臨床免疫學(xué)檢驗：18細胞因子檢測

第十四章細胞因子檢測

P150一.細胞因子檢測應(yīng)注意的問題1.欲了解機體免疫功能，應(yīng)檢測多項細胞因子，如細胞免疫應(yīng)測IL-2、TFN-γ等2.局部取標本：細胞因子由局部細胞產(chǎn)生，在血液中濃度極低，最好取局部體液或細胞3.動態(tài)檢測比較，如疾病的復(fù)發(fā)期、緩解期、恢復(fù)期4.同一細胞因子選用多種方法聯(lián)合檢測，各種方法檢測結(jié)果不一定平衡二.檢測方法（P161）生物學(xué)方法免疫學(xué)方法分子生物學(xué)方法（一）生物學(xué)方法原理：根據(jù)不同細胞因子生物學(xué)活性（功能)不同而設(shè)計的方法如IL-2可促進T淋巴細胞生長；TNF可殺腫瘤細胞；CSF可刺激造血細胞形成集落；IFN可保護細胞免受病毒攻擊。具體方法：細胞增殖法靶細胞殺傷法誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法細胞病變抑制法1.細胞增殖法原理：一些細胞因子可專一刺激某些細胞增殖，而且細胞增殖的程度與這些細胞因子活性呈正相關(guān)。如：IL-2——T細胞，IL-3——肥大細胞，IL-6——漿細胞。這些只依賴某種細胞因子才能生長的細胞系稱為依賴細胞株。

如人IL-2對鼠T細胞有生長支持作用一定數(shù)量鼠T細胞+每孔分別加不同劑量的IL-2培養(yǎng)根據(jù)鼠T細胞生長情況，制作IL-2的標準曲線（數(shù)孔）2.靶細胞殺傷法

有的細胞因子能殺傷靶細胞（腫瘤細胞），利用同位素釋放法或染色法等可判定其殺傷率3.細胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法某些細胞因子可刺激特定的細胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，通過測定其誘生產(chǎn)物來反映細胞因子活性如IL-2、IL-3可誘導(dǎo)骨髓產(chǎn)生組胺；IL-6誘導(dǎo)肝細胞產(chǎn)生-抗糜蛋白酶；4.細胞病變抑制法干擾素可阻止病毒侵害細胞，可用相關(guān)試驗來檢測驗干擾素含量。血凝素生成抑制試驗：

小鼠腦脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌A549細胞，該病毒在生長過程中可產(chǎn)生血凝素，使人O型RBC凝集

試驗管：A549細胞（已長好）加一定量干擾素培養(yǎng)一定時間加病毒培養(yǎng)反復(fù)凍融稀釋不同倍數(shù)加O型血球觀察凝集情況

陽性對照加標準IFN；陰性對照不加IFN。

在IFN標準劑量曲線上查出IFN量（二）免疫學(xué)檢測法

細胞因子為蛋白質(zhì)或多肽，具有較強的免疫原性，可用其特異性抗體來進行檢測。常用的檢測方法是ELISA、流式細胞分析法、酶聯(lián)免疫斑點試驗。定量測定（三）分子生物學(xué)方法利用細胞因子基因探針檢測特定的細胞因子mRNA表達的技術(shù)常用方法：斑點雜交、逆轉(zhuǎn)錄PCR、Northernblot、細胞或組織原位雜交等試劑：核酸探針——一段用放射性同位素或其他標記物（生物素、地高辛等）標記的一段DNA片段，單鏈DNA、RNA片段，它可與目的基因mRNA互補此法靈敏、快速三種方法優(yōu)缺點比較

優(yōu)點缺點生物學(xué)敏感、測功能長期培養(yǎng)依賴細胞株、費時步驟煩瑣、影響因素多免疫學(xué)簡單迅速只檢測量，不代表活性，敏感重復(fù)好度低（較生物學(xué)法低10~100倍）分子生