原創(chuàng)6：1.2 基因工程基本操作程序(二)

1.2基因工程的基本操作程序（二）1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在和表達(dá)的過(guò)程。1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）導(dǎo)入細(xì)胞的種類（2）導(dǎo)入方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（最常用）體細(xì)胞雙子葉植物和裸子植物其他植物可用酚類物質(zhì)處理后用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（2）導(dǎo)入方法基因槍法花粉管通道法1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞（1）導(dǎo)入細(xì)胞的種類（2）導(dǎo)入方法顯微注射法最好是受精卵細(xì)胞1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞（1）微生物作為受體的優(yōu)勢(shì)（2）導(dǎo)入方法Ca2+處理①繁殖速度快，可大量生產(chǎn)②生產(chǎn)成本低胰島素原的人工合成

1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞（3）原核生物作為受體細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沒(méi)有空間結(jié)構(gòu)，需要在體外加工。1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）生物種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞導(dǎo)入方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用）基因槍法花粉管通道法顯微注射法Ca2+處理法（感受態(tài)細(xì)胞發(fā)）受體細(xì)胞受精卵或體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞（細(xì)菌）1.2基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化transformation）生物種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→Ca2+處理導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞→侵染植物細(xì)胞→目的基因整合到受體細(xì)胞的染色體上DNA上→植物組織培養(yǎng)→試管苗表達(dá)目的基因→產(chǎn)生相應(yīng)性狀。將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取受精卵→顯微注射→獲得導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞→早期胚胎培養(yǎng)→胚胎移植→獲得新性狀的動(dòng)物。Ca2+處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組的基因表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子完成轉(zhuǎn)化→目的基因表達(dá)，獲得新性狀。1.2基因工程的基本操作程序第四步：目的基因的檢測(cè)與鑒定抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定活性鑒定等抗原－抗體雜交法分子雜交法DNA分子雜交法受體是否具有轉(zhuǎn)基因特征個(gè)體水平目的基因是否翻譯目的基因是否轉(zhuǎn)錄目的基因是否導(dǎo)入分子水平方法檢測(cè)對(duì)象DNA分子限制片段限制性酶切割瓊脂糖電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上與放射性標(biāo)記DNA探針雜交放射自顯影帶有DNA片段的凝膠凝膠濾膜用緩沖液轉(zhuǎn)移DNA吸附有DNA片段的膜DNA分子雜交32P-抗體裂解細(xì)胞，表達(dá)蛋白轉(zhuǎn)移