實驗室玻璃器皿培養(yǎng)基的滅菌技術(shù)

實驗室玻璃器皿培養(yǎng)基的滅菌技術(shù)第一頁，共七十二頁，2022年，8月28日概念消毒：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。無菌：不存在活菌的意思。防腐：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法。第二頁，共七十二頁，2022年，8月28日一、消毒與滅菌的方法物理的方法：加熱、過濾、輻射化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物。主要破壞細菌代謝機能。如重金屬離子，磺胺類藥物及抗生素等。第三頁，共七十二頁，2022年，8月28日物理方法干熱滅菌又稱熱空氣滅菌，是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性的原理。濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽進行滅菌的方法，由于蒸汽潛熱大，穿透力強，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，所以該法的滅菌效率比干熱滅菌法高。第四頁，共七十二頁，2022年，8月28日物理方法輻射：利用輻射進行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點，所以應(yīng)用越來越廣。第五頁，共七十二頁，2022年，8月28日物理方法

1）紫外線：波長200~300m的紫外線具有殺菌作用。殺菌機理：干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。特點：穿透力不大。距照射物<1.2m為宜。應(yīng)用范圍：空氣消毒。例如，手術(shù)室、傳染病房、細菌實驗室不耐熱物品的表面消毒。注意事項：對眼睛和皮膚有刺激作用。第六頁，共七十二頁，2022年，8月28日物理方法

2）電離輻射：包括高速電子、X射線和γ射線殺菌機理：產(chǎn)生游離基,破壞DNA。應(yīng)用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品的消毒食品的消毒不破壞其營養(yǎng)成分第七頁，共七十二頁，2022年，8月28日物理方法過濾：采用機械方法，設(shè)計一種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器。通過過濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達到除菌的目的。這種滅菌方法適用于一些對熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌。它的最大優(yōu)點是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi)，有時會給實驗帶來一定的麻煩。第八頁，共七十二頁，2022年，8月28日過濾注意事項：1、壓力適當(dāng)；

2、無菌條件下進行；

3、防止?jié)B透現(xiàn)象。第九頁，共七十二頁，2022年，8月28日一般化學(xué)藥劑無法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑?；瘜W(xué)方法第十頁，共七十二頁，2022年，8月28日各種消毒劑的種類類別作用機制常用種類酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸甲重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫第十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日各種消毒劑的應(yīng)用種類使用濃度用途石炭酸3%~5%地面、器具表面、皮膚消毒乙醇3%~5%皮膚、體溫計消毒高錳酸甲3%~5%皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒紅汞3%~5%皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒硫柳汞3%~5%皮膚消毒、手術(shù)部位消毒過氧乙酸3%~5%塑料、玻璃器材消毒碘酒3%~5%皮膚消毒新潔而滅3%~5%手術(shù)洗手、浸泡手術(shù)器械第十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌適用范圍：用于高溫下不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)物品的滅菌；用于不耐濕熱的器械的滅菌；用于蒸汽或氣體不能穿透物品的滅菌，如玻璃、油脂、粉劑（遇水結(jié)塊）和金屬等制品的消毒。第十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌干熱滅菌法又分為燒灼和焚燒、干烤、紅外線、微波等幾種方法。第十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌（1）燒灼和焚燒：燒灼是直接用火焰殺死微生物，適用于實驗室的金屬器械（鑷、剪、接種環(huán)、接種針等）、玻璃試管口和瓶口等不怕熱的器材滅菌。焚燒是徹底的消毒方法，但只限于處理廢棄的污染物品，如無用的衣物、紙張、垃圾等。焚燒應(yīng)在專用的焚燒爐內(nèi)進行。第十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌（2）干烤：在干烤箱內(nèi)進行，加熱至160℃～170℃維持2小時，可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。此方法適用于耐高溫的玻璃器皿、瓷器、玻質(zhì)注射器等。第十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌（3）紅外線：是波長為770nm～1000μm的電磁波，以1μm～10μm波長的熱效應(yīng)最強。亦被認為一種干熱滅菌。紅外線由紅外線燈泡產(chǎn)生,不需要經(jīng)空氣傳導(dǎo)，所以加熱速度快，但熱效應(yīng)只能在照射到的表面產(chǎn)生，因此不能使一個物體的前后左右均勻加熱。紅外線的殺菌作用與干熱相似，利用紅外線烤箱滅菌的所需溫度和時間亦同于干烤。多用于醫(yī)療器械的滅菌。第十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌紅外線滅菌注意事項：人受紅外線照射較長會感覺眼睛疲勞及頭疼；長期照射會造成眼內(nèi)損傷。因此，工作人至少應(yīng)戴能防紅外線傷害的防護鏡。第十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌（4）微波：波長為1mm～1000mm的電磁波統(tǒng)稱為微波，可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。微波能使介質(zhì)內(nèi)雜亂無章的極性分子在微波場的作用下，按波的頻率往返運動，互相沖撞和磨擦而產(chǎn)生熱，介質(zhì)的溫度可隨之升高，因而在較低的溫度下能起到消毒作用。第十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌一般認為其殺菌機理除熱效應(yīng)以外，還有電磁共振效應(yīng)，磁場致力效應(yīng)等的作用。消毒中常用的微波有2450MHZ與915MHZ兩種。微波照射多用于食品加工。在醫(yī)院中可用于檢驗室用品、非金屬器械、無菌病室的食品食具、藥杯及其它用品的消毒。第二十頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌微波長期照射可引起眼睛的晶狀混濁、睪丸損傷和神經(jīng)功能紊亂等全身性反應(yīng)，因此必須關(guān)好門后再開始操作。第二十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌干熱滅菌的注意事項：待滅菌的物品在干熱滅菌前應(yīng)先洗凈，防止造成滅菌失敗或污物炭化；玻璃器皿滅菌前應(yīng)洗凈并干燥；滅菌時勿與烤箱底部及四壁接觸，滅菌后要待溫度降到40℃以下再開箱，以防止爆裂；第二十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日物品包裝不能過大，不超過10厘米×10厘米×20厘米，物品不能超過烤箱的高度的2/3，物品間應(yīng)留有充分的空間（可放入一只手）；油劑、粉劑的厚度不得超過0.6厘米；凡士林布條厚度不得超過1.3厘米。溫度高于170℃時，有機物會炭化，故有機物品滅菌時，溫度不可過高。第二十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌電熱恒溫干燥箱（俗稱“烤箱”）的使用1.裝料：將帶滅菌的物品包扎好放入電熱恒溫干燥箱。注意物品不能擺得太擠，以免影響熱空氣流通。用紙包扎的物品不能接觸內(nèi)壁。2.升溫：接通電源，打開排氣孔，排除箱內(nèi)濕空氣；旋動恒溫調(diào)節(jié)器，讓溫度逐漸上升。當(dāng)溫度升至100攝氏度，關(guān)閉排氣孔。第二十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱滅菌3.恒溫：當(dāng)溫度升到160攝氏度時，利用恒溫調(diào)節(jié)器的自動控制，保持溫度1h。滅菌物品用紙包扎或帶有棉塞時溫度不能超過170攝氏度。4.降溫：達到規(guī)定的時間后，切斷電源，自然降溫。5.取料：待箱內(nèi)溫度降到60攝氏度，打開箱門，取出滅菌物品。箱內(nèi)溫度未降到70攝氏度，切勿打開箱門，以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿破裂。第二十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌第二十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌適用范圍：用于耐高溫、耐高濕的醫(yī)療器械和物品的滅菌。第二十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌濕熱滅菌法分為煮沸法、流通蒸汽滅菌法、間隙滅菌法、巴氏消毒法、高壓蒸汽滅菌法等幾種滅菌方法。第二十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌（1）煮沸法：煮沸100℃，5分鐘，能殺死一般細菌的繁殖體。許多芽胞需經(jīng)煮潮5～6小時才死亡。水中加入2%碳酸鈉，可提高其沸點達105℃。既可促進芽胞的殺滅，又能防止金屬器皿生銹。煮沸法可用于飲水和一般器械（刀剪、注射器等）的消毒。第二十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌（2）流通蒸汽滅菌法：利用100℃左右的水蒸汽進行消毒，一般采用流通蒸汽滅菌器（其原理相當(dāng)于我國的蒸籠），加熱15到39分鐘，可殺死細菌繁殖體。消毒物品的包裝不宜過大、過緊，這樣以利于蒸汽穿透。凡不耐高溫的物質(zhì)，如糖類、明膠、血清、牛乳及雞蛋等可用此方法滅菌。

第三十頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌（3）間歇滅菌法：又稱分段滅菌法。適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。方法是：將待滅菌的培養(yǎng)基在100℃下蒸煮30-60min，以殺死其中所有微生物的營養(yǎng)細胞，然后置室溫或20-30℃下保溫過夜，誘導(dǎo)殘留的芽胞萌發(fā)，第二天再以同法蒸煮和保溫過夜，如此連續(xù)重復(fù)3天，即可在較低溫度下達到徹底滅菌的效果。例如，培養(yǎng)硫細菌的含硫培養(yǎng)基就是應(yīng)用間歇滅菌法滅菌，因為其中的元素硫經(jīng)常規(guī)的高壓滅菌(12l℃)后會發(fā)生熔化，而在100℃的溫度下則呈結(jié)晶狀。第三十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日間歇滅菌法的注意事項：使用間歇法滅菌時必須在滅菌物里外都達到100℃后開始計算滅菌時間。間歇法滅菌時應(yīng)在每次加熱后，迅速降溫，然后在室溫放置24h，再第二次加熱。如果降溫慢，往往使未殺死的雜菌大量滋長，反面導(dǎo)致滅菌物變質(zhì)，特別是包裝過大時，靠近中心部分更易發(fā)生這種情況。第三十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌（4）巴氏消毒法（Pasteurization）：有些食物會因高溫破壞營養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營養(yǎng)和風(fēng)味，又進行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法一般在62°C，30分鐘既可達到消毒目的。此法為法國微生物學(xué)家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。第三十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日巴氏消毒法是一種低溫消毒法，具體的處理溫度和時間各有不同，一般在60-85℃下處理15-30min。具體的方法可分兩類，第一類是較老式的，稱為低溫維持法，例如在63℃下保持30min可進行牛奶消毒；另一類是較新式的，稱為高溫快速法，用于牛奶消毒時只要在85℃下保持5min即可。但是巴氏消毒法不能殺滅引起Q熱的病原體--伯氏考克斯氏體(一種立克次氏體)。第三十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌（5）高壓蒸汽滅菌法：壓力蒸汽滅菌是在專門的壓力蒸汽滅菌器中進行的，是熱力滅菌中使用最普遍、效果最可靠的一種方法。其優(yōu)點是穿透力強，滅菌效果可靠，能殺滅所有微生物。第三十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日濕熱滅菌壓力蒸汽滅菌器分類：根據(jù)排放冷空氣的方式和程度不同，分為下排氣壓力蒸汽滅菌器和預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器。第三十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日干熱和濕熱兩者比較在同樣的溫度下，溫?zé)岬臍⒕Ч雀蔁岷?，其原因有：①蛋白質(zhì)凝固所需的溫度與其含水量有關(guān)，含水量愈大，發(fā)生凝固所需的溫度愈低。濕熱滅菌的菌體蛋白質(zhì)吸收水分，因較同一溫度的干熱空氣中易于凝固。第三十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日兩者比較②溫?zé)釡缇^程中蒸氣放出大量潛熱，加速提高濕度。因而濕熱滅菌比干熱所要溫度低，如在同一溫度下，則濕熱滅菌所需時間比干熱短。③濕熱的穿透力比干熱大，使深部也能達到滅菌溫度，故濕熱比干熱收效好。第三十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌器的基本構(gòu)造

1.外鍋或稱“套層”，供貯存蒸汽用，連有用電加熱的蒸汽發(fā)生器，并有水位玻管以標(biāo)志盛水量。外鍋的外側(cè)一般包有石棉或玻璃棉絕緣層以防止散熱。如直接使用由鍋爐接入的高壓蒸汽，則外鍋在使用時充滿蒸汽，作為內(nèi)鍋保溫。

2.內(nèi)鍋或稱滅菌室，是放置滅菌物的空間．可配制鐵蓖架以分放滅菌物。第三十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日3.壓力表內(nèi)外鍋各裝一只，老式的壓力表上標(biāo)明三種單位：公斤壓力單位(kg/cm2)，英制壓力單位(1b/in2)和溫度單位(℃)，便于滅菌時參照。現(xiàn)在的壓力表用MPa表示。4.溫度計可分為兩種，一種是直接插入式的水銀溫度計，裝在密閉的銅管內(nèi)，焊插在內(nèi)鍋中．另一種是感應(yīng)式儀表溫度計，其感應(yīng)部分安裝在內(nèi)鍋的排氣管內(nèi)，儀表安裝于鍋外頂部．便于觀察。第四十頁，共七十二頁，2022年，8月28日5.排氣閥一般外鍋、內(nèi)鍋各一個，用于排除空氣。新型的滅菌器多在排氣閥外裝有汽液分離器(或稱疏水閥)．內(nèi)有由膨脹盒控制的活塞。利用空氣、冷凝水與蒸汽之間的溫差控制開關(guān)，在滅菌過程中，可不斷地自動排出空氣和冷凝水。6.安全閥或稱保險閥．利用可調(diào)彈簧控制活塞，超過額定壓力即自動放氣減壓。通常調(diào)在額定壓力之下，略高于使用壓力。安全閥只供超壓時安全報警之用，不可在保溫時用作自動減壓裝置。第四十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日7.熱源除直接引入鍋爐蒸汽滅菌外，都具有加熱裝置。近年來的產(chǎn)品以電熱為主，即底部裝有調(diào)控電熱管，使用比較方便。有些產(chǎn)品無電熱裝置，則附有打氣煤油爐等。手提式滅菌器也可用煤炭爐作為熱源。第四十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日第二節(jié)實驗內(nèi)容第四十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日一、實驗?zāi)康牧私鉂駸釡缇脑?，學(xué)習(xí)并掌握蒸汽滅菌的操作方法與注意事項。第四十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日二、實驗原理高壓蒸汽滅菌是微生物學(xué)實驗、發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)、以及外科手術(shù)器械等方面常用的一種滅菌方法，屬于濕熱滅菌。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、無菌水、無菌緩沖液、金屬用具、接種室的實驗服及傳染性標(biāo)本都可采用此法滅菌。第四十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日將待滅菌的物體放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)。把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，并把其中原有的冷空氣徹底驅(qū)盡后將鍋密閉。再繼續(xù)加熱就會使鍋內(nèi)的蒸汽壓逐漸上升，從而溫度也隨之上升到100℃以上。為達到良好的滅菌效果，一般要求溫度應(yīng)達到121℃(壓力為0.1MPa)，時間維持15-30min。也可采用在較低的溫度(115℃，即0.075MPa)下維持35min的方法。第四十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌是依據(jù)水的沸點隨水蒸汽壓的增加而上升，加壓是為了提高水蒸汽的溫度。第四十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌時常用的滅菌壓力、溫度與時間蒸汽壓力蒸汽溫度(°C)滅菌時間（min）MPaKgf/cm2Lbf/in20.0550.568.00112.6300.0690.7010.00115.2200.1031.0015.00121.020第四十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌器是一個能耐壓、同時可以密閉的金屬鍋，有立式、臥式、手提式三種。熱源可以用蒸汽、煤氣或電源。滅菌器上裝有表示鍋內(nèi)溫度和壓力的溫度計、壓力表。滅菌鍋還有排氣口、安全活塞。如壓力超過一定限度，活塞的閥門便自動打開，放出過多的蒸汽。第四十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日高壓蒸汽滅菌技術(shù)關(guān)鍵是在壓力上升之前需將鍋內(nèi)冷空氣排盡。若鍋內(nèi)未排除的冷空氣滯留在鍋中，壓力表雖指示0.1MPa，但鍋內(nèi)溫度實際只有100攝氏度，高壓結(jié)束會造成滅菌不徹底。第五十頁，共七十二頁，2022年，8月28日空氣排除程度與溫度關(guān)系壓力表讀數(shù)MPa滅菌器內(nèi)溫度/°C未排除空氣排除1/3空氣排除1/2空氣排除2/3空氣完全排除空氣0.0347290941001090.069901001051091150.1031001091121151210.1381091151181211260.1721151211241261300.206121126128130135第五十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日影響滅菌的因素a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對高溫的敏感性不同。多數(shù)微生物的營養(yǎng)體和病毒在50~65°C，10分鐘就會被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱，其中抗熱性最強的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在121°C，12分鐘才被殺死。對同種微生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感；

第五十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日影響滅菌的因素b.微生物的數(shù)量多少顯然會影響滅菌的效果，數(shù)量越多，熱死時間越長；c.培養(yǎng)基的成分與組成也會影響滅菌效果。一般地講，蛋白質(zhì)、糖或脂肪存在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性最強，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同的鹽類可能對滅菌產(chǎn)生不同的影響；固體培養(yǎng)基要比液體培養(yǎng)基滅菌時間長。第五十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日第五十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日滅菌時的過高溫度常對培養(yǎng)基造成的主要不良影響如下：（1）出現(xiàn)混濁、沉淀(天然培養(yǎng)基成分加熱可以沉淀出大分子多聚合物；培養(yǎng)基中Ca、Mg、Fe、Zn等陽性離子與培養(yǎng)基中的可溶性磷酸鹽共熱沉淀)。第五十五頁，共七十二頁，2022年，8月28日（2）營養(yǎng)成分破壞或改變（酸度較高時淀粉、蔗糖、乳糖或瓊脂滅菌過程易水解；pH7.5、0.1MPa滅菌20min，葡萄糖破壞20%、麥芽糖破壞50%，若培養(yǎng)基中有磷酸鹽共存，葡萄糖轉(zhuǎn)變成酮糖類物質(zhì)，培養(yǎng)液由淡黃色變?yōu)榧t褐色，破壞更為嚴(yán)重）。第五十六頁，共七十二頁，2022年，8月28日（3）pH7.2時培養(yǎng)基中的葡萄糖、蛋白胨、磷酸鹽在0.1MPa滅菌15min以上可產(chǎn)生對微生物生長的某種抑制物。（4）高壓蒸汽滅菌后培養(yǎng)基pH下降0.1-0.2。第五十七頁，共七十二頁，2022年，8月28日（5）高壓蒸汽滅菌過程會增加冷凝水，降低培養(yǎng)基成分濃度。對于前三種不良影響，可采用低壓滅菌（如在0.056MPa、30min滅菌葡萄糖溶液），或?qū)⑴囵B(yǎng)基幾種成分分別滅菌，臨用前無菌混合（如磷酸鹽與Ca、Mg、Zn、Cu等陽性離子溶液）的方法，特殊情況時可采用間歇滅菌、過濾除菌（如維生素溶液）。工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)中常采用連續(xù)加壓滅菌法（135-140°C，5-15秒）和連續(xù)蒸煮法。第五十八頁，共七十二頁，2022年，8月28日三、實驗材料高壓滅菌器待滅菌的培養(yǎng)基、無菌水、已包好的培養(yǎng)皿、移液管、玻璃涂抹棒等及待滅菌空試管、錐形瓶等玻璃器皿。第五十九頁，共七十二頁，2022年，8月28日四、實驗內(nèi)容（一）滅菌操作1.向鍋內(nèi)加水打開滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加適量水。水量不足，滅菌鍋易蒸干。2.放入待滅菌物品將帶滅菌物品放入滅菌桶內(nèi)，物品不要放得太緊和緊靠鍋壁，以免影響蒸汽流通和冷凝水順壁流入滅菌物品。第六十頁，共七十二頁，2022年，8月28日3.蓋好鍋蓋將蓋上的軟管插入滅菌桶的槽內(nèi)，有利于罐內(nèi)冷空氣自下而上排出，然后加蓋，上下螺栓口對齊，采用對角方式均勻旋緊螺栓，使鍋密閉。第六十一頁，共七十二頁，2022年，8月28日4.排放鍋內(nèi)冷空氣及升溫滅菌打開放氣閥，加熱，自鍋內(nèi)開始產(chǎn)生蒸汽后3min再關(guān)緊放氣閥（或噴出氣體不形成水霧），此時蒸汽已將鍋內(nèi)的冷空氣由排氣孔排盡，控制熱源，維持所需壓力和溫度，并開始計時，一般培養(yǎng)基控制在0.1MPa滅菌20min；含糖等成分培養(yǎng)基控制在0.056MPa滅菌30min或0.07MPa滅菌20min，然后關(guān)閉熱源，停止加熱，壓力隨之逐漸降低。第六十二頁，共七十二頁，2022年，8月28日5.滅菌完畢降溫及后處理待壓力降至0時，慢慢打開放氣閥，開蓋，立即取出滅菌物品，但在壓力未完全降至0處前，不能打開鍋蓋，以免培養(yǎng)基沸騰將棉塞沖出；也不可用冷水沖淋滅菌鍋迫使溫度迅速下降。所滅物品開蓋后立即取出，以免凝結(jié)在鍋蓋和容器上的水滴弄濕包裝紙或落到被滅菌物品上，增加染菌率。斜面培養(yǎng)基自鍋內(nèi)取出后要趁熱擺成斜面，滅菌后的空培養(yǎng)皿、試管、移液管等需烘干或晾干。若連續(xù)使用高壓鍋，每次需補足水分，滅菌完畢，除去鍋內(nèi)剩余水分，保持滅菌鍋干燥。第六十三頁，共七十二頁，2022年，8月28日6、注意事項6.1滅菌前清洗：將物品徹底清洗干凈，物品洗滌后，應(yīng)干燥并及時包裝。包裝：包裝材料應(yīng)允許物品內(nèi)部空氣的排出和蒸汽的透入。物品捆扎不宜過緊，外用化學(xué)指示膠帶貼封，滅菌包每大包內(nèi)和難消毒部位的包內(nèi)放置化學(xué)指示物。第六十四頁，共七十二頁，2022年，8月28日裝載：下排氣滅菌器的裝載量不得超過柜室內(nèi)容量的80%；預(yù)真空滅菌器的裝載量不得超過柜室容積9