第2章 細(xì)胞工程 高二生物單元復(fù)習(xí) （人教版2019選擇性必修3）

第2章細(xì)胞工程基礎(chǔ)梳理重點(diǎn)難點(diǎn)考點(diǎn)一

植物細(xì)胞工程知識梳理一.細(xì)胞工程細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等多學(xué)科的原理和方法,通過細(xì)胞器、細(xì)胞或組織水平上的操作,有目的地獲得特定的細(xì)胞、組織、器官、個(gè)體或其產(chǎn)品的一門綜合性的生物工程原理和方法操作水平目的分類細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)細(xì)胞器、細(xì)胞或組織獲得特定的細(xì)胞、組織、器官、個(gè)體或其產(chǎn)品動物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程知識梳理二、植物細(xì)胞的全能性1.理論基礎(chǔ)：細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后，仍然具有產(chǎn)生完整生物體或分化成其他各種細(xì)胞的潛能，即細(xì)胞具有全能性2.原理：細(xì)胞內(nèi)含有本物種的全部遺傳信息3.全能性表達(dá)條件：具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu),處于離體狀態(tài),提供一定的營養(yǎng)、激素和其他適宜外界條件4.全能性高低②受精卵＞生殖細(xì)胞＞體細(xì)胞③植物細(xì)胞＞動物細(xì)胞①分化程度低的細(xì)胞>分化程度高的細(xì)胞（受精卵全能性最高）知識梳理三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)1.概念：將離體的植物器官、組織或細(xì)胞（外植體）等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)2.原理：植物細(xì)胞一般具有全能性3.過程：接種外植體誘導(dǎo)愈傷組織誘導(dǎo)生芽誘導(dǎo)生根移栽成活不需要光照需要光照脫分化再分化重點(diǎn)難點(diǎn)三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)3.過程：（1）外植體：用于植物組織培養(yǎng)的離體的植物器官、組織或細(xì)胞（2）脫分化：在一定的激素和營養(yǎng)等條件的誘導(dǎo)下,已經(jīng)分化的細(xì)胞經(jīng)過脫分化,失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能,轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過程（3）愈傷組織：不定形的薄壁組織團(tuán)塊（4）再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化出根或芽等器官的過程重點(diǎn)難點(diǎn)三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)4.實(shí)例——菊花的組織培養(yǎng)（1）操作流程

外植體消毒

酒精消毒30S無菌水清洗2~3次流水沖洗外植體次氯酸鈉溶液處理30min無菌水清洗2~3次接種

將外植體切成0.5-1CM長的小段將外植體1/3—1/2插入誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并做好標(biāo)記培養(yǎng)

置于18-22℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15-20d后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基長出芽再轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基上，進(jìn)一步誘導(dǎo)形成試管苗三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)4.實(shí)例——菊花的組織培養(yǎng)（1）操作流程

重點(diǎn)難點(diǎn)移栽

移栽前先打開封口膜或瓶蓋，讓試管在培養(yǎng)箱內(nèi)生長幾日。用流水清洗根部的消過毒后，將幼苗移植到培養(yǎng)基的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中，待其長狀后再移栽入土栽培

將幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花接種注意事項(xiàng)：誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基→誘導(dǎo)生芽培養(yǎng)基→誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基若先生根后面就不易生芽植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵（1）條件：離體,一定營養(yǎng)物質(zhì),激素（生長素、細(xì)胞分裂素）等。（2）培養(yǎng)基狀態(tài)：固體培養(yǎng)基（需再分化生根培養(yǎng)基及生芽培養(yǎng)基）。（3）體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)全能性的原因：基因的表達(dá)具有選擇性。（4）光照的應(yīng)用脫分化階段不需要給予光照,再分化階段需要給予光照,以利于葉綠素的形成。三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)4.實(shí)例——菊花的組織培養(yǎng)

知識梳理按照不同的順序使用這兩類激素,會得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長素,后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂,但細(xì)胞不分化先使用細(xì)胞分裂素,后使用生長素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高簡記：先“生”分裂不分化,后“生”分裂又分化,同“使”分化頻率高三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)4.實(shí)例——菊花的組織培養(yǎng)

知識梳理知識拓展生長素/細(xì)胞分裂素的值影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向生長素/細(xì)胞分裂素植物細(xì)胞的發(fā)育方向高有利于根的分化，抑制芽的形成低有利于芽的分化，抑制根的形成適中促進(jìn)愈傷組織的生長簡記為：“高”根，“低”芽，“中”愈傷三、植物組織培養(yǎng)技術(shù)4.實(shí)例——菊花的組織培養(yǎng)

重點(diǎn)難點(diǎn)四、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)1.概念：將不同來源的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培育成新植物體的技術(shù)2.過程：知識梳理植物細(xì)胞A、B原生質(zhì)體A、B融合的原生質(zhì)體雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株纖維素酶、果膠酶處理

除去細(xì)胞壁誘導(dǎo)融合物理法電融合法、離心法化學(xué)法聚乙二醇（PEG）融合高Ca2+—高Ph融合法再生出細(xì)胞壁脫分化四、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)3.原理：體細(xì)胞雜交利用了細(xì)胞膜的流動性,雜種細(xì)胞培育成雜種植株利用了植物細(xì)胞的全能性4.意義：打破生殖隔離,實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種,培育植物新品種5.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)和局限性（1）優(yōu)點(diǎn)：打破生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙（2）局限性：①技術(shù)復(fù)雜、操作繁瑣、工作量大②不一定按人們需要表達(dá)優(yōu)良性狀知識梳理

知識總結(jié)

知識梳理知識梳理五、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用

（一）植物繁殖的新途徑2.作物脫毒（1）選材部位：植物頂端分生區(qū)附近（如莖尖）（2）選材原因：病毒極少,甚至無病毒（3）操作過程：切取一定大小的莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng),再生的植株就有可能不帶病毒,從而獲得脫毒苗（二）作物新品種的培育1.單倍體育種（1）過程

知識梳理

知識梳理五、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用（三）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)2.細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)（1）概念：利用植物細(xì)胞培養(yǎng)來獲得目標(biāo)產(chǎn)物（2）植物細(xì)胞培養(yǎng)：在離體條件下對單個(gè)植物細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)（3）過程（4）優(yōu)點(diǎn)：不占用耕地,幾乎不受季節(jié)、天氣等的限制,對于社會、經(jīng)濟(jì)、環(huán)境保護(hù)具有重要意義（5）實(shí)例：紫草寧、紫杉醇、人參皂苷等的生產(chǎn)知識梳理外植體

愈傷組織

細(xì)胞懸液

細(xì)胞產(chǎn)物脫分化分散開培養(yǎng)提取脫毒苗≠抗毒苗（1）脫毒苗是選擇植物的分生區(qū)如莖尖（剛形成,病毒含量極少,甚至無病毒）進(jìn)行組織培養(yǎng)而獲得的,屬于細(xì)胞工程的范疇。脫毒苗只是體內(nèi)不含病毒,不能抵抗病毒的侵染。（2）抗毒苗是把抗某病毒的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中,并通過一定的方法培養(yǎng)形成的,屬于基因工程的范疇,但轉(zhuǎn)入抗病毒基因的植物細(xì)胞也需經(jīng)植物組織培養(yǎng)才能得到抗病毒的植株。易錯(cuò)提醒基礎(chǔ)梳理重點(diǎn)難點(diǎn)考點(diǎn)二

動物細(xì)胞工程知識梳理動物細(xì)胞工程的技術(shù)手段動物細(xì)胞培養(yǎng)（動物細(xì)胞工程基礎(chǔ)）動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞核移植知識梳理一、動物細(xì)胞培養(yǎng)1.概念：從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)2.原理：細(xì)胞增殖（有絲分裂）3.培養(yǎng)對象：動物組織的選擇幼齡動物或老齡動物幼齡個(gè)體的細(xì)胞分化程度低、分裂能力強(qiáng)，易培養(yǎng)4.動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：（1）營養(yǎng)（2）無菌、無毒的環(huán)境（3）溫度、PH和滲透壓（4）氣體環(huán)境動物體組

織單個(gè)細(xì)胞取出分散適宜條件細(xì)胞生長和增殖一、動物細(xì)胞培養(yǎng)4.動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：（1）營養(yǎng)①成分：將細(xì)胞所需的上述營養(yǎng)物質(zhì)按其種類和所需數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基由于人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此，在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入血清和血漿等一些天然成分培養(yǎng)細(xì)胞動物時(shí)一般使用液體培養(yǎng)基，也稱培養(yǎng)液（2）無菌、無毒的環(huán)境a.需要對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理b.在無菌環(huán)境下操作c.培養(yǎng)液還需要定期更換（以便清除代謝物，防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害）d.如果要防止培養(yǎng)過程中微生物的污染，還可以在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素知識梳理一、動物細(xì)胞培養(yǎng)4.動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：(3)溫度、ph和滲透壓（一般與動物體內(nèi)相同）①適宜的溫度：哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以36.5±0.5℃為宜②適宜的pH：多數(shù)動物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2~7.4③適宜的滲透壓：維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能（4）氣體環(huán)境①氣體的組成及作用知識梳理95%空氣5%CO2②培養(yǎng)裝置:培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶CO2培養(yǎng)箱置于維持培養(yǎng)液的pH細(xì)胞代謝所必需重點(diǎn)難點(diǎn)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)5.培養(yǎng)基本過程取動物組織制成細(xì)胞懸液一般取材于動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，原因：細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，容易培養(yǎng)。用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，去掉組織間蛋白，將組織分散成單個(gè)細(xì)胞機(jī)械方法原因：a.從動物體取出的成塊組織中，細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖；b.能使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，更易進(jìn)行物質(zhì)交換。保證細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)及有害產(chǎn)物的及時(shí)排出。重點(diǎn)難點(diǎn)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)5.培養(yǎng)基本過程取新鮮的動物組織單個(gè)細(xì)胞①機(jī)械的方法②胰蛋白酶或膠原蛋白酶等處理+培養(yǎng)液細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)進(jìn)行原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)：分瓶之前的細(xì)胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。體外培養(yǎng)的動物動物可以分為兩大類①懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖②需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖（這類細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁）放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞：因細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏而分裂受阻。貼壁細(xì)胞：除受上述因素的影響外，還會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象。（當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會停止分裂增殖。）重點(diǎn)難點(diǎn)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)5.培養(yǎng)基本過程傳代培養(yǎng)：分瓶之后的細(xì)胞培養(yǎng)懸浮的細(xì)胞：直接用離心法收集貼壁細(xì)胞：用胰蛋白酶等處理，再用離心法收集放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)重點(diǎn)難點(diǎn)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)5.培養(yǎng)基本過程二、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用

動物和人體內(nèi)仍保留著少數(shù)具有分裂和分化能力的細(xì)胞，這些細(xì)胞叫做干細(xì)胞干細(xì)胞存在早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中類型胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）成體干細(xì)胞存在于早期胚胎中，具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個(gè)體的潛能

成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞，包括造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞及精原干細(xì)胞，具有組織特異性，只能分化成特定的的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力應(yīng)用：ES細(xì)胞可以在體外分化成心肌細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞和造血干細(xì)胞等細(xì)胞應(yīng)用：與組織、器官的發(fā)育、再生和修復(fù)等密切相關(guān)知識梳理誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）科學(xué)家通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞，獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞，將它稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（簡稱iPS細(xì)胞），之后用iPS細(xì)胞治療了小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血。2007年，科學(xué)家通過類似的方法成功誘導(dǎo)出人類的iPS細(xì)胞二、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用知識梳理科學(xué)家利用載體將特定基因?qū)爰?xì)胞中表達(dá)，體細(xì)胞可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)變?yōu)閕PS細(xì)胞應(yīng)用：IPS細(xì)胞治療阿爾茲海默癥和治療心血管疾病優(yōu)點(diǎn)：①誘導(dǎo)過程無須破壞胚胎②iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)二、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用知識梳理缺點(diǎn)：干細(xì)胞應(yīng)用面臨的問題存在著導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致iPS細(xì)胞無法在短期內(nèi)進(jìn)入臨床應(yīng)用三、動物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：使兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)

細(xì)胞的技術(shù)

2.原理：細(xì)胞膜的流動性3.結(jié)果：融合形成雜交細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多

個(gè)細(xì)胞的遺傳信息4.誘導(dǎo)融合的方法知識梳理注：植物體細(xì)胞雜交得到是雜種細(xì)胞物理方法：電融合法、

離心法化學(xué)方法：聚乙二醇融合法（PEG融合法）生物方法：滅活病毒誘導(dǎo)法（特有）P48相關(guān)信息病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合

三、動物細(xì)胞融合技術(shù)5.意義①突破了有性生殖的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能②為制造單克隆抗體開辟了新途徑拓展知識知識梳理6.滅活病毒應(yīng)用原理：滅活：用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)7.動物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志：細(xì)胞核的融合8.應(yīng)用：單克隆抗體及其應(yīng)用重點(diǎn)難點(diǎn)四、單克隆抗體及其應(yīng)用1.早期獲得抗體的方法反復(fù)注射動物體內(nèi)抗原多種漿細(xì)胞多種抗體（血清）產(chǎn)量低，純度低，制備的抗體特異性差、反應(yīng)不靈敏每一個(gè)漿細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體多達(dá)百萬種缺點(diǎn)2.單克隆抗體制備思路：把一種B淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合，所得到的融合細(xì)胞就可能大量增殖的，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體注射特定蛋白免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)單克隆抗體誘導(dǎo)融合動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)篩選一篩選二多次篩選特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備細(xì)胞增殖細(xì)胞膜具有流動性既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體四、單克隆抗體及其應(yīng)用2.制備過程重點(diǎn)難點(diǎn)3.單克隆抗體制備過程中兩次篩選的比較項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種融合細(xì)胞，還有未融合的細(xì)胞等由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選目的篩選出雜交瘤細(xì)胞

篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長

用96孔板培養(yǎng)，在每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞重點(diǎn)難點(diǎn)重點(diǎn)難點(diǎn)（1）能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異；（2）與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合；（3）可以大量制備（1）廣泛用作診斷試劑重點(diǎn)難點(diǎn)4.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)5.單克隆抗體的應(yīng)用（2）運(yùn)載藥物：如抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤(單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)優(yōu)點(diǎn)：位置準(zhǔn)確、療效高、副作用小抗體藥物接頭細(xì)胞凋亡利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病（3）直接用于治療疾病實(shí)例：利妥昔單抗(美羅華)是一種針對CD20抗原的人鼠嵌合型單克隆抗體，是第一個(gè)被FDA批準(zhǔn)用于臨床治療的單抗。進(jìn)入人體后能通過介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞毒性作用、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用和抗體與CD20分子結(jié)合引起的直接效應(yīng)，抑制細(xì)胞生長，改變細(xì)胞周期以及凋亡等方式殺死淋巴瘤細(xì)胞在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，單克隆抗體藥物占有非常重要的地位重點(diǎn)難點(diǎn)5.單克隆抗體的應(yīng)用抗體藥物接頭ADC被細(xì)胞吞噬釋放藥物溶酶體裂解細(xì)胞凋亡五.動物細(xì)胞核移植技術(shù)知識梳理1.概念：動物細(xì)胞核移植技術(shù)是將動物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個(gè)體的技術(shù)2.原理：動物細(xì)胞核的全能性整個(gè)細(xì)胞隨分化程度的提高，分化潛能逐漸減弱，全能性受到限制3.分類①胚胎細(xì)胞核移植：分化程度低，表現(xiàn)全能性容易②體細(xì)胞核移植：分化程度高，表現(xiàn)全能性困難4.生殖方式：無性生殖因此動物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植從卵巢中采集卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)到MⅡ期去核（核：紡錘體—染色體復(fù)合物）去核卵母細(xì)胞從供體取體細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)供體細(xì)胞重構(gòu)胚注入①注入的是供體細(xì)胞的細(xì)胞核：克隆動物的核外DNA來自卵母細(xì)胞②注入的是供體細(xì)胞：克隆動物的核外DNA來自供體細(xì)胞和卵母細(xì)胞電融合法用物理或化學(xué)方法（如電刺激、Ca2+載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等）激活重構(gòu)胚胚胎移植受體母牛（代孕母牛）小牛五.動物細(xì)胞核移植技術(shù)——體細(xì)胞核移植知識梳理6.應(yīng)用前景①畜牧生產(chǎn)方面：加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育②醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域：轉(zhuǎn)基因克隆動物可以作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；轉(zhuǎn)基因克隆動物的細(xì)胞、組織和器官可以用于異種移植；人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化，形成相應(yīng)的細(xì)胞、組織、器官后，可用于組織器官的移植③了解胚胎發(fā)育及衰老過程④保護(hù)保護(hù)瀕危物種，增加瀕危動物的存活數(shù)量⑤用克隆動物做疾病模型，使人們更好地追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病7.存在的問題①成功率非常低，各個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)有待進(jìn)一步改進(jìn)②絕大多數(shù)克隆動物存在健康問題，表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷五.動物細(xì)胞核移植技術(shù)知識梳理基礎(chǔ)梳理重點(diǎn)難點(diǎn)考點(diǎn)三

胚胎工程知識梳理一.胚胎工程1.概念：對生殖細(xì)胞、受精卵或早期胚胎細(xì)胞進(jìn)行多種顯微操作和處理，然后將獲得的胚胎移植到雌性動物體內(nèi)生產(chǎn)后代，以滿足人類的各種需求操作對象動物生殖細(xì)胞、受精卵、早期胚胎細(xì)胞技術(shù)種類體外受精、胚胎移植、胚胎分割工程實(shí)質(zhì)在體外條件下，對動物自然受精和早期胚胎發(fā)育條件進(jìn)行的模擬操作理論基礎(chǔ)哺乳動物受精和早期胚胎發(fā)育的規(guī)律知識梳理二.受精1.概念：指精子和卵子結(jié)合形成合子（即受精卵）的過程2.場所：輸卵管3.過程：受精前的準(zhǔn)備階段受精階段準(zhǔn)備階段1：精子獲能（在雌性動物生殖道）準(zhǔn)備階段2：卵子的準(zhǔn)備（達(dá)到MⅡ期才具備與精子受精的能力）精子穿越卵細(xì)胞膜外的結(jié)構(gòu)，如透明帶精子接觸卵細(xì)胞膜透明帶反應(yīng)卵細(xì)胞膜反應(yīng)形成雄原核、雌原核，釋放第二極體精子入卵雌、雄原核靠近核膜消失，形成受精卵受精結(jié)束，卵裂開始二.受精知識梳理（1）精子如何穿越卵細(xì)胞膜外結(jié)構(gòu)釋放多種酶，溶解這些結(jié)構(gòu)（2）防止多精入卵的兩個(gè)屏障透明帶反應(yīng)、卵細(xì)胞膜反應(yīng)（3）透明帶反應(yīng)發(fā)生時(shí)間精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間（4）卵細(xì)胞膜反應(yīng)發(fā)生時(shí)間精子入卵后（7）雄原核的形成精子入卵后，尾部脫離，原有的核膜破裂并形成一個(gè)新的核膜，最后形成一個(gè)比原來精子的核還大的核，叫做雄原核；（8）雌原核的形成精子入卵后,被激活的卵子完成減數(shù)分裂Ⅱ，排出第二極體后，形成雌原核(9)受精的標(biāo)志:觀察到兩個(gè)極體（透明帶和卵細(xì)胞膜之間）;觀察到雌、雄原核二.受精知識梳理二.胚胎早期發(fā)育知識梳理受精卵桑葚胚囊胚原腸胚卵裂分裂方式：有絲分裂特點(diǎn)：細(xì)胞數(shù)目增多，但胚胎的總體既不增加該時(shí)期細(xì)胞屬于全能細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞團(tuán)：發(fā)育為胎兒的各種組織滋養(yǎng)層細(xì)胞：發(fā)育為胎兒的胎膜和胎盤囊胚腔：內(nèi)含液體出現(xiàn)了三個(gè)胚層孵化：囊胚從透明帶中伸展出來三.體外受精1.試管動物含義：是指通過人工操作使卵子在體外受精，經(jīng)培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再進(jìn)行移植產(chǎn)生的個(gè)體知識梳理個(gè)體精子卵子受精卵體外受精早期胚胎子宮胚胎移植早期胚胎發(fā)育2.意義：①提高動物復(fù)制能力的有效措施②可以為胚胎移植提供可用的胚胎三.體外受精3.體外受精過程：知識梳理卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)MII成熟卵母細(xì)胞精子