）靛基質(zhì)試驗2）MR-VP試驗3）檸檬酸利用試驗

5、結(jié)果報告大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,生化試驗為＋＋－－或－＋－－，再根據(jù)LST肉湯陽性管數(shù)查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值。

四、致瀉性大腸桿菌的檢驗

1、增菌以無菌手續(xù)稱取檢驗25g，加在225mL營養(yǎng)肉湯中，以均質(zhì)器打碎1min或用乳缽加滅菌砂磨碎。挑取1環(huán)，接種于1管30mL腸道菌增菌肉湯內(nèi)，于42℃培養(yǎng)18h。2、分離3、生化試驗1）三糖鐵瓊脂(TSI)2）靛基質(zhì)3）半固體4）pH7.2尿素瓊脂5）KCN肉湯

TSI低