實(shí)驗(yàn)一還原性糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定

實(shí)驗(yàn)一還原性糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定第一頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日一、實(shí)驗(yàn)原理可溶性還原糖＋蛋白質(zhì)＋脂肪＋斐林試劑雙縮脲試劑磚紅色沉淀蘇丹Ⅲ染液蘇丹Ⅳ染液橘黃色紅色紫色顏色反應(yīng)第二頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日二、幾種重要的試劑斐林試劑甲液（0.1g/mL的NaOH溶液）乙液（0.05g/mL的CuSO4溶液）現(xiàn)配現(xiàn)用混合均勻雙縮脲試劑A液（0.1g/mL的NaOH溶液）B液（0.01g/mL的CuSO4溶液）現(xiàn)配現(xiàn)用先加A液再加B液蘇丹Ⅲ（Ⅳ）染液：用來(lái)鑒定脂肪的存在第三頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1、可溶性還原糖的鑒定(1)制備組織樣液：蘋(píng)果洗凈、去皮、切塊→取5g加少許石英砂研磨→加5mL水再研磨→漏斗墊紗布后過(guò)濾，得到樣液(2)鑒定樣液：取2mL樣液于試管中→注入2mL剛配制的斐林試劑，振蕩混合（淡藍(lán)色）→水浴煮沸2min左右，觀察溶液顏色變化（先變?yōu)樽厣僮優(yōu)榇u紅色）第四頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日制備生物組織樣液取材、研磨、過(guò)濾取樣取2ml組織樣液注入試管注入試管中注入試劑向試管中注入2ml剛配制的斐林試劑加熱和觀察(將4—5滴乙液滴入2ml甲液中)第五頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日2、脂肪的鑒定(1)切片制作(2)染色：在花生子葉切片上滴2～3滴蘇丹Ⅲ染液→2～3min中后，吸去染液→滴體積分?jǐn)?shù)為50％的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精，再滴1～2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片(3)鏡檢鑒定：在低倍物鏡下觀察，找到花生子葉切片的最薄處，移至視野中央→轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，換用高倍物鏡觀察（脂肪滴:橘黃色的圓形小顆粒）第六頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日制備實(shí)驗(yàn)材料去種皮、削平面、切片染色滴2—3滴蘇丹Ⅲ染液染色2—3分鐘去浮色在玻片上滴1—2滴體積分?jǐn)?shù)為50%酒精溶液，洗去浮色制作臨時(shí)裝片放在顯微鏡下觀察（先低倍后高倍）第七頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日2、蛋白質(zhì)的鑒定(1)制備組織樣液：浸泡黃豆1～2d→去皮、切成薄片，加少許石英砂及5mL水研磨→漏斗墊紗布后過(guò)濾，得到樣液（用蛋清要稀釋10倍以上，否則實(shí)驗(yàn)后黏住試管壁不易洗凈）(2)鑒定樣液：取2mL樣液于試管Ⅰ中→加入

2mL雙縮脲試劑A液搖勻（造成一個(gè)堿性環(huán)境）→加入雙縮脲試劑B液3～4滴，搖勻，注意顏色變化（溶液變?yōu)樽仙?。另?/p>

清水于試管Ⅱ中→加入

搖勻→

顏色變化，作為

。2mL（A液、B液）無(wú)對(duì)照第八頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日制備生物組織樣液取材研磨過(guò)濾或制備蛋清液注入組織樣液取一支試管注入黃豆組織液（或蛋清液）2ml注入試劑A加入2ml雙縮尿試劑A加入雙縮尿試劑B觀察顏色變化第九頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日五、注意事項(xiàng)[1]斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05g/ml的硫酸銅溶液）分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)再臨時(shí)配制，將4—5滴乙液滴入2ml甲液中，配完后立即使用。[2]雙縮尿試劑的使用，應(yīng)先加A（0.1g/ml的NaOH溶液），造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再加B液（0.01g/ml的硫酸銅溶液）。第十頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日[5]在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡3—4個(gè)小時(shí)，浸泡時(shí)間短，不易切片，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易成型，染色時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)。[4]在蛋白質(zhì)的鑒定試驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)材料，必須稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管，不易洗刷。[3]在鑒定可溶性還原糖的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)試管中的溶液進(jìn)行加熱時(shí)，試管底部不要觸及燒杯底部，另外，試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免沸騰的熔液沖出試管，造成燙傷。第十一頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日課堂練習(xí)1、用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時(shí)，

溶液顏色的變化過(guò)程是（）A、無(wú)色→磚紅色（沉淀）B、淺藍(lán)色→磚紅色（沉淀）C、淺藍(lán)色→藍(lán)色→磚紅色（沉淀）D、淺藍(lán)色→棕色→磚紅色（沉淀）D第十二頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日2、在用雙縮尿試劑鑒定蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，正確的操作是（）

A、2ml蛋白質(zhì)稀釋液先加0.1g/ml的NaOH，再加3—4滴0.01g/ml

CuSO4溶液。

B、2ml蛋白質(zhì)稀釋液先加3—4滴0.01g/ml

CuSO4溶液，再加0.1g/ml的NaOH

C、2ml蛋白質(zhì)稀釋液，同時(shí)加3—4滴0.01g/ml

CuSO4和0.1g/ml的NaOH混合液。

D、在NaOH和CuSO4混合液中加入蛋白質(zhì)稀釋液。A第十三頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日3、用蘇丹Ⅲ染液對(duì)脂肪組織進(jìn)行染色時(shí)，可用來(lái)沖洗浮色的藥品是（）

A、HCI；B、H2O；

C、50%的酒精；D、無(wú)水酒精。4、下列哪個(gè)實(shí)驗(yàn)用到顯微鏡（）

A、可溶性還原糖的鑒定；B、蛋白質(zhì)的鑒定；C、脂肪的鑒定；D、淀粉的鑒定。CC第十四頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日5、下列哪種試劑在使用過(guò)程中，必須經(jīng)過(guò)加熱（）

A、斐林試劑鑒定可溶性還原糖的過(guò)程中；

B、蘇丹Ⅲ

在鑒定動(dòng)物組織中的脂肪時(shí)；

C、雙縮尿試劑鑒定蛋白質(zhì)時(shí)；

D、碘化鉀溶液鑒定淀粉時(shí)。6、下列糖中能與斐林試劑反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀的是（）A、淀粉；B、果糖；C、蔗糖；D、纖維素。AB第十五頁(yè)，共十六頁(yè)，2022年，8月28日在蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)中，必須先加A液再加B液的原因是:

為什么加入3—4滴B液而不能過(guò)量？