免疫學(xué)檢測技術(shù)及其研究進(jìn)展,免疫學(xué)論文

免疫學(xué)檢測技術(shù)及其研究進(jìn)展,免疫學(xué)論文內(nèi)容摘要：免疫檢測技術(shù)是一種以抗原抗體特異性辨別和結(jié)合為原理對樣品中特定的目的物進(jìn)行定性定量測定的分析方式方法,其在臨床醫(yī)學(xué)、當(dāng)代生命科學(xué)、食品科學(xué)、生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。本文主要綜述最近幾年應(yīng)用比擬廣泛的免疫學(xué)檢測方式方法及其研究近況。本文關(guān)鍵詞語：免疫學(xué)檢測,酶標(biāo)記,熒光素標(biāo)記,放射免疫1免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)就是指用熒光色素對目的物標(biāo)記后,再對其進(jìn)行定性定量檢測的一種實驗技術(shù)[8]。其基本原理就是抗體和抗原發(fā)生特異性結(jié)合后,使用熒光顯微鏡對待測物進(jìn)行觀察和鑒別。其基本操作步驟是先制備熒光標(biāo)記物(熒光抗體或抗原),即在已經(jīng)知道的抗體或者抗原上標(biāo)記上相應(yīng)的熒光素,再將這種熒光標(biāo)記物(熒光抗體或抗原)注入到細(xì)胞內(nèi)部作為探針,當(dāng)它們進(jìn)入細(xì)胞后即可和細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合,此時使用熒光顯微鏡來觀察標(biāo)本能否能發(fā)出熒光,以此來對細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗體或者抗原進(jìn)行定位和檢測[6]。在臨床應(yīng)用中免疫熒光技術(shù)的作用方式主要有兩種,一種是放射免疫分析法,另一種是時間分辨免疫熒光分析法。競爭反響是放射免疫分析技術(shù)的主要利用原理,這種檢測方式方法曾被人以為是最具發(fā)展?jié)摿Φ拿庖邫z測技術(shù)[9]。時間分辨免疫熒光分析法能夠?qū)ν凰睾兔高M(jìn)行標(biāo)記。另外,其在試驗中所需試劑的存放時間較長,所需的實驗材料制作起來比擬簡單,因而有人將它稱為免疫檢測技術(shù)中的新成果[10]。隨著免疫熒光技術(shù)應(yīng)用范圍的不斷擴(kuò)大,其在免疫學(xué)、當(dāng)代分子生物學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域都有所牽涉[11]。另外,免疫熒光技術(shù)也在微生物學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著一定的作用,有人[12]已經(jīng)用免疫熒光技術(shù)快速檢測葡萄球菌、沙門氏菌、李斯特氏菌等細(xì)菌。2免疫層析技術(shù)(膠體金免疫層析技術(shù))免疫層析技術(shù)是免疫學(xué)上用于檢測分析的一種色譜分析方式方法。其利用的是抗原-抗體特異性吸附的原理,該技術(shù)操作簡單,能夠在較短的時間內(nèi)對待測物進(jìn)行檢測。當(dāng)前在免疫層析技術(shù)中,使用比擬好的有膠體金免疫層析技術(shù)[13]。膠體金免疫層析技術(shù)是一種將層析分析技術(shù)、膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)三者相結(jié)合的固相標(biāo)記免疫檢測技術(shù),其也是將抗原抗體反響和膠體金標(biāo)記技術(shù)有機(jī)結(jié)合的一種應(yīng)用形式,它是借助毛細(xì)作用使得以條帶狀固定在膜上的特異性抗原或抗體發(fā)生泳動,同時使得層析條帶上針對待測物的受體(如抗體或抗原)與樣品中的待測物發(fā)生高親和性、高特異性的免疫反響,層析反響經(jīng)過中免疫復(fù)合物被截留或者富集在層析條的檢測帶區(qū)域,最后通過著色標(biāo)記物或者利用酶促反響快速、直觀地檢測出待檢物質(zhì)。膠體金免疫檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于核酸、殺蟲劑、蛋白質(zhì)、激素、藥物和毒素等的檢測。如BoyleT[14]利用膠體金免疫檢測技術(shù)評價酸奶、巧克力、嬰兒配方奶粉、冰淇淋中的葡萄球菌中的腸毒素。3酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)是把酶的高效催化作用與抗原抗體的特異性反響有機(jī)結(jié)合起來的一種新型的免疫檢測技術(shù),該方式方法既能夠檢測抗體,可以以檢測抗原[15]。其基本原理就是先用酶標(biāo)記抗體,再進(jìn)行抗原抗體反響,最后酶通過分解底物而顯色,根據(jù)顏色的深淺來判定待檢測的抗原和抗體的含量。ELISA主要有兩大類:傳統(tǒng)ELISA方式方法和新型ELISA方式方法[16]。傳統(tǒng)ELSIA法有:間接ELISA(I-ELISA)、固相競爭ELSIA(SC-ELISA)、間接夾心ELISA(IS-ELISA)等。新型ELISA法有:單克隆抗體ELISA((McAbELISA)[17]、PT-PCRELISA、Dot-ELISA[18]等。ELISA法具有操作簡單、穩(wěn)定性好、特異性高、可大批量檢測樣品等優(yōu)點,因其檢測成本較低,故比擬合適現(xiàn)場檢測,尤其適用于食品中微量過敏原的檢測。吳序櫟等人就曾利用雙抗體夾心法ELISA以其最低檢出限:40ng/ml檢測出了食品中蝦過敏原蛋白成分[19]。但是ELISA法也有其一定的局限性,如抗體制備難、無法進(jìn)行多殘留檢測、對構(gòu)造類的化合物存在一定的穿插反響[20],另外實驗結(jié)果也會出現(xiàn)假陽性。4電化學(xué)免疫傳感器電化學(xué)免疫傳感器[7]是免疫傳感器中種類最多、研究最早、也比擬成熟的一種檢測技術(shù)。它是將電化學(xué)技術(shù)與免疫檢測技術(shù)相結(jié)合,用電化學(xué)信號來反響待檢測物質(zhì)的濃度,進(jìn)而對待分析物進(jìn)行分析測定的一種檢測方式方法,它由換能器(基本電極)和分子辨別物質(zhì)(抗原、抗體)組成。由于其有不同的檢測方式,故將電化學(xué)免疫傳感器分為下面幾種類型:阻抗型、電容型、電位型、電流型。4.1阻抗型免疫傳感器阻抗型免疫傳感器具有高度的特異性,它是通過阻抗譜對于傳感界面變化的靈敏度來檢測待測物的濃度的一種免疫檢測方式方法。Yang[21]等曾經(jīng)將葡萄糖氧化酶和HRP固定在納米材料上作為生物催化劑,催化過氧化氫氧化4-氯萘酚,建立了一種檢測甲胎蛋白的阻抗型免疫傳感器。4.2電容型免疫傳感器電容型免疫傳感器的測量原理比擬簡單,其建立根據(jù)主要有兩個方面:一個消耗離子所引起的溶液導(dǎo)電性變化,另一個是免疫生化反響的發(fā)生。外表電荷的改變和物質(zhì)的吸附對雙電層構(gòu)造有顯著的影響。4.3電位型免疫傳感器電位型免疫傳感器是通過測定抗原抗體特異性反響經(jīng)過中電位的變化而進(jìn)行免疫分析的一種檢測方式。由于檢測溶液的多離子性及其離子濃度之間的復(fù)雜性,該方式方法檢測的結(jié)果有較大的不確定性。4.4電流型免疫傳感器電流型免疫傳感器是在電壓恒定的情況下測定抗原抗體特異性反響中電流變化的一種免疫檢測方式。主要有兩種類型:非酶標(biāo)記性和酶標(biāo)記型。5免疫磁珠分離技術(shù)免疫磁珠是一種既能結(jié)合活性蛋白(如抗原、抗體)又能被磁力所吸引的磁性微球,其外表包被了各種化學(xué)基團(tuán),以使得能夠和別的物質(zhì)發(fā)生結(jié)合。而免疫磁珠分離技術(shù)[6]的基本原理就是將包被有抗體的磁珠與致病微生物(如抗原)結(jié)合,構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物,而包被有抗原的磁性微球就會因磁力的吸引而發(fā)生聚集,進(jìn)而使得致病微生物與抗體構(gòu)成的復(fù)合物與其它物質(zhì)分開,以到達(dá)分離致病微生物的目的。國家檢驗標(biāo)準(zhǔn)(食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗〕已經(jīng)把免疫磁珠分離技術(shù)作為大腸桿菌O157:H7/MM的檢驗方式方法[22]。6分子印跡技術(shù)分子印跡技術(shù)(MIT)是一種模擬抗原抗體反響合成特異性選擇辨別位點的實驗技術(shù)[23],其在固相萃取、有機(jī)合成、免疫傳感器等領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用前景[24]。分子印跡技術(shù)也有一些缺陷,如在極性溶劑或水溶液中該技術(shù)還是那樣不能很好地應(yīng)用。故該技術(shù)當(dāng)前還是主要用于小分子化合物的檢測。結(jié)束語免疫檢測技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和生物學(xué)領(lǐng)域中發(fā)揮著極其重要的作用,這些方式方法固然具有快速、靈敏度高等優(yōu)點,但也存在操作方式方法較繁瑣、信息量少、容易出現(xiàn)假陽(陰)性等缺點。如,電化學(xué)免疫傳感器由于其易于微型化、簡單、靈敏而曾被以為是AFP(甲胎蛋白)的有效檢測手段,但是迄今為止,它仍處于其發(fā)展的早期階段,沒有能得到廣泛使用。再如,膠體金免疫層析技術(shù)具有檢測結(jié)果直觀、快速、不需要特殊設(shè)備、無污染等優(yōu)點,合適于大面積普查和大批量檢測,非常合適于食品安全檢測,但是當(dāng)前國內(nèi)市場上還沒有成型的膠體金免疫層析產(chǎn)品?？偟膩碇v,大部分的免疫檢測技術(shù)仍處于其研究的初級階段,要使得這些技術(shù)能夠廣泛的使用,我們?nèi)孕枰诰綔?zhǔn)確度和靈敏度的提高、操作的經(jīng)濟(jì)性和簡便性、穩(wěn)定性的保持等方面加強(qiáng)研究。我們相信,免疫檢測技術(shù)將不斷朝著簡單、靈敏、快速、標(biāo)準(zhǔn)的方向發(fā)展,為臨床醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、食品科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域做著極其重大的奉獻(xiàn)。以下為參考文獻(xiàn)[1]KahnCR,RothJ.Berson,YalowandtheJCI:theagonyandtheecstasy[J].JClinInvest,2004,114(8):1051-1054.[2]林影,葉茂,韓雙艷,等.免疫檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報,2007,26(4):117-120.[3]ShepherdP,DeanC.MonoclonalAntibodies[M].NewYork:OxfordUni-versityPress,2000:297-300.[4]EdHarlow,DavidLane.UsingAntibodies:ALaboratoryManual[M].NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1998:18-20.[5]曾穎,蔡瑋紅.食品過敏原快速檢測技術(shù)方式方法研究進(jìn)展[J].包裝與食品機(jī)械,2021,33(3):58-61.[6]李常教.食品微生物快速檢測技術(shù)研究