標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 20190-2006 飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè) 定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法》這一國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，主要規(guī)定了利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)對(duì)飼料樣品中是否含有牛羊源性成分進(jìn)行定性分析的方法。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概述：

  1. 適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類飼料產(chǎn)品中牛、羊源性成分的檢測(cè)。這些成分可能來(lái)源于動(dòng)物源性蛋白、脂肪等，對(duì)于監(jiān)控飼料中動(dòng)物源性成分的使用，尤其是防止瘋牛病等動(dòng)物疫病通過飼料傳播具有重要意義。

  2. 術(shù)語(yǔ)和定義：標(biāo)準(zhǔn)明確了牛羊源性成分、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)參照等專業(yè)術(shù)語(yǔ)的定義，為正確理解和執(zhí)行檢測(cè)提供了基礎(chǔ)。

  3. 試劑與材料：詳細(xì)列出了進(jìn)行PCR檢測(cè)所需的各種試劑、引物、DNA模板制備所需的化學(xué)物質(zhì)以及實(shí)驗(yàn)所用的儀器設(shè)備，確保實(shí)驗(yàn)條件的標(biāo)準(zhǔn)化和可重復(fù)性。

  4. 樣品的采集與保存：規(guī)范了飼料樣品的采集方法、處理步驟以及保存條件，以保證樣品在檢測(cè)前的穩(wěn)定性和代表性。

  5. DNA提取：描述了從飼料樣品中提取總DNA的具體操作流程，包括破碎細(xì)胞、除去雜質(zhì)、純化DNA等關(guān)鍵步驟，這是PCR檢測(cè)的前提。

  6. PCR反應(yīng)體系與條件：規(guī)定了PCR反應(yīng)的組成成分比例、反應(yīng)體積、循環(huán)參數(shù)（如退火溫度、延伸時(shí)間等），確保檢測(cè)的特異性和靈敏度。

  7. 結(jié)果判定：依據(jù)電泳分析PCR產(chǎn)物的結(jié)果，通過與陽(yáng)性、陰性對(duì)照對(duì)比，判斷樣品中是否存在牛羊源性DNA，明確判定標(biāo)準(zhǔn)，避免假陽(yáng)性和假陰性的出現(xiàn)。

  8. 精密度和準(zhǔn)確度：標(biāo)準(zhǔn)中包含了方法驗(yàn)證部分，通過重復(fù)性試驗(yàn)和再現(xiàn)性試驗(yàn)來(lái)評(píng)估方法的精密度和準(zhǔn)確度，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

  9. 注意事項(xiàng)：提到了實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)，比如防止污染、控制實(shí)驗(yàn)條件一致性等，以減少誤差來(lái)源。


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  • 2006-09-01 實(shí)施
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GB/T 20190-2006飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè)定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法_第1頁(yè)
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ICS65.120B20中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T20190—2006飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè)定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法Detectionofbovine：sheepandgoat-derivedmaterialinfeeds-Qualitativepolymerasechainreaction（PCR)method2006-05-17發(fā)布2006-09-01實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局愛布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T20190—2006前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國(guó)家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心(北京)、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：楊曙明、宋榮、程憲國(guó)、高生、賴衛(wèi)華、王彤。

GB/T20190—2006含牛羊源性成分的動(dòng)物源性飼料的使用，-直被認(rèn)為是瘋牛病傳播的主要途徑.禁止疫區(qū)含牛羊源性成分的動(dòng)物源性飼料的生產(chǎn)、流通和使用.成為預(yù)防瘋牛病感染、流行的主要手段之一。1996年歐盟提出了動(dòng)物源性飼料中牛羊源性成分的檢測(cè)方法（EUR18096EN)。2002年我國(guó)發(fā)布了中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1119—2002《進(jìn)出口動(dòng)物源性飼料中牛羊源性成分檢測(cè)方法PCR法》用于檢測(cè)動(dòng)物源性飼料。我國(guó)沒有針對(duì)配合飼料和濃縮飼料等飼料產(chǎn)品中牛羊源性成分的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn).EUR18096EN和SN/T1119—2002方法適用于動(dòng)物源性飼料.在DNA提取上不適用于以植物為主要基質(zhì)的配合飼料和濃縮飼料。本方法是在SN/T1119—2002、歐盟方法的基礎(chǔ)上提出.在大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上建立起來(lái)的。

GB/T20190—2006飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè)定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了PCR方法對(duì)飼料中牛羊源性成分定性檢測(cè)本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中牛羊源性成分的定性檢測(cè).本方法的最低檢出限為0.25%2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而.鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理根據(jù)牛羊遺傳物質(zhì)的特異性，通過檢索基因庫(kù)或?qū)＠麕?kù),選擇牛羊特異性的DNA序列，該序列必須在同類動(dòng)物(無(wú)論什么品種)中都具有高度保守性，而其他動(dòng)物皆不含有。利用種屬特異性的引物通過PCR擴(kuò)增這一特定的DNA序列,通過電泳分離PCR產(chǎn)物,以標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)度的PCR產(chǎn)物作對(duì)照,檢測(cè)PCR擴(kuò)增出的這一特定的DNA片斷.判斷是否含有牛羊源性成分。此外.通過限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng).進(jìn)一步判斷結(jié)果。通過對(duì)PCR擴(kuò)增的特定DNA片斷進(jìn)行測(cè)序,與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比較,來(lái)確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果。試劑與材料除非另有說明,在分析中僅使用分析純?cè)噭?水應(yīng)符合GB/T6682一級(jí)水要求.4.1三羥甲基氨基甲烷鹽酸(Tris-HCI)溶液,1mol/L.pH值為8.0:在800mL.去離子水中洛解121.1g三羥甲基氨基甲烷(Tris).冷卻至室溫后用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0,加水定容至1L,分裝后高壓火菌。4.2三羥甲基氨基甲燒鹽酸（Tris-HCI)溶液,1mol/L.pH值為7.5:在80mL去離子水中溶解12.11gTris.冷卻至室溫后用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.5,加水定容至100mL.分裝后高壓滅菌。4.3氯化鈉溶液,5mol/L:在80mL水中溶解29.22g氯化鈉.加水定容至100mL..4.4乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)溶液，500mmol/L:稱取186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa.·2H.O).加入700mL水中,在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8.0,用水定容到1L，分裝后高壓滅菌。4.5溴代十六烷基三甲胺(CTAB)提取緩沖液I：在800mL去離子水中加入46.75g氯化鈉.搖動(dòng)容器使溶質(zhì)完全溶解,然后加人50mLTris-HCl溶液(4.1)和20mLEDTA溶液(4.4）,然后定容至1L.分裝后高壓滅菌。4.6溴代十六烷基三甲胺(CTAB)提取緩沖液Ⅱ：在800mL去離子水中加入46.75g氯化鈉.20g溴代十六烷基三甲胺(CTAB)搖動(dòng)容器使溶質(zhì)完全溶解.然后加入50mLTris-H

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