GB/T 18653-2002胎兒彎曲桿菌的分離鑒定方法

ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18653—2002胎兒彎曲桿菌的分離鑒定方法Methodsforisolationandidentificationofcampylobactorfetus2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華：人民共和國發(fā)布國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18653-2002本標準是依據加拿大國家動物疾病研究所的實驗室操作規(guī)程，結合本國實際情況制定的，通過大量試驗，證實該方法準確可靠。本標準的附錄A是標準的附錄,附錄B是提示的附錄.本標準由中華人民共和國農業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口本標準起草單位：天津動植物檢疫局。本標準主要起草人：秦貞奎、侯艷梅、張碧波

中華人民共和國國家標準GB/T18653-2002胎兒彎曲桿菌的分離鑒定方法Methodsforisolationandidentificationofcampylobactorfetus范圍本標準規(guī)定了胎兒彎曲桿菌的分離鑒定方法本標準適用于牛、綿羊、冷凍精液胎兒彎曲桿菌的檢驗，其他動物可參照使用。2胎兒彎曲桿菌的分離鑒定2.1設備和材料2.1.1混合氣體質量比為3.5%氧(O.)、10%二氧化碳(CO.)、86.5%氮(N.）.2.1.2天氧培養(yǎng)罐。2.1.3采樣棒及吸球2.1.412ml注射器,5號針頭.20號針頭。2.1.55滅菌青霉素瓶及生理鹽水。2.1.6供常規(guī)細菌分離鑒定用的基本設備與材料2.2培養(yǎng)基和試劑[見附錄A(標準的附錄門。2.2.1增菌運輸培養(yǎng)基(TEM)。2.2.2半半胱氨酸牛心浸膏培養(yǎng)基(CH)2.2.3瓊脂培養(yǎng)基(MH)。2.2.4琉基乙酸鹽肉湯2.2.5相關生化試劑。2.3胎兒彎曲桿菌的分離監(jiān)定程序見附錄B(提示的附錄)示意圖2.4分離培養(yǎng)2.4.1樣品采集2.4.1.1母牛站立或六柱欄保定.用5%來蘇兒消毒牛的外陰部·將采樣棒的采樣端插入陰道，壓扁另一端的吸球,并來回抽動,吸取陰道粘液。取出采樣棒后,插入盛有3mL滅菌生理鹽水的小瓶中吹吸數(shù)次·再將采樣棒放入消毒液中。2.4.1.2公牛六柱欄保定用繩子固定采樣側的后肢，剪短陰筒外部的陰毛.用5%的來蘇兒消毒公牛的尿道口.將采樣棒的采樣端插人陰筒內，將另一端的吸球壓扁并來回抽動,吸取包皮液.取出采樣棒迅速插入盛有3mL滅菌生理鹽水的小瓶中吹吸數(shù)次。2.4.1.3樣品液靜置1min～2min·用滅菌注射器吸取上清液2mL·分別注入兩瓶增菌運輸培養(yǎng)基（見附錄A中A1)中，每瓶1mL。振蕩混勾，盡快送至實驗室。2.4.1.4取樣品做革蘭氏染色并做濕涂片鏡檢。也可用棉執(zhí)子龍取樣品液直接涂布于含抗菌素的MH（見附錄A中A3)或CH(見附錄A中A2)瓊脂平板上。2.4.2已接種樣品的增菌運輸培養(yǎng)基置37C培養(yǎng)72h。用直徑3mm的接種環(huán)將增菌液分別劃線于兩個MH或CH平板培養(yǎng)基上，將平板放置慶氧培養(yǎng)罐中，將