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表面活性劑分類TheSurfactantToolKitCationic陽(yáng)離子表面活性劑S8,Nonionic非離子型表面活性劑S2,S3,S10,S11,S12,S13,S14,S15,S16,S17,S18,S19,S20,S21,22,S23,S24,S25,Amphoteric兩性表面活性劑S9,Anionic陰離子表面活性劑S1,S4,S5,S6,S7,HLB代表親水-疏水平衡系數(shù);數(shù)字越大,親水性越強(qiáng);只適用于非離子型的表面活性劑。表面活性劑定義及功能表面活性劑是一個(gè)比洗滌劑更流行的術(shù)語(yǔ),通常作為潤(rùn)濕劑、增溶劑、乳化劑、分散劑和其他洗滌劑的總稱。表面活性劑幾乎總是使相同粒子分開(kāi)到不同表面,從而減少同粒子之間的相互吸引作用。定義:潤(rùn)濕增溶乳化分散洗滌功能減少液體表面張力,這只是表面活性劑的一個(gè)功能。這樣它通過(guò)減少相似相同分子之間相互吸引(例如水)和增加朝向不同表面的引力,這在重新建立干粉、干燥珠或生成固相試劑中非常重要。如果重組的速度和均勻度很重要,那么良好的潤(rùn)濕劑是必不可少的。S-15、S-24、S-16和S-06是非常好的潤(rùn)濕劑。能夠增溶其他非溶解質(zhì)的物質(zhì)都是表面活性劑。如果表面活性劑的濃度過(guò)高,則形成膠團(tuán)結(jié)構(gòu)。非水溶性分子被納入膠團(tuán)結(jié)構(gòu)并被帶到溶液的表面。通常情況下,試劑開(kāi)發(fā)商都面臨著進(jìn)退兩難,必須使用水不溶性物質(zhì)溶到水溶液中或水溶性物質(zhì)溶于有機(jī)溶劑中。具有增溶特性的表面活性劑可以解決任一問(wèn)題。我們?cè)?jīng)使用S-01溶解重氮鹽于丙酮中。潤(rùn)濕增溶乳化分散兩個(gè)或更多非互溶液體形成穩(wěn)定的乳化劑是表面活性劑的特性。這有一點(diǎn)像膠團(tuán)增溶,但由此產(chǎn)生的溶顆粒更大。有時(shí)候你想讓試劑-油的形式進(jìn)入水溶液中,可以使用下面幾個(gè)表面活性劑;例如S-12、S-13、S-21、S-19和S-20等等,它們可以幫助你。保持不溶性微粒的懸浮是表面活性劑的一個(gè)重要特性。這樣可以防止不溶性微粒互相聚集在一起。顆粒越小,分散形成越穩(wěn)定。你是否曾經(jīng)在放大化生產(chǎn)中遇到過(guò)配好的試劑會(huì)沉淀析出,迄今始終沒(méi)有解決?你最可怕的噩夢(mèng)!有時(shí)候甚至最好的努力也不會(huì)讓東西處于溶解狀態(tài)中,那么你就需要一個(gè)具有良好的分散特性的表面活性劑。在這里S-09、S-05和S-17是很好的選擇。洗滌表面活性劑具有從物體表面去除顆粒的能力。我們使用這個(gè)狹義定義來(lái)描述洗滌劑。把表面活性劑這個(gè)功能比作清洗織物中土壤的升降機(jī)。在試劑的研制設(shè)置中,它可以盡可能釋放反應(yīng)物從潤(rùn)濕的膜、濾紙、玻纖上等等。表面活性劑帶有長(zhǎng)的直碳鏈,例如S-06、S-07和S-22,其長(zhǎng)的直碳鏈通常是最有效的。金子墊應(yīng)該經(jīng)預(yù)處理,確保適宜的釋放和穩(wěn)定性能。墊的處理是浸泡在由蛋白、表面活性劑和聚合物構(gòu)成的水溶液中,然后干燥。輔料墊可以被化學(xué)藥品浸漬減少樣品成分差異、提高檢測(cè)靈敏度。去污劑、增稠劑、阻滯劑和鹽通常可以經(jīng)干燥后加入樣本墊。此工藝可以避免使用復(fù)雜的顯影/追蹤緩沖液,實(shí)現(xiàn)真正的一步檢測(cè)。編號(hào)商品名功能編號(hào)商品名功能S-01Ninate411可作為溶劑;良好的乳化劑。S-14Triton(tm)X-100乳化,潤(rùn)濕,分散;完全兼容酶S-02Pluorinic(tm)F68極好的增溶洗滌劑;可能不溶血的S-15Triton(tm)X305非溶血的;完全可溶于水;良好的潤(rùn)濕劑和乳化劑S-03Zonyl(tm)FSN100非常低濃度起到極好的潤(rùn)濕劑作用;可溶于30%醇類中S-16Silwet(tm)L7600非溶血的;基于硅膠;水溶性的,防霧性的S-04Aerosol(tm)OT100%TMB溶液系統(tǒng)中的有效成分,一種強(qiáng)的潤(rùn)濕劑和乳化劑,具有良好的防霧、防霉和分散性。S-17RhodasurON-870乳化劑,增溶劑,分散劑S-05Geropon(tm)T-77具有良好的潤(rùn)濕和分散性能S-18Cremophor(tm)EL非溶血的;溶劑兼容;乳化劑;增溶劑S-06Bio-Terge(tm)AS-40溫和的,可作為溶劑S-19Tween(tm)20非溶血的;親水性強(qiáng);增溶劑;乳化劑S-07Standapoles-1強(qiáng)離子型表面活性劑S-20Tween(tm)80非溶血的;非常親水;增溶劑;乳化劑S-08抗菌劑,溶劑兼容S-21Brij(tm)35良好的乳化劑S-09Tetronic(tm)1307溶血的;溶劑兼容;抗靜電的;良好的消泡劑和分散劑S-22Chemalla-9增溶蛋白,與THESIT(tm)結(jié)構(gòu)相同S-10Surfynol(tm)465非溶血的;良好的潤(rùn)濕劑和消泡劑S-23Pluranic(tm)L64非溶血性;溶液兼容;極好的潤(rùn)濕劑;良好的乳化劑S-11Surfynol(tm)485非溶血的;酶兼容;良好的潤(rùn)濕劑和消泡劑S-24Surfactant10G非溶血性;完全兼容酶;低泡沫;良好的潤(rùn)濕劑S-12Igepal(tm)CA210溶液兼容;良好的乳化劑S-25Span(tm)60油溶性,溶劑兼容,不溶于水S-13Triton(tm)X-45溶液兼容;良好的乳化劑和分散劑S-06:Bio-TergeAS-40.tmBioTerge(tm)和Ninate(tm)是Stephen公司的注冊(cè)商標(biāo)。在研發(fā)干相尿液檢測(cè)產(chǎn)品中,我們使用這種表面活性劑可以有效解決一些潤(rùn)濕和可溶性的問(wèn)題。在實(shí)驗(yàn)中會(huì)引起雜色反應(yīng)和減緩反應(yīng)時(shí)間。我們有一種非水溶性的指示劑,它在水溶液中重新溶解,可以知道潤(rùn)濕和可溶性是否是主要問(wèn)題所在。我們也知道目前的表面活性劑都被應(yīng)用于pH9的水溶液系統(tǒng)中在某種程度上得到幫助,因此開(kāi)始多種合適的表面活性劑搭配選擇勢(shì)在必行。Bio-TergeAS-40,作為一種溫和的陰離子型表面活性劑,其站在其他表面活性劑的頭上。從外表看,其顏色反應(yīng)明顯更好,贏得有效的反應(yīng)速度。S-04:Aerosol(tm)OT100%Aerosol(tm)是美國(guó)Cyanamide公司的注冊(cè)商標(biāo)。這種表面活性劑是維持TMB穩(wěn)定性必不可少的。TMB是一氧化型的指示劑,它可以很容易地被過(guò)氧化為棕色,無(wú)論視覺(jué)或儀器都可以看出。加入AerosolOT可終止TMB氧化過(guò)程而呈深藍(lán)色。這是AerosolOT與TMB通過(guò)配位形成的絡(luò)合物。這種復(fù)合物處于最高的氧化態(tài),因此此時(shí)TMB非常穩(wěn)定。AerosolOT/TMB系統(tǒng)可溶于有機(jī)溶劑,如甲苯。它還可溶于水溶液,例如TMB-HCl將作為指示劑形式。S-16:Silwet(tm)L7600Silwet(tm)和Triton(tm)是UnionCarbide公司的注冊(cè)商標(biāo)。這是唯一一個(gè)基于硅氧烷的表面活性劑,具有非常強(qiáng)大的濕潤(rùn)的能力。S-16是為數(shù)不多的能潤(rùn)濕聚四氟乙烯(PTFE)表面的表面活性劑。它非常容易溶于水和多種有機(jī)溶劑。我們發(fā)現(xiàn)這種表面活性劑在開(kāi)發(fā)固相全血診斷試劑中非常有用,因?yàn)樵诟呖辜t細(xì)胞比容中容易產(chǎn)生偏差。而S16在許多測(cè)試過(guò)的表面活性劑中是唯一一種可以消除這種偏差。普遍認(rèn)為這種表面活性劑在抗紅細(xì)胞測(cè)試平板表面通過(guò)其強(qiáng)烈的作用干擾抗紅細(xì)胞。這表面活性劑是完全不溶血的。通常使用濃度是從0.01至1%。S-10:Surfybnot465;S-11:Surfybnot485Surfynol(tm)是AirProductsandChemicals公司的注冊(cè)商標(biāo)。這對(duì)表面活性劑對(duì)紅細(xì)胞很溫和,可以作為吸附或過(guò)濾紅細(xì)胞的材料。這兩種表面活性劑無(wú)論是單獨(dú)使用作為乳化劑還是與其它乳化作用的表面活性劑一起使用,都能提高乳膠懸浮液的穩(wěn)定性。它們具有的低發(fā)泡、高濕潤(rùn)特性是實(shí)現(xiàn)將材料均勻包被于膜上的最佳選擇。雖然兩者水中的溶解度都是大于1%,但由于Surfybnot485親水-疏水平衡系數(shù)較高,因此較為溶于水;Surfynol465表面張力比Surfybnot485稍低一點(diǎn)。表面活性劑在膠體金試劑中的應(yīng)用提高精密度;使顯色均勻;加快潤(rùn)濕輔料墊;均勻吸收浸膠;加快反應(yīng)時(shí)間;阻止反應(yīng)物沉淀;使酶穩(wěn)定化/激活酶;加快溶解原料;兼容有機(jī)溶劑;再現(xiàn)樣品吸收;消泡作用。分散難溶試劑;乳化油性試劑;均勻潤(rùn)濕膜;加快復(fù)溶反應(yīng)物優(yōu)勢(shì)常用高分子物質(zhì)表面活性劑不是改進(jìn)產(chǎn)品性能和生產(chǎn)工藝的唯一材料。高分子聚合物,離子強(qiáng)度,功能材料,殺菌劑和防腐劑都可能是你完成目標(biāo)的關(guān)鍵成分。高聚物的作用:延長(zhǎng)試劑的有效期;使試劑穩(wěn)定化;使酶穩(wěn)定化;封閉非特異結(jié)合;封裝試劑;控制釋放試劑;促進(jìn)血液分離;調(diào)節(jié)粘度和孔隙;成膜劑/增稠劑;媒染指示劑;非溶血試劑;穩(wěn)定化試劑;溶于有機(jī)溶劑;可重復(fù)吸收樣品;耐鹽。編號(hào)商品名功能P-01PVPK-30酶的穩(wěn)定劑;封裝-緩釋劑;粘合劑,穩(wěn)定劑,保護(hù)膠體,成膜劑。P-02PVPK-90葡萄糖(血糖)測(cè)試的穩(wěn)定劑,封裝-緩釋劑;粘合劑,穩(wěn)定劑,保護(hù)膠體,成膜劑。P-03GANTREZAN-139穩(wěn)定劑,媒染指示劑。尿比重測(cè)試反應(yīng)物。清除成膜劑,分散劑,保護(hù)膠體。P-04POLYOXWSR-301溫和的穩(wěn)定劑,懸浮劑,耐鹽性P-05PEG8000溫和的穩(wěn)定劑P-06GANTREZAN-119媒染指示劑P-07ELVANOL71-50粘性,空隙調(diào)整劑(例如封閉膜)。P-08PVP/VAS360濕潤(rùn)劑,穩(wěn)定劑P-09TELEOSTEANGELATIN非特異性蛋白結(jié)合的封閉劑P-10CARBOPOEZ-1穩(wěn)定劑,增稠劑P-11KLUCELEEF增稠劑,促進(jìn)血液分離,不溶于血液P-12CELLULOSEGUM7LF增稠劑,促進(jìn)血液分離,不溶于血液P-13FLEXAN130耐鹽,可作為葡萄糖(血糖)測(cè)試的增稠劑P-14VISCARINGP309可作為檢測(cè)葡萄糖的穩(wěn)定劑。常用作粘結(jié)劑,乳化穩(wěn)定劑,成膜劑,護(hù)發(fā)劑和增稠劑,被用于化妝品和個(gè)人護(hù)理品P-15UCAR456成膜劑,不溶于血液P-16NATROSOL250LR增稠劑,促進(jìn)血液分離,不溶于血液PVP海藻糖(Trehalose)分子量:378.3分子式:C12H22O11·2H2O物化性質(zhì):白色粉狀結(jié)晶;水溶解性68.9g/100mL(20°C);140.1g/100mL(50°C);602.6g/100mL(90°C);溶于熱乙醇,不溶于醚穩(wěn)定性:37℃可保存12個(gè)月。
D-海藻糖結(jié)構(gòu)式昆蟲(chóng)的主要血糖,由兩個(gè)葡萄糖通過(guò)異頭體羥基失水而形成的非還原性二糖。有3種不同的異構(gòu)體:α-α、α-β和β-β。1832年由Wiggers將其從黑麥的麥角菌中首次提取出來(lái),隨后發(fā)現(xiàn)海藻糖在自然界中許多可食用動(dòng)植物及微生物體內(nèi)都廣泛存在,食用的蘑菇類、海藻類、豆類、蝦、面包、啤酒及酵母發(fā)酵食品??茖W(xué)家們發(fā)現(xiàn),沙漠植物卷葉柏在干旱時(shí)幾近枯死,遇水后卻又可以奇跡般復(fù)活;高山植物復(fù)活草能夠耐過(guò)冰雪嚴(yán)寒;一些昆蟲(chóng)在高寒、高溫和干燥失水等條件下不凍結(jié)、不干死,就是它們體內(nèi)的海藻糖創(chuàng)造的生命奇跡。海藻糖因此在科學(xué)界素有“生命之糖”的美譽(yù)。海藻糖對(duì)生物體具有神奇的保護(hù)作用,是因?yàn)楹T逄窃诟邷?、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環(huán)境條件下在細(xì)胞表面能形成獨(dú)特的保護(hù)膜,有效地保護(hù)蛋白質(zhì)分子不變性失活,從而維持生命體的生命過(guò)程和生物特征。自然界中如蔗糖、葡萄糖等其它糖類,均不具備這一功能。這一獨(dú)特的功能特性,使得海藻糖除了可以作為蛋白質(zhì)藥物、酶、疫苗和其他生物制品的優(yōu)良活性保護(hù)劑以外,還是保持細(xì)胞活性、保濕類化妝品的重要成分,更可作為防止食品劣化、保持食品新鮮風(fēng)味、提升食品品質(zhì)的獨(dú)特食品配料,大大拓展了海藻糖作為天然食用甜味糖的功能。牛血清白蛋白(BSA)BovineSerumAlbumin是血液的主要成分,分子量68kD。等電點(diǎn)4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成,其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽(yáng)離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用。加入BSA可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。在抗體制備過(guò)程中作為載體蛋白,用于半抗原的偶聯(lián),也常作為測(cè)量蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線用于電泳或色譜層析。卵清白蛋白(OVA)Ovalbumin蛋清中的主要糖蛋白(45kDa)。其一級(jí)結(jié)構(gòu)和立體結(jié)構(gòu)均與血清中的絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的成員同源。雞卵清蛋白由385個(gè)氨基酸殘基組成,僅有一條雜合型糖鏈。OVA常作為蛋白添加劑用于提高生物藥或疫苗等的穩(wěn)定性,或在抗體制備過(guò)程中作為載體蛋白,用于半抗原的偶聯(lián),也常作為蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)用于電泳或色譜層析。酪蛋白(Casein)酪蛋白是PI為pH4.6的兩性蛋白質(zhì),為非結(jié)晶、非吸潮性物質(zhì),常溫下在水中可溶解0.8-1.2%,微溶于25℃水和有機(jī)溶劑,溶于稀堿和濃酸中,能吸收水分。當(dāng)浸入水中則迅速膨脹,但分子不結(jié)合。若加入氨,堿及其鹽時(shí),則可分散溶解于水中;可溶于強(qiáng)酸、二乙醇胺、嗎啉、尿素、甲酰胺、熱苯酚和土耳其紅油。酪蛋白在酸性條件下是沉淀狀態(tài),若要加強(qiáng)其可溶性,應(yīng)該適當(dāng)提高pH。加幾滴1MNaOH到casein粉末上,放置片刻,加水或者buffer,然后加熱。WesternBlotting常用含3%的酪蛋白的TBS作封閉劑。但封閉劑有時(shí)會(huì)和抗體發(fā)生非特異性反應(yīng),所以如果條件允許的話,最好用點(diǎn)雜交的方法測(cè)試封閉劑是否與抗體發(fā)生非特異性反應(yīng),推薦使用sigma的BlottingCasein。
封閉劑的設(shè)計(jì)封閉原理是利用無(wú)關(guān)蛋白封閉膜上未結(jié)合的位點(diǎn),防止抗體與膜的非特異性結(jié)合。ELISA使用酪蛋白的濃度不同文獻(xiàn)敘述不一致,大致在1%-5%范圍,也有個(gè)別或高至10%或低至0.05%,我認(rèn)為濃度過(guò)低封閉效果可能不理想,過(guò)高反而會(huì)適得其反,引起非特異性結(jié)合,設(shè)計(jì)緩沖液建議使用0.1-3%,若設(shè)計(jì)封閉液建議0.5-5%。在標(biāo)金時(shí),隨著特異蛋白的結(jié)合,交聯(lián)物必須用適當(dāng)?shù)脑噭┻M(jìn)行穩(wěn)定,通常使用BSA、明膠、PEG或Casein。使用穩(wěn)定劑有雙重功能,一是可通過(guò)封閉膠體表面未和特異性蛋白結(jié)合的位點(diǎn)而減少非特異性反應(yīng);二是有助于形成更穩(wěn)定的懸液。
常見(jiàn)的能夠降低蛋白質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)包括:一競(jìng)爭(zhēng)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的物質(zhì),如酪蛋白、BSA、OVA、人血清白蛋白、動(dòng)物血清;二干擾氫鍵的形成的物質(zhì),如甲酰胺、尿素;三影響疏水作用形成的物質(zhì)(如Tween、Triton、Brij)。人工合成的結(jié)合物比如聚乙二醇、聚乙烯醇以及聚乙烯吡咯烷酮也可以影響蛋白質(zhì)的結(jié)合,它們的作用機(jī)理可能是抑制一個(gè)或多個(gè)蛋白質(zhì)與NC膜結(jié)合的共同作用的結(jié)果。常見(jiàn)緩沖溶液Na2HPO4-KH2PO4Na2HPO4-NaH2PO4H2BO3-Na2B4O7KH2PO4-NaOHNa2CO3-NaHCO3Na2B4O7-NaOHHAc-NaAcTris-HClBuffer緩沖溶液是一種能在加入少量酸或堿和水時(shí)減小pH變動(dòng)的體系,從而維持體系中抗原、抗體等生物活性分子的最佳環(huán)境。能使生物材料保持生物活性的緩沖液至關(guān)重要,在體外診斷試劑的設(shè)計(jì)中,典型緩沖液有:10mMPB、10mMPBS、硼酸緩沖液、含鹽硼酸緩沖液以及醋酸鈉緩沖液等。由于受抗原抗體等電點(diǎn)的影響,緩沖液pH值的選擇對(duì)保持抗原抗體的最佳活性非常關(guān)鍵。此外,緩沖液的選擇完全取決于具體的生物材料。某種材料可以在pH7.4的PBS中保持良好的活性和令人滿意的保質(zhì)期,但是相同的緩沖液和pH卻會(huì)使另一種材料徹底喪失活性。因此在緩沖液的選擇方面并沒(méi)有一個(gè)通用的規(guī)則,只有實(shí)驗(yàn)結(jié)果才真正具有指導(dǎo)意義。新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的噴膜工作緩沖液為:10mMPH7
PB+3%
CH3OH+3%海藻糖醇類的存在有助于NC膜的重濕潤(rùn),減少NC膜可能帶有的靜電,而可以降低溶液中的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。在基于膜的免疫分析中,3-5%的甲醇可以極大地提高檢測(cè)性能。Na2HPO4-NaH2PO4(0.2M)pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)5.793.56.56.945.055.05.892.08.07.038.062.05.990.010.07.133.067.06.087.712.37.228.072.06.185.015.07.323.077.06.281.518.57.419.081.06.377.522.57.516.084.06.473.526.57.613.087.06.568.531.57.710.590.56.662.537.57.88.591.56.756.543.57.9793.06.851.049.08.05.394.7Na2HPO4·12H2O分子量:358.22;NaH2PO4·2H2O分子量:156.03Na2HPO4-KH2PO4(1/15M)pH1/15MNaH2PO4(ml)1/15MKH2PO4(ml)pH1/15MNaH2PO4(ml)1/15MKH2PO4(ml)5.793.56.56.945.055.05.892.08.07.038.062.05.990.010.07.133.067.06.087.712.37.228.072.06.185.015.07.323.077.06.281.518.57.419.081.06.377.522.57.516.084.06.473.526.57.613.087.06.568.531.57.710.590.56.662.537.57.88.591.56.756.543.57.9793.06.851.049.08.05.394.7Na2HPO4·2H2O分子量:178.05;KH2PO4分子量:136.09KH2PO4-NaOH(0.05M)pH0.2MKH2PO4(ml)0.2MNaOH(ml)H2O(ml)5.850.37223.6286.050.57023.4306.250.86023.1406.451.26022.7406.651.78022.2206.852.36521.6357.052.96321.0377.253.50020.5007.453.95020.0507.654.28019.7207.854.52019.4808.054.68019.320H2BO3-Na2B4O7pH0.2MC6H8O7(ml)0.2MNa3C6H5O7(ml)7.49.01.07.68.51.57.88.02.08.07.03.08.26.53.58.45.54.58.74.06.09.02.08.0硼砂Na2B4O7·H2O,分子量:381.43;0.05M溶液(=0.2M硼酸根)硼酸H2BO3,分子量:61.84注意:硼砂易失去結(jié)晶水,必須在帶塞的瓶中保存。硼酸–硼砂緩沖液(0.2M硼酸根)Na2B4O7-NaOHpH0.2NNaOH(ml)0.05MNa3C6H5O7(ml)H2O
(ml)9.36.050144.09.411.050139.09.623.050127.09.834.050116.010.043.050107.010.146.050104.
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