全自動電泳培訓

Experion全自動電泳技術(shù)

張姣時代聯(lián)想生物科技有限公司內(nèi)容全自動電泳的原理全自動電泳的結(jié)構(gòu)組成全自動電泳系統(tǒng)的應用全自動電泳的實驗流程全自動電泳的軟件演示電泳是實驗室最常用的技術(shù)蛋白質(zhì)電泳核酸電泳傳統(tǒng)電泳局限性時間長有毒試劑操作繁瑣提供的數(shù)據(jù)有限全新的電泳解決方案時間短可自動化安全無毒節(jié)省樣品數(shù)據(jù)分析準確、可靠

Experion全自動電泳

Bio-Rad在蛋白、核酸分離及分析上的優(yōu)勢先進的芯片電泳技術(shù)完美結(jié)合Experion?全自動電泳系統(tǒng)

創(chuàng)新的電泳解決方案Experion全自動電泳技術(shù)原理微流體芯片分離技術(shù)芯片組成：一個底座和一個附在底部的小玻璃板玻璃板上刻有許多的微通道，以優(yōu)化過的網(wǎng)絡模式排列微通道中充滿液態(tài)凝膠電泳工作站對整個通道網(wǎng)絡上的電壓和電流進行控制，引導樣本通過這些微通道進行分離和檢測激光誘導熒光檢測技術(shù)靈敏度和專一性好Experion芯片結(jié)構(gòu)微流體芯片結(jié)構(gòu)123475869101112/LGel-StainL/SEGel-StainGelInjectionintersectionSeparationchannelDetectorlocation0.4mA0.2mA0mA0mA0mA0mA-3mA0mA0mA2000V0mA0.6mAseparationinjectiondetector微流芯片分離技術(shù)0.2mA0.4mA0mA0mA0mA0mA825V0mA825V2000V825V0.2mAseparationinjectiondetector微流芯片分離技術(shù)LoadingChannel1SeparationChannel2LaserDetectornext微流芯片分離技術(shù)分析試劑制膠工作站渦旋工作站全自動電泳工作站Experion儀器組成數(shù)據(jù)分析軟件Experion?RNAStdSenssRNA標準芯片Experion?Pro260Pro260芯片Experion?RNAHighSensRNA高靈敏度芯片DNA芯片

Kitswith10or25chips

試劑和芯片分析試劑AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation芯片設計點樣孔均有明確標識指示您進行正確的制膠及上樣重新設計的通道結(jié)構(gòu)全面改善分辨性能醒目的壓力和時間設置條件，便于制膠工作站的設置分析試劑盒組成RNA分析試劑盒Experion?RNAStdSenssExperion?RNAHighSensDNA1K/12k分析試劑盒Pro260蛋白質(zhì)分析試劑盒Experion?Pro260制膠工作站AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation用于制備樣本分析的芯片，制膠工作站對芯片的裝填孔施加壓力，并使用預先測定的時間和壓力設置將凝膠染色溶液注入到芯片微通道的網(wǎng)格中。制膠工作站液晶顯示屏(帶有預設的時間和壓力以及整合定時器)控制按鈕開蓋控制桿制膠工作站制膠密封設備整合活塞泵芯片平臺渦旋工作站AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation確保樣本和用于RNA分析的加樣緩沖液(試劑盒中配備)在芯片孔中完全混合。渦旋工作站渦旋適配器，可安全的固定芯片1分鐘計時器開關(guān)電泳工作站AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation電泳工作站對整個通道網(wǎng)絡上的電壓和電流進行控制，引導樣本通過這些微通道，完成電泳分離、染色、條帶檢測等過程電泳工作站綠色蓋子“開蓋”托電源指示電源按鈕橡膠底架電極部件電極線芯片平臺自動控制及分析軟件AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation完成電泳工作站的控制、電泳結(jié)果的數(shù)據(jù)分析在結(jié)果列表中進行自動計算樣品信息分子量大小比較總面積的百分比下拉列表顯示統(tǒng)計信息:平均分子量,濃度%樣品間的變異系數(shù)自動控制及分析軟件對蛋白/RNA/DNA樣品的定量分析與ladder中的標準品進行比較的相對定量結(jié)果與用戶處定義標準品的絕對蛋白質(zhì)量軟件自動計算和檢測自動控制及分析軟件

Experion工作流程（30分鐘）選擇芯片自動制膠渦旋（RNA電泳時）芯片電泳數(shù)據(jù)分析

1.使用前清洗電極

2.gel的過濾和gel-stain溶液的準備

3.

RNALadder和樣品的準備

4.將gel-stain置入芯片制膠

5.芯片加樣，漩渦震蕩

6.進行RNA檢測

7.清洗電極實驗程序簡介Experion操作（以RNA分析為例）電極清洗是日常工作1．在清洗芯片中加入800ul的清洗液，并確保在該芯片中沒有氣泡。如果發(fā)現(xiàn)有氣泡，則應輕輕趕走氣泡，并標注該清洗芯片為RNA專用清洗芯片。2.打開全自動電泳儀的蓋子，并將清洗芯片嵌入芯片平臺。3.關(guān)上蓋子，清洗芯片應靜置2分鐘。4.在清洗芯片中加入800ulDEPC水，并做好標記。5.打開蓋子，取出清洗芯片，再在該芯片中加入800ulDEPC水，如此反復用DEPC水清洗，共4次以上。6.關(guān)上蓋子，在全自動電泳儀中安置清洗芯片停留5分鐘，清洗電極。7.清洗后，倒去清洗芯片中的水，并重新加入800ulDEPC水，重復第6步清洗。8.打開蓋子，取出清洗芯片。9.打開全自動電泳儀的蓋子30-60秒，使電極上的水份蒸發(fā)干凈。10.實驗完畢后，請將清洗芯片中的DEPC水倒去。Experion操作（以RNA分析為例）制備gel-Stain1使用前將RNA膠（RNAgel），RNAstain和上樣buffer（loadingbuffer）從冰箱中取出，避光，并在室溫平衡15-20分鐘。2振蕩RNAstain（藍色帽），離心3-5秒鐘，確保染色劑（stain）中的DMSO完全溶解3在過濾離心管（spinfiltertube）加入600ulRNAgel（綠色帽）4將上述（1）膠1，500g離心10分鐘。使所有膠都過濾后，丟棄已用的過濾離心管（spinfiltertube）。已過濾的膠可以在4周內(nèi)使用，4周后過濾的膠，如要再使用須再過濾。5在無RNase的EP管中加入65ul已經(jīng)過濾好的膠和1ulRNAstain（藍色帽），振蕩混勻，并避光備用。（足夠1個芯片）6旋緊RNAStain管的蓋子。由于二甲基亞砜（DMSO）為高度的光敏感，所以應避光保存。制備好的Gel-stain溶液應在一周內(nèi)使用。7RNA樣品和RNALadder,70℃變性2min，冰上5min。芯片制膠1.從包裝盒中取出一塊RNA芯片，按芯片上箭頭所指方向和位置嵌入至置膠工作站的芯片平臺；2.在GS孔中垂直加入9ulGel-stain，槍頭應深入加樣孔，加樣時防止加入氣泡；3.按RNA芯片上所示，設置工作模式：壓力為B和置膠時間為1；4.啟動START按鈕，置膠工作站工作信息會在液晶顯示屏上顯示。整個置膠過程為30秒鐘，在置膠過程中，切勿打開蓋子。加樣品和RNALadder1.將9ulgel-stain加入其他標有GS的孔中；2.在標有G的孔中，加入9ul過濾好的膠；3.上樣buffer和sensitivityenhancer在使用前，要充分振蕩；4.在標有SE的加樣孔中加入6ulsensitivityenhancer；5.在每一個樣品孔和標記有L的ladder孔中，加入5ul上樣buffer（Loadingbuffer），即使待檢測樣品少于11個，也要把所有的加樣孔都加滿，沒有樣品的加樣孔，要以Loadingbuffer代之，否則實驗結(jié)果有誤；6.加1ul變性的RNALadder至標記有L的加樣孔中；7.在每一個樣品孔中加1ul待測樣品或Loadingbuffer；8.將加好樣的芯片置于振蕩器（vortexstaion）中懸浮，振蕩1分鐘，而后從振蕩器中取出；9.加樣后的芯片，要在5分鐘內(nèi)進行樣品檢測，否則樣品溶液會蒸發(fā)，導致實驗結(jié)果不準確

芯片內(nèi)電泳30分鐘AB100ng/μL1.6523S/16SRatioin“A”1.0423S/16SRatioin“B”Analysis:E.coliTotalRNASample:ProkTotalRNATotalRNA分析示例樣品結(jié)束后清洗電極1.在清洗芯片中加入800ulDEPC水，輕輕拍擊芯片，將加樣孔中的氣泡趕出2.打開全自動電泳儀的蓋子，將清洗芯片放置進全自動電泳儀。3.關(guān)上蓋子，讓清洗芯片停留在全自動電泳儀中1分鐘。4.打開蓋子，取出清洗芯片，倒出芯片中的DEPC水。5.讓全自動電泳儀的蓋子打開30秒鐘，吹干電極，而后關(guān)上蓋子。6.為防止污染電極，清洗芯片使用完后，重新用DEPC水清洗該芯片。數(shù)據(jù)分析：RNAQualityIndicator蛋白質(zhì)表達

優(yōu)化蛋白質(zhì)表達方法比較蛋白質(zhì)表達模式基于蛋白質(zhì)表達選擇克隆ExperionTMSystem蛋白質(zhì)純化監(jiān)測及優(yōu)化蛋白質(zhì)純化

分析蛋白質(zhì)純度和產(chǎn)量

DNA、RNA分析RNA特性研究濃度檢測定量PCR分析DNA芯片分析Experion應用應用一：蛋白電泳檢測摸索蛋白最佳誘導、表達的時間蛋白層析后純度檢測傳統(tǒng)的SDS費時費力全自動電泳與任何品牌或型號的層析設備搭配，方便、快捷SDS純度100%??在蛋白質(zhì)純化中的應用ShownaresamplesfromanIMACpurificationofHis-taggedDihydrofolate

Reductase(DHFR)proteinseparatedusingtheExperionsystemorbySDSLoadFlowThruElution

Wash%purityMWExperionRNA極易降解，使得定量PCR結(jié)果的可信度下降傳統(tǒng)的方法是PAGE電泳，當28S/16S≥1.8時，認為樣品完好方法費時費力，且需消耗較多樣品應用二：RNA電泳檢測RNAQualityIndicator(RQI)定量PCR前的檢測NGS:WhereExperionFits(RNAandDNAassays)DNAlibraryShearAmplifyTotalRNAextractionRTtocDNASequence(e.g.Illumina,Roche,ABIsolid)CheckRNAIntegrityusingRNAchips.CheckDNAsmearToensureshearingProducedfragmentsizeRangeofinterest.Rangeofdesiredshearedsizevariesbasedonthenextgensequencingplatform.CustomersusingDNAchipRNAchip.BaylorCollegeofMedicine:sheareddscDNArunonDNA12KassayNote:TheselibrarieswereshearedandpreparedwithIllumina'sadapterssotheimageisthefinalcDNAlibrarybeforeitgoesonthesequencer.常見問題（troubleshooting）電泳、漩渦震蕩、制膠工作站1、全自動電泳時屏幕顯示“IVCheckFailure”或“Chiperror”芯片中1個或多個加樣孔沒有正確加樣，或者電極沒有完全被溶液所覆蓋。因此，所有加樣孔必須加滿，沒有加樣品的孔須補