檢測生物組織中糖類脂肪和蛋白質(zhì)

一.實(shí)驗(yàn)原理：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。如：①.還原性糖的鑒定：還原性糖+②.脂肪的鑒定：

脂肪+脂肪+

③.蛋白質(zhì)的鑒定：蛋白質(zhì)+④淀粉+斐林試劑磚紅色沉淀蘇丹Ⅲ橘黃色蘇丹Ⅳ紅色雙縮脲試劑紫色碘藍(lán)色二.目的要求：

嘗試用化學(xué)試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)1、還原糖的檢測和觀察：選材應(yīng)該選擇含

量高.顏色為植物組織以蘋果.梨為最好。糖白色或近于白色制備組織樣液：三.實(shí)驗(yàn)過程:制漿：去皮、切塊、研磨過濾：（用單層紗布）取液：（２mL）可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過程中生成磚紅色沉淀，說明植物組織樣液中含有還原糖。注入2mL蘋果組織樣液注入1mL剛配制好的斐林試劑水浴加熱約2min檢測步驟變成磚紅色50----650C的溫水結(jié)論：甲乙液等量混勻振蕩、混合搖勻呈現(xiàn)藍(lán)色①還原糖有

。②試劑：

.（甲液：0.1g/ml

的

,乙液：0.05g/ml的

.）甲乙液必須

后再加入樣液中，

。③必須

。葡萄糖，果糖，麥芽糖用水浴加熱斐林試劑NaOHCuSO4等量混合均勻現(xiàn)配現(xiàn)用注意事項(xiàng)：④顏色變化：淺藍(lán)色棕色磚紅色2、脂肪的檢測和觀察：圓形小顆粒呈橘黃色，說明有脂肪存在。方法一：待測組織樣液+蘇丹Ⅲ染液→橘黃色取材：花生種子(浸泡3～4h），將子葉削成薄片方法二：制作子葉臨時(shí)切片，用顯微鏡觀察子葉細(xì)胞的著色情況。制片①取最理想的薄片②在薄片上滴蘇丹Ⅲ染液（2～3min）③去浮色（用50﹪酒精）④制成臨時(shí)裝片觀察低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察結(jié)論：

注意事項(xiàng)：①切片要薄，如厚薄不均就會(huì)導(dǎo)致觀察時(shí)有的地方清晰有的地方模糊。②酒精的作用是：

。③需使用顯微鏡觀察④使用不同的染色劑染色時(shí)間不同，顏色變化：

。洗去浮色橘黃色或紅色3、蛋白質(zhì)的檢測和觀察：選材應(yīng)該選擇含

豐富的豆?jié){或雞蛋清溶液。（避免材料自身的顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋）蛋白質(zhì)黃豆?jié){濾液或蛋清稀釋液制備組織樣液呈色反應(yīng)組織樣液2mL雙縮脲試劑A液1mL雙縮脲試劑B液4滴搖勻后變成紫色結(jié)論：說明組織樣液中存在蛋白質(zhì)。（3）注意事項(xiàng)：①試劑：

（A液：0.1g/ml的

；B液：0.01g/ml的

）先加

，再加

。

B液要求量適中，否則多余的B液將會(huì)與A液發(fā)生反應(yīng)生成Cu（OH）2顯色而遮蓋原有的顏色。②鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對(duì)比雙縮脲試劑A液1mlB液4滴NaOH③用于蛋白質(zhì)鑒定的蛋清必須稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管壁，不易洗刷CuSO4蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4紫色物質(zhì)生成磚紅色沉淀先加A液，再加B液，不需加熱甲液與乙液先混再用，且現(xiàn)配現(xiàn)用，需加熱蛋白質(zhì)還原性糖試劑組成檢驗(yàn)結(jié)果試劑用法檢測對(duì)象雙縮脲試劑斐林試劑問題探討:1、在做還原糖、蛋白質(zhì)鑒定的實(shí)驗(yàn)時(shí)，為什么要留出一部分樣液？作對(duì)照2、使用雙縮脲試劑時(shí)為什么B液只能加3～4滴而不能過量？

過量的雙縮脲試劑B會(huì)與試劑A反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，而掩蓋生成的紫色。3、為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久？

時(shí)間太長，Cu(OH)2懸濁液就沉淀在試管底部而無法參與反應(yīng)。深化4、淀粉的檢測和觀察：取材：馬鈴薯勻漿檢測組織樣液2mL碘液2滴結(jié)論：說明組織樣液中存在淀粉。注意：常用材料：馬鈴薯試劑：

。顏色變化：

。碘液變藍(lán)搖勻后變成藍(lán)色試驗(yàn)常見錯(cuò)誤總結(jié)1、藥劑過量①淀粉中加碘液過多；②牛奶中過多CuSO4過多；③還原糖（果汁）中斐林試劑過多2、用品認(rèn)錯(cuò)，試劑加錯(cuò)或者沒加3、不是所有的牛奶都叫特侖蘇，也不是所有的試驗(yàn)都需要加熱4、對(duì)光不對(duì)，切片太厚等1.在下列四支試管中分別加入一些物質(zhì)，甲試管:豆?jié){;乙試管:氨基酸溶液;丙試管:牛奶和蛋白酶;丁試管:人血液中的紅細(xì)胞和蒸餾水.上述四支試管中加入雙縮脲試劑振蕩后,有紫色反應(yīng)的是()A.甲、丁B.甲、乙、丁C.甲、乙、丙D.甲、丙

對(duì)應(yīng)訓(xùn)練D2.下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)操作步驟的敘述中，正確的是

Ａ．用于鑒定可溶性還原糖的斐林試劑甲液和乙液，可直接用于蛋白質(zhì)的鑒定

Ｂ.脂肪的鑒定需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃色的脂肪滴

C.鑒定可溶性還原糖時(shí)，要加入斐林試劑甲液搖勻后，再加入乙液

Ｄ．用于鑒定蛋白質(zhì)的雙縮脲試劑A液與B液要混合均勻后，再加入含樣品的試管中，且必須現(xiàn)配現(xiàn)用Ｂ3、青蘋果汁遇碘液顯藍(lán)色，熟蘋果汁能與斐林試劑作用產(chǎn)生磚紅色沉淀，下列結(jié)論中最合理的是()A．青蘋果汁中有淀粉，不含還原糖

B．熟蘋果汁中含還原糖，沒有淀粉

C．蘋果轉(zhuǎn)熟時(shí)，大量淀粉水解成還原糖

D．蘋果轉(zhuǎn)熟時(shí)單糖聚合成淀粉

C4、安徽阜陽劣