實驗一普通生物顯微鏡的使用

實驗一普通生物顯微鏡的使用第一頁，共三十頁，2022年，8月28日一、實驗目的：

1.了解普通光學顯微鏡和體視顯微鏡的基本構(gòu)造及功用，并正確掌握使用和維護方法。

2.觀察一些真核細胞的結(jié)構(gòu)，學習基本生物繪圖方法。3.學習臨時裝片的制作方法。第二頁，共三十頁，2022年，8月28日二、實驗原理：（一）、顯微鏡概述：

顯微鏡是觀察細胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。第三頁，共三十頁，2022年，8月28日（二）、顯微鏡的發(fā)明：

1.最早由荷蘭眼鏡商在1600年前后制造的，它的結(jié)構(gòu)簡單，放大倍數(shù)只有10～30倍，可以觀察一些小昆蟲，如跳蚤等，因而有人稱它為“跳蚤鏡”。這種顯微鏡是用光線照明的，屬于光學顯微鏡。第四頁，共三十頁，2022年，8月28日2.英國物理學家羅伯特·虎克（RobertHooke，

1635—1703）研制出能夠放大140倍的光學顯微

鏡，并用它來觀察軟木薄片，發(fā)現(xiàn)了細胞。第五頁，共三十頁，2022年，8月28日3.1673年有個名叫列文.虎克（AntonivanLeeuwenhoek）的荷蘭人用自己制造的顯微鏡觀察到了被他稱為“小動物”的微生物世界。他也被稱為微生物的開山祖。第六頁，共三十頁，2022年，8月28日4.1938年，德國工程師魯斯卡（ErnestRuska,

1906-1988)

制造出世界第一臺透射電子顯微鏡

（TEM）。1952年，英國工程師CharlesOatley

制造出第一臺掃描電子顯微鏡（SEM）第七頁，共三十頁，2022年，8月28日（三）、顯微鏡的分辨率:

分辨率：也稱為分辨力，它是指能把兩個物點分辨清楚的最小距離。分辨率數(shù)值越高，分辨距離越大，則分辨率越低。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距離來表示的。其計算公式為:D=0.61入/N·AN·A·=n·sina/2

式中D為分辨率，A為光波波長，N·A·為物鏡的數(shù)值孔徑(鏡口率)。

第八頁，共三十頁，2022年，8月28日

在物鏡上，有鏡口率(N.A.)的標志，它反應(yīng)該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高。各物鏡的鏡口率如下表：

物鏡鏡口率(N.A.)工作距離(mm)10×0.255.4040×0.650.39100×1.300.11顯微鏡的總放大倍數(shù)=目鏡放大倍數(shù)×物鏡放大倍數(shù)

公式為:M=K1×

K2

第九頁，共三十頁，2022年，8月28日焦點深度:

顯微鏡調(diào)焦到看清標本某一點時，不僅是這一物點，而且它的上下兩側(cè)也能看清楚的厚度叫做焦點深度。要看到標本的全厚度，必須調(diào)節(jié)螺旋仔細地從上到下進行觀察。第十頁，共三十頁，2022年，8月28日三、材料和儀器：儀器：普通光學顯微鏡、體視鏡（附顯微用品：擦鏡紙、香柏油、二甲苯、載玻片、蓋玻片）材料與器材：新鮮酵母液、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、標本盒（內(nèi)有各種裝片）第十一頁，共三十頁，2022年，8月28日四、實驗步驟：（一）普通顯微鏡的使用及維護：I.光學顯微鏡的構(gòu)造普通生物顯微鏡由2部分構(gòu)成：①：光學部分：包括物鏡、目鏡、光源、聚光器，是顯微鏡的主體。②：機械部分：包括鏡筒、鏡臂、鏡座、鏡臺(載物臺）、調(diào)節(jié)旋鈕、物鏡轉(zhuǎn)換器等，用于固定材料和觀察方便。第十二頁，共三十頁，2022年，8月28日II.顯微鏡的使用

1.

觀察前的準備工作

①

.顯微鏡在使用之前應(yīng)檢查一下它的各個部件是否完整和正常，并對載物臺、目鏡、物鏡以及聚光器上端透鏡進行必要的清潔工作。然后進行調(diào)節(jié)。

②

.觀察時要雙眼同時睜開，一邊觀察一邊進行記錄或描繪。

③

.觀察時所用的材料、藥品和各種器具要預先備好第十三頁，共三十頁，2022年，8月28日2.使用方法：（1）低倍鏡的使用：觀察任何標本，均需從低倍鏡開始。①檢查：檢查顯微鏡是否完好。②準備：將顯微鏡放于前方略偏左，轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕將載物臺下降，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器使低倍鏡正對通光孔。③對光：④放標本片：

⑤調(diào)節(jié)焦距⑥計算放大倍數(shù)：第十四頁，共三十頁，2022年，8月28日錯誤原因：如按上述操作，依然看不到圖象，可能有以下原因：A.轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)太快，超過焦點，需重新調(diào)節(jié)。B.物鏡未對準通光孔。C.標本沒放在視野內(nèi)，需移動標本片尋找觀察對象。D.光線太強或太弱。尤其觀察透明或未染色標本時，應(yīng)將光線調(diào)稍暗些，有利觀察。第十五頁，共三十頁，2022年，8月28日（2）高倍鏡的使用：①依照上述操作步驟，先用低倍鏡找到清晰物象，②將需要觀察的部分移到視野中央，③眼睛從側(cè)面注視物鏡，移動轉(zhuǎn)換器，換高倍鏡，④看目鏡，微調(diào)細調(diào)旋鈕，至看到清晰物象。

第十六頁，共三十頁，2022年，8月28日錯誤原因：如按上述操作，依然看不到圖象，可能有以下原因：A.觀察的標本不在視野內(nèi)。應(yīng)在低倍鏡下找到后，移到視野中央，再換高倍鏡觀察。B.標本放反了。C.焦距未調(diào)好。第十七頁，共三十頁，2022年，8月28日（3）油鏡的使用：

①先用低倍鏡觀察標本情況。②換高倍鏡，把需觀察的部分移至視野中央。

③將聚光器升至最高位置，光圈開至最大。④在蓋玻片所要觀察的位置滴一小滴香柏油，放于載物臺。⑤把油鏡移至工作位置。第十八頁，共三十頁，2022年，8月28日⑥慢慢調(diào)節(jié)粗細調(diào)節(jié)旋鈕，使載物臺緩慢上升，同時細心從側(cè)面觀察物鏡前端與標本之間的距離。先使物鏡前端與油滴接觸，再慢慢上升載物臺，至物鏡前端接近而沒有碰觸到蓋玻片為止。（小心損傷油鏡或裝片）⑦眼睛從目鏡觀察，緩慢調(diào)節(jié)細調(diào)旋鈕至看清標本（注意只能下降載物臺）第十九頁，共三十頁，2022年，8月28日⑧觀察完畢，下降載物臺，使油鏡離開光軸，及時做好油鏡的清潔工作（先用干凈的擦鏡紙擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦拭兩次，最后用干的擦鏡紙擦拭一次）。玻片上的油可用“拉紙法”擦去：把一小張擦鏡紙蓋在載玻片的油滴上，其上滴一兩滴二甲苯，趁濕把紙往外拉，連續(xù)幾次，即可擦凈（注意不要使用過多的二甲苯，并及時擦干凈上面的香柏油，以免使裝片受損）。第二十頁，共三十頁，2022年，8月28日注意：如果不出現(xiàn)物象或者目標不理想要重找，A.在加油區(qū)之外重找時應(yīng)按：低倍→高倍→油鏡程序。

B.在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍→油鏡程序，不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。

第二十一頁，共三十頁，2022年，8月28日3.顯微鏡使用后的復原：（1）下降聚光器約1cm，（2）使物鏡離開光軸，使通光孔正隊兩個物鏡中間，提升載物臺至原來位置，（3）把載物臺上的標本移動器移至適當位置，（4）關(guān)閉電源。第二十二頁，共三十頁，2022年，8月28日4、顯微鏡使用的注意事項（1）持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。（2）輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。（3）保持顯微鏡的清潔，光學和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和載物臺如果沾污應(yīng)立即擦凈。第二十三頁，共三十頁，2022年，8月28日（5）放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。（6）要養(yǎng)成兩眼同時睜開的習慣，以左眼觀察視野右眼用以繪圖。（7）不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。（8）使用完畢后，必須復原才能放回鏡箱內(nèi)。第二十四頁，共三十頁，2022年，8月28日（二）、體視鏡的使用

體視顯微鏡又稱實體顯微鏡，它在觀察物體時能產(chǎn)生正立的三維空間影像。立體感強，成像清晰和寬闊，又具有長工作距離，并可根據(jù)觀察物的特點選用不同的反射和透射光照明，是適用范圍非常廣泛的常規(guī)顯微鏡。

第二十五頁，共三十頁，2022年，8月28日（三）、標本的觀察“5”字片：低倍人血涂片：低倍高倍油鏡兔精蟲涂片：低倍高倍單層扁平上皮：低倍高倍動、植物細胞有絲分裂切片：低倍高倍日本血吸蟲雌雄合抱裝片：肉眼低倍第二十六頁，共三十頁，2022年，8月28日（四）、酵母臨時裝片的制作1.滴一滴鮮酵母液于干凈的載玻片上，2.輕輕蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡，3.低倍、高倍鏡下觀察。注意：觀察時注意光線不要太強，以免影響觀察效果。第二十七頁，共三十頁，2022年，8月28日（五）生物學繪圖方法：1.用2H鉛筆繪輪廓，用HB鉛筆描深，線條要光滑，2.圖及文字部分全部用鉛筆，文字用中文楷書，3.繪圖紙上端寫清實驗名稱，中部畫圖，下部寫清所繪圖名稱、放大倍數(shù)，4.標明圖中各部分名稱，用直線引線并標在圖的右側(cè)，名稱較多時，可先標在右側(cè)，再標在左側(cè)，5.可用光滑黑點表示明暗不同，不可大面積涂黑。第二十八頁，共三十頁，2022年，8月28日五、作業(yè)：1.繪圖：繪出你用油鏡所觀察到的人紅細胞視野圖。2.思考題：（1）總結(jié)使用顯微鏡應(yīng)特別注意的幾個問題。（2）從低倍物鏡轉(zhuǎn)高倍物鏡時應(yīng)注意哪幾點？（3）接物鏡上各銘文有何意義？（4）用油鏡觀察和嗣后的操作步驟。為什么要用