雜環(huán)類藥物的分析

第八章雜環(huán)類藥物的分析第一節(jié)吡啶類藥物第二節(jié)喹啉類藥物第三節(jié)托烷類藥物第四節(jié)吩噻嗪類藥物

第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物第六節(jié)含量測定返回主目錄基本要求練習與思考

一、基本結構與化學性質（一）典型藥物的結構

硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）第三節(jié)托烷類藥物（二）主要化學性質1.水解性本類藥物分子結構中具有酯的結構，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。2.堿性

阿托品和東莨菪堿的結構中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。3.旋光性氫溴酸東莨菪堿結構中含有不對稱碳原子，呈左旋體，比旋度為-24ο至-27ο，而阿托品結構中雖然也含有不對稱碳原子，但因外消旋化而為消旋體，無旋光性。利用此性質可區(qū)別阿托品與東莨菪堿。

4.生物堿沉淀反應本類藥物具有堿性，可與生物堿沉淀劑生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇試液黃色沉淀東莨菪堿+氯化汞醇試液白色沉淀生物堿水解莨菪酸發(fā)煙硝酸三硝基衍生物(黃色)KOH（C2H5OH）深紫色的醌型產(chǎn)物5.Vitali反應《中國藥典》2015版二、鑒別試驗1、紅外分光光度法2、Vitali反應3、硫酸鹽（或氫溴酸鹽）1、紅外吸收圖譜應與對照圖譜一致2、顯托烷類鑒別反應3、顯硫酸鹽（硫酸阿托品）或氫溴酸鹽（氫溴酸山莨菪堿鹽）的鑒別反應三、雜質檢查（二）檢查方法（一）檢查項目按照中國藥典要求檢查酸度、其他生物堿、干燥失重等中國藥典（2015版）對含量測定有相關規(guī)定

如：原料非水滴定法制劑紫外-可見分光光度法（波長420nm）四、含量測定第四節(jié)吩噻嗪類藥物一、基本結構與化學性質（一）結構特點與典型藥物奮乃靜癸氟奮乃靜鹽酸氟奮乃靜鹽酸三氟拉嗪（二）主要化學性質1.紫外和紅外吸收光譜特征硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л系統(tǒng)

三個最大吸收峰別在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮雜蒽母核的硫為二價，易氧化為砜和亞砜，其紫外吸收光譜有明顯不同，它們具有四個峰值。另外，取代基R和R’的不同，則可產(chǎn)生不同的紅外光譜2.還原性二價硫易氧化，遇不同氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。

3.與金屬離子絡合呈色

本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成配位化合物，其氧化產(chǎn)物則無此反應。此性質可用于鑒別和含量測定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。4.弱堿性母核上N原子的堿性極弱，側鏈N原子的堿性較強，易于酸成鹽，可用非水滴定法測定含量。

（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

本類藥物可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實例如下：

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm鹽酸氯丙嗪鹽酸（9→1000）52540.46915306——鹽酸異丙嗪鹽酸（0.01mol/L）6249—883~937奮乃靜無水乙醇72580.65—癸氟奮乃靜乙醇10260——鹽酸氟奮乃靜鹽酸（9→1000）10255—553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸（1→20）10256—630鹽酸硫利達嗪乙醇8264與315——二、鑒別試驗

（二）顯色反應

1.與氧化劑的顯色反應

藥物名稱硫酸硝酸過氧化氫

鹽酸氯丙嗪顯紅色,漸變淡黃色—鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色,放置生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深溶液由紅色轉變?yōu)槌赛S色奮乃靜——顯深紅色;放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色,溫熱——后變成紅褐色鹽酸三氟拉嗪—生成微帶紅色的白色沉淀;放—置后,紅色變深,加熱后變黃色

鹽酸硫利達嗪顯藍色—

—

2.與鈀離子絡合顯色反應

利用分子結構中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡合形成有色絡合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡合物。（一）檢查項目

鹽酸氯丙嗪和鹽酸異丙嗪的檢查項目基本相同三、雜質檢查（二）檢查方法因雜質對照不易獲得，故采用自身稀釋對照的HPLC注意事項

避光操作，現(xiàn)用現(xiàn)配四、含量測定返回原料藥制劑鹽酸異丙嗪非水滴定法HPLC鹽酸氯丙嗪非水滴定法紫外-可見分光光度法第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結構特征與典型藥物NNClH3CO地西泮第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結構特征與典型藥物NNClH3CO地西泮123456789阿普唑侖奧沙西泮氯氮卓NNNCH3OClH一、主要性質1、弱堿性七元雜環(huán)上的N原子具有強堿性，但苯基的取代使堿性降低。因此采用非水滴定法測定含量。2、水解性七元雜環(huán)上的N原子具有強堿性，但在強酸性溶液中可水解。一、主要性質3、紫外吸收特征2個苯環(huán)、1個七元雜環(huán)可形成較長的共軛體系，因而有紫外吸收，可用于鑒別和含量測定?？偨Y弱堿性（雜環(huán)上具有N原子）水解性(強酸條件下N-C=O)紫外吸收特征（共軛體系）二、鑒別試驗中國藥典規(guī)定方法1、硫酸-熒光反應（溶于硫酸，紫外光下顯黃綠色）2、紫外-可見分光光度法（共軛體系）3、紅外分光光度法4、有機氯化物（7位上接了CL原子）1.硫酸-熒光反應

本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：

地西泮黃綠色

黃色氯氮卓黃色

紫色艾司唑侖+H2SO4亮綠色+稀硫酸天藍色硝西泮淡藍色

藍綠色奧沙西泮淡黃綠色補充

氯化銅焰色反應

分子結構中含有氯元素的藥物，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出CuCl2綠色火焰。此反應藥典未用于本類藥物鑒別。三、含量測定原料藥非水滴定法制劑HPLC降解產(chǎn)物的檢查

地西泮注射液列入此項檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質。采用HPLC法進行檢查。返回小知識含量測定(一)非水溶液滴定法應用實例

1.游離弱堿性藥物測定

異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等?；谶@些藥物分子結構中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測定其含量。由于這些藥物的堿性強弱不同，測定時所采用溶劑、指示劑及其指示終點的方法也不盡相同。

藥物名稱取樣量(g)溶劑指示劑終點顏色

尼可剎米0.15冰醋酸10ml結晶紫藍綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結晶紫藍色（二）鈀離子比色法優(yōu)點：鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測定。max~500nm吩噻嗪類藥物

+Pd2+pH2±0.1紅色絡合物在max處測定A，以對照法定量（一）直接分光光度法

供試品不需提取分離，溶于適當?shù)娜軇┲屑纯蛇M行含量測定。

1.奧沙西泮原料的測定在229nm，采用標準對照法測定。

2.鹽酸異丙嗪片的測定在249nm，采用E1cm1%＝910測定。

3.鹽酸異丙嗪注射液的測定

測定波長的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，可還原異丙嗪紅色氧化產(chǎn)物，從而防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長249nm處有吸收，干擾注測定。因此選用299nm波長測定鹽酸異丙嗪注射液的含量時，維生素C在此波長處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。三、紫外分光光度法(二)萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪氨水堿化氯丙嗪乙醚提取乙醚層鹽酸提取鹽酸氯丙嗪max254±1nm處測定A，E1cm1%＝915（三）萃取-雙波長分光光度法

本法是USP（24）收載的方法，用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定，主要用來校正樣品中氧化物對測定的干擾。測定原理利用氯丙嗪的最λmax為254nm，其氧化物在此波長也有吸收，同時在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波長無吸收。因此，可由兩波長處測得△A計算氯丙嗪含量。四、氣相色譜法（一）硫酸阿托品片的含量測定

USP(24)采用的方法。以后馬托品作為內標,采用標準對照法。

測定方法

(1)內標溶液的制備：(2)供試品溶液與對照品溶液的制備：(3)色譜系統(tǒng)：色譜柱為1.8m×2mm的玻璃柱；擔體為與碳酸鈉混合于900℃熔融后，經(jīng)酸和堿處理的硅烷化藻土；固定相為3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；載氣為氮氣，流速為25ml/min；檢測器為氫火焰離子化檢測器。

(4)系統(tǒng)適用性試驗：取對照品溶液1μl，進樣6次，所得的對照品和內標峰面積之比的RSD不大于2.0%；對照品峰和內標峰的分辨率Rs＜4.0；T＜2.0。

(5)測定方法：取供試液和對照液各進樣1μl，記錄各峰面積，用下式計算所取片粉中硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重量:[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重(mg)=(694.85/676.83)(W/10)(Ru/Rs)（二）人血漿中硝苯地平的氣相色譜法測定及藥代動力學研究

(一)反相高效液相色譜法

1.地西泮注射液的反相HPLC法

地西泮注射液曾用萃取后分光光度法測定含量，因萃取不完全，及有關物質和分解產(chǎn)物等對測定有干擾，故中國藥典自1995版改用HPLC法。此法操作簡便，可消除干擾。注射液中地西泮的平均回收率為99.4%，相對標準偏差為0.8%。

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：ODSC18；流動相為甲醇-水(70:30)；檢測波長為254nm。n＞1500，R＞1.5。

(2)內標溶液的制備：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。五、高效液相色譜法

(3)測定方法：取地西泮對照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內標溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。吸取5μl～10μl進樣，記錄色譜圖；另取本品適量(約相當于地西泮5mg），同法測定，按內標法以峰面積計算，即得。2.高效液相色譜法測定硫酸阿托品片的含量

色譜條件:色譜柱為SpherisorbC185μm流動相為0.025mol/L磷酸(三乙胺調pH為3.0)-乙腈(80:20)；柱溫為30℃；檢測波長為215nm；n=5880。

線性關系：精取硫酸阿托品適量，用流動相制備成22.4、44.8、67.2、89.6、112μg/ml溶液，進樣3次，每次20μl，所得峰面積與濃度繪制標準曲線，呈良好的線性關系，其相關系數(shù)r=0.9995，其線性范圍為22.4μg/ml～112μg/ml。

回收率試驗：

樣品測定：

3.高效液相色譜法測定血漿中地西泮濃度

本法以艾司唑侖為內標，用氯仿-異丙醇混合溶劑提取，氮氣流吹干，用甲醇溶解后進樣，測定了剖腹產(chǎn)產(chǎn)婦及胎兒血漿中地西泮濃度。其回收率在92.86%～98.77%之間；日內與日間精密度（RSD）分別為1.61%～3.00%和2.18%～5.18%。該法具有