GB/T 14926.50-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

ICS65.020.30B44中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14926.50—2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)LaboratoryanimalEnzyme-assay（ELISA）2001-08-29發(fā)布2002-05-01實(shí)施中華民：共和玉發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

GB/T14926.50-2001前本標(biāo)準(zhǔn)修訂了GB/T14926.18—1994《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒檢測(cè)方法》中的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，將其作為一個(gè)獨(dú)立標(biāo)準(zhǔn)列出.本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賀爭(zhēng)鳴。

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物GB/T14926.50—2001Laboratoryanimal-Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)所用試劑、器材和操作步驛等本標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒抗體的檢測(cè)2原理包被于固相載體表面的已知抗原與待檢血清中的特異性抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物。此抗原抗體復(fù)合物仍保持其抗原活性，可與相應(yīng)的第二抗體酶結(jié)合物結(jié)合。在酶的催化作用下底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。顏色反應(yīng)的深淺與待檢血清中所含有的特異性抗體的量成正比。主要試劑和器材3.1試劑3.1.1抗原3.1.1.1特異性抗原將病毒接種其敏感細(xì)胞培養(yǎng)增殖(表1).當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)十十十～十十十十時(shí)收獲.凍融三次或超聲波處理后·低速離心去除細(xì)胞碎片,上清液再經(jīng)超速離心濃縮后制成ELISA抗原3.1.1.2正常抗原未接種病毒的相應(yīng)細(xì)胞凍融破碎后，經(jīng)低速離心去除細(xì)胞碎片而獲得的上清液3.1.2酶結(jié)合物ELISA法常用以下兩類(lèi)酶結(jié)合物3.1.2.1辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊或兔抗小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬或猴1gG抗體。用于檢測(cè)相應(yīng)動(dòng)物血清抗體。3.1.2.2辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記葡萄球菌蛋白A(SPA)。用于檢測(cè)小鼠、豚鼠、免、犬和猴血清抗體3.1.3對(duì)照血清3.1.3.1陽(yáng)性血清用病毒抗原免疫清潔或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通級(jí)免、犬、猴所獲得的抗血清;或自然感染恢復(fù)后的犬、猴血清3.1.3.2陰性血清請(qǐng)潔或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清;或確認(rèn)無(wú)相應(yīng)病毒感染的兔、犬、猴血清3.1.4包被液(0.05mol/LpH9.6）碳酸鈉1.59g碳酸氫鈉2.938蒸餡水加至1000ml3.1.5PBS(O.01m