第03章酶催化作用機(jī)制

第三章酶催化作用機(jī)制

一、酶的作用機(jī)制相關(guān)學(xué)說二、酶反應(yīng)的高效催化機(jī)制三、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)一、酶的作用機(jī)制相關(guān)學(xué)說關(guān)于酶的作用機(jī)制有多種學(xué)說。這些學(xué)說有一些共同的特點(diǎn)：1.酶的活性中心是酶表現(xiàn)專一性的基礎(chǔ)，不僅要求結(jié)合基團(tuán)與催化基團(tuán)的存在，而且要求他們有特定的構(gòu)象分布；2.酶要表現(xiàn)作用必須通過它和底物結(jié)合。(一)酶的剛性與“瑣和鑰匙”學(xué)說

1890年，德國化學(xué)家費(fèi)舍爾（Fisher）提出了著名的“瑣和鑰匙”學(xué)說。此學(xué)說認(rèn)為：酶與底物都是剛性的，二者結(jié)構(gòu)間天然存在互補(bǔ)的關(guān)系，就像鎖和鑰匙一樣。此學(xué)說較好的解釋了酶對(duì)底物選擇的專一性，但不能解釋酶能夠高效催化反應(yīng)的原因。1902年，亨利(Henri)中間產(chǎn)物學(xué)說。即：E+S＝ES＝E+P過渡態(tài)中間產(chǎn)物的形成使反應(yīng)的活化能大幅降低。

(二)酶的柔性與“誘導(dǎo)契合”學(xué)說1958年，考施蘭德（Koshland）首先認(rèn)識(shí)到底物的存在可能會(huì)誘導(dǎo)酶活性中心發(fā)生一定程度的構(gòu)象變化。提出了著名的“誘導(dǎo)契合”學(xué)說。此學(xué)說認(rèn)為：酶分子的構(gòu)象不是一成不變的，而是在底物分子臨近酶分子時(shí)，酶分子受到底物的誘導(dǎo)，其構(gòu)象會(huì)發(fā)生某些變化，使之有利于與底物結(jié)合。二.酶作用高效率的機(jī)理鄰近效應(yīng)和定向效應(yīng)構(gòu)象變化效應(yīng)酸堿催化機(jī)制共價(jià)催化機(jī)制金屬離子的催化活性中心的低介電性——微環(huán)境效應(yīng)

協(xié)同催化鄰近效應(yīng)是指底物結(jié)合于很小體積的活性中心后，使活性中心的底物濃度得以極大的提高，并同時(shí)使反應(yīng)基團(tuán)之間互相靠近，提高了反應(yīng)速度。定向效應(yīng)(orientationeffect)是指底物的反應(yīng)基團(tuán)與催化基團(tuán)之間或底物的反應(yīng)基團(tuán)之間正確地取向所產(chǎn)生的效應(yīng)。（一）鄰近效應(yīng)和定向效應(yīng)鄰近和定向效應(yīng)的作用：(1)由于酶與底物的趨近與定向效應(yīng)，底物分子在酶活性中心附近的濃度升高，而使反應(yīng)速度加快。(2)由于酶與底物之間的趨近和定向效應(yīng)，酶活性中心上的基團(tuán)對(duì)底物分子具有軌道導(dǎo)向作用，因而減少反應(yīng)所需的活化能。(3)由于酶與底物的趨近和定向效應(yīng)，生成中間產(chǎn)物，可使分子間反應(yīng)變成分子內(nèi)反應(yīng)，從而提高反應(yīng)速度。(4)酶與底物的趨近和定向效應(yīng)生成中間產(chǎn)物ES，經(jīng)測(cè)定ES的壽命為10-7～10-4s，而兩個(gè)分子隨機(jī)碰撞而結(jié)合的平均壽命為10-13s，前者是后者的106～109倍，使酶催化反應(yīng)的幾率顯著增加，反應(yīng)效率更高。這種作用稱為底物的固定作用(substrateanchoring)。（二）底物分子形變或扭曲當(dāng)酶分子與底物分子互相接近時(shí)，由于兩者的相互作用，酶分子和底物都會(huì)發(fā)生構(gòu)象變化，從而有利于酶與底物的結(jié)合，這種作用稱為構(gòu)象變化效應(yīng)。1.底物誘導(dǎo)酶分子構(gòu)象的改變2.酶分子誘導(dǎo)底物構(gòu)象的改變1.底物誘導(dǎo)酶分子構(gòu)象的改變1958年，柯施蘭德提出誘導(dǎo)契合學(xué)說，他認(rèn)為酶分子的構(gòu)象不是一成不變的，而是在底物分子臨近酶分子時(shí)，酶分子受到底物的誘導(dǎo)，其構(gòu)象會(huì)發(fā)生某些變化，使之有利于與底物結(jié)合。2.酶分子誘導(dǎo)底物構(gòu)象的改變

當(dāng)酶分子鄰近底物時(shí)，底物為了能和酶的活性中心更好的結(jié)合，在酶分子的誘導(dǎo)下，產(chǎn)生各種類型的扭曲變形和構(gòu)象變化，更近似過渡態(tài)結(jié)構(gòu)，使反應(yīng)所需的活化能大大降低，因而加速反應(yīng)的進(jìn)行。(三)酸堿催化機(jī)制

酶的催化作用是酶和底物分子之間通過質(zhì)子（H+）傳遞作用，即酸和堿的相互轉(zhuǎn)變，而降低反應(yīng)所需的活化能，使反應(yīng)加速進(jìn)行。這種催化理論稱為酸堿催化機(jī)制。酶蛋白中的酸堿催化基團(tuán)是由氨基酸殘基上的側(cè)鏈提供的，酸堿催化基團(tuán)中，以咪唑基最為常見。(四)共價(jià)催化機(jī)制

在酶催化過程中，首先酶與底物形成一種中間復(fù)合物。這種中間復(fù)合物是由于酶的某些基團(tuán)攻擊底物的某些特定基團(tuán)而形成的共價(jià)中間產(chǎn)物。這種催化理論稱為共價(jià)催化機(jī)制。共價(jià)催化可分為親核催化和親電催化兩類。

（五）金屬離子的催化作為輔基或激活劑調(diào)節(jié)氧化還原反應(yīng)穩(wěn)定或屏蔽電荷傳遞電子(六)活性中心的低介電性

——微環(huán)境效應(yīng)

微環(huán)境效應(yīng)的概念：微環(huán)境是指酶的活性中心上的催化基團(tuán)所處的一種特殊的疏水反應(yīng)環(huán)境。由于酶分子活性中心的催化基團(tuán)處于特殊的疏水反應(yīng)環(huán)境影響與底物的結(jié)合，并影響催化基團(tuán)的解離，使反應(yīng)加速進(jìn)行，這種作用稱為微環(huán)境效應(yīng)。許多有機(jī)化學(xué)反應(yīng)會(huì)受到其溶劑環(huán)境的影響。例如，疊氮鹽與對(duì)硝基氟苯的反應(yīng)在二甲基亞砜中進(jìn)行時(shí)的速度比在水中進(jìn)行時(shí)快12000倍。通過X射線衍射研究，發(fā)現(xiàn)許多酶分子的活性中心往往有一個(gè)與水溶液有顯著不同的環(huán)境。如胰凝乳蛋白酶和溶菌酶。（七）協(xié)同催化某一酶的催化中并不只有一種效應(yīng)，而往往是多種效應(yīng)共同存在，這些效應(yīng)協(xié)同作用。三、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)概念酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)是研究酶促反應(yīng)速度以及影響酶促反應(yīng)速度的各種因素，并加以定量的闡述的一門科學(xué)。影響因素包括有底物濃度、酶濃度、pH、溫度、抑制劑、激活劑等?！芯恳环N因素的影響時(shí)，其余各因素均恒定。在其他因素不變的情況下，底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響呈矩形雙曲線關(guān)系。(一)底物濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響當(dāng)?shù)孜餄舛容^低時(shí)反應(yīng)速度與底物濃度成正比。[S]VVmax隨著底物濃度的增高反應(yīng)速度不再成正比例加速。[S]VVmax當(dāng)?shù)孜餄舛雀哌_(dá)一定程度反應(yīng)速度不再增加，達(dá)最大速度，說明酶已經(jīng)被底物所飽和。[S]VVmax1.

米氏方程1913年，米徹利斯(Michaelis)和曼吞（Menton)在前人研究的基礎(chǔ)上，推導(dǎo)出著名的米氏方程：

v——反應(yīng)速度；S——底物濃度；vm——最大反應(yīng)速度；Km——米氏常數(shù)，為酶催化反應(yīng)速度等于最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度。中間產(chǎn)物學(xué)說中間產(chǎn)物酶促反應(yīng)速度與底物濃度的關(guān)系，可以用中間產(chǎn)物學(xué)說加以解釋。酶促反應(yīng)模式——中間產(chǎn)物學(xué)說E+S

k1k2k3ESE+P米－曼氏方程式推導(dǎo)基于兩個(gè)假設(shè)：E與S形成ES復(fù)合物的反應(yīng)是快速平衡反應(yīng)，而ES分解為E及P的反應(yīng)為慢反應(yīng)，反應(yīng)速度取決于慢反應(yīng)即

V＝k3[ES]。(1)S的總濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于E的總濃度，因此在反應(yīng)的初始階段，S的濃度可認(rèn)為不變即[S]＝[St]。（t代表初始）推導(dǎo)過程穩(wěn)態(tài)：是指ES的生成速度與分解速度相等，即[ES]恒定。K1([Et]－[ES])[S]＝K2[ES]+K3[ES]K2+K3＝Km

（米氏常數(shù)）K1令：則(2)變?yōu)?([Et]－[ES])[S]＝Km[ES](2)＝([Et]－[ES])[S]K2+K3[ES]K1整理得：代表中間產(chǎn)物的穩(wěn)定性當(dāng)?shù)孜餄舛群芨?，將酶的活性中心全部飽和時(shí)，即[Et]＝[ES]，反應(yīng)達(dá)最大速度Vmax＝K3[ES]＝K3[Et](5)[ES]＝───[Et][S]Km+[S](3)整理得:將(5)代入(4)得米氏方程式：Vmax[S]Km+[S]V＝────將(3)代入(1)得K3[Et][S]Km+[S](4)V＝────當(dāng)反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)（1）

Km值的數(shù)值∴Km值等于酶促反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度，單位是mol/L。Km＝[S]2＝Km+[S]

Vmax

Vmax[S]VmaxV[S]KmVmax/2（2）Km與Vmax的意義Km值①Km等于酶促反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度。單位與底物濃度一樣。②意義：a)

Km是酶的特征性常數(shù)之一；b)

Km可近似表示酶對(duì)底物的親和力；c)

同一酶對(duì)于不同底物有不同的Km值。d)已知Km值情況下，應(yīng)用米氏方程可計(jì)算任意底物濃度時(shí)的反應(yīng)速度，或由所要求的反應(yīng)速度求出應(yīng)當(dāng)加入底物的合理濃度。

實(shí)際用途：1）可由所要求的V求[S]；練習(xí)題：求反應(yīng)速度達(dá)最大反應(yīng)速度99%時(shí)的底物濃度？（用Km表示）2）根據(jù)已知[S]求該反應(yīng)V。練習(xí)題：已知某酶的Km值為0.05mol/L，要使此酶所催化的反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度的80％時(shí)底物的濃度應(yīng)為多少？

Vmax（Vm）定義：Vmax是酶完全被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度，與酶濃度成正比。意義：Vmax=K3[E]如果酶的總濃度已知，可從Vm計(jì)算動(dòng)力學(xué)常數(shù)K3。（3）Ｋm值與Ｖmax值的測(cè)定

基本原則：將米氏方程變化成相當(dāng)于y=ax+b的直線方程，再用作圖法求出Km。1）雙倒數(shù)作圖法(doublereciprocalplot)，又稱為林-貝氏(Lineweaver-Burk)作圖法

Vmax[S]Km+[S]V=（林－貝氏方程）+1/V=KmVmax1/Vmax1/[S]兩邊同取倒數(shù)VmaxV[S]KmVmax/2酶動(dòng)力學(xué)的雙倒數(shù)圖線2）Hanes作圖法[S][S]/V-Km

Km/Vm在林－貝氏方程基礎(chǔ)上，兩邊同乘[S][S]/V=Km/Vmax+[S]/VmaxEadie-HofsteeplotHanesplotCornish-BowdenplotDixonplot定義—當(dāng)酶被底物充分飽和時(shí)，單位時(shí)間內(nèi)（每秒鐘）每個(gè)酶分子催化底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物的分子數(shù)（微摩爾數(shù)）。意義—可用來比較每單位酶的催化能力。

酶的轉(zhuǎn)換數(shù)（二）酶濃度的影響

在底物濃度足夠高的條件下，酶催化反應(yīng)速度與酶濃度成正比，如圖1—3所示。它們之間的關(guān)系可以用下列數(shù)學(xué)式表示：v＝k3[E]（三）

溫度的影響每一種酶的催化反應(yīng)都有其有效溫度范圍和最適溫度。在有效溫度范圍內(nèi)，酶才能夠進(jìn)行催化反應(yīng)；在最適溫度條件下，酶的催化反應(yīng)速度達(dá)到最大（四）pH值的影響酶的催化作用與反應(yīng)液的pH值有很大關(guān)系。每一種酶都有其各自的有效pH值范圍和最適pH值。只有在有效pH值范圍內(nèi)，酶才能顯示其催化活性，在最適pH值條件下，酶催化反應(yīng)速度達(dá)到最大（五）抑制劑的影響

能夠使酶的催化活性降低或者喪失的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。抑制劑有可逆性抑制劑和不可逆抑制劑之分。1.不可逆抑制

不可逆抑制劑與酶分子結(jié)合后，抑制劑難于除去，酶活性不能恢復(fù)。不可逆抑制作用又可以分為非專一性不可逆抑制和專一性不可逆抑制兩種。

（1）非專一性不可逆抑制非專一性不可逆抑制劑作用于酶分子中一類或幾類基團(tuán)。如果被作用的基團(tuán)屬于必需集團(tuán)，或者作用后引起酶分子活性中心結(jié)構(gòu)不可逆轉(zhuǎn)的改變，則導(dǎo)致酶的不可逆抑制。不可逆抑制劑主要有：汞、銀、鉛等重金屬離子，有機(jī)磷、有機(jī)砷、有機(jī)汞、氰化物、硫化氫化合物，酰基化試劑，烷基化試劑，巰基乙醇等。（2）專一性不可逆抑制專一性不可逆抑制劑是根據(jù)酶的底物結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制，專門設(shè)計(jì)的只對(duì)某一種酶起不可逆抑制作用的化合物。又稱為親和標(biāo)記試劑。結(jié)合型和催化型不可逆抑制專一性不可逆抑制又可以根據(jù)其作用機(jī)制不同分為結(jié)合型(Ks型)不可逆抑制和催化型(Kcat型)不可逆抑制兩種。（1）結(jié)合型不可逆抑制Ks型不可逆抑制是指抑制劑只能專一地與某種酶結(jié)合而引起的不可逆抑制作用。對(duì)某種酶具有結(jié)合型不可逆抑制作用的化合物稱為Ks型不可逆抑制劑，這類試劑是根據(jù)底物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。具有與酶作用底物類似的結(jié)構(gòu)，可以與酶專一地結(jié)合，同時(shí)還具有一個(gè)可以與酶活性中心的某個(gè)必需基團(tuán)反應(yīng)，而使酶失活的基團(tuán)。

（2）

催化型不可逆抑制催化型(Kcat型)不可逆抑制是指抑制劑能專一地與某種酶結(jié)合并發(fā)生催化反應(yīng)，而反應(yīng)的產(chǎn)物中含有一個(gè)基團(tuán)可以與酶分子活性中心的基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致酶分子不可逆地喪失催化活性。2.

可逆性抑制可逆性抑制劑與酶的結(jié)合是可逆的，只要將抑制劑除去，酶活性即可恢復(fù)。根據(jù)可逆性抑制作用的機(jī)理不同，酶的可逆抑制作用可以分為競(jìng)爭(zhēng)性抑制、非競(jìng)爭(zhēng)性抑制和反競(jìng)爭(zhēng)性抑制三種。（1）競(jìng)爭(zhēng)性抑制

競(jìng)爭(zhēng)性抑制(competitiveinhibition)是指抑制劑和底物競(jìng)爭(zhēng)與酶分子結(jié)合而引起的抑制作用。競(jìng)爭(zhēng)抑制.swf競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑與酶作用底物的結(jié)構(gòu)相似。它與酶分子結(jié)合以后，底物分子就不能與酶分子結(jié)合，從而對(duì)酶的催化起到抑制作用。例如丙二酸是琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。22+++EESIESEIEP+IEIE+SE+PES反應(yīng)模式競(jìng)爭(zhēng)性抑制的效果強(qiáng)弱與競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的濃度、底物濃度以及抑制劑和底物與酶的親和力大小有關(guān)。隨著底物濃度增加，酶的抑制作用減弱。競(jìng)爭(zhēng)性抑制的特點(diǎn)是酶催化反應(yīng)的最大反應(yīng)速度vm不變，而米氏常數(shù)Km增大許多代謝類似物都是競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，可用作抗菌藥和抗癌藥物?？拱┧?氨基葉酸、阿拉伯糖胞苷、5-氟尿嘧啶等。青霉素青霉素的結(jié)構(gòu)與細(xì)胞壁的成分粘肽結(jié)構(gòu)中的D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可與后者競(jìng)爭(zhēng)轉(zhuǎn)肽酶，阻礙粘肽的形成，造成細(xì)胞壁的缺損，使細(xì)菌失去細(xì)胞壁的滲透屏障，對(duì)細(xì)菌起到殺滅作用。競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用舉例某些藥物或體內(nèi)代謝物對(duì)酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用藥物（抑制劑）被抑制的酶競(jìng)爭(zhēng)底物臨床應(yīng)用及機(jī)理磺胺藥二氫葉酸合成酶（細(xì)菌）苯甲酸抗菌作用（抑制四氫葉酸）氨基蝶呤二氫葉酸還原酶二氫葉酸抗白血病5-氟尿嘧啶（5-FU）尿嘧啶核苷磷酸化酶（胸腺嘧啶核苷磷酸化酶）尿嘧啶（胸腺嘧啶）抗癌作用（抑制核苷酸合成）別嘌呤醇黃嘌呤氧化酶黃嘌呤，次黃嘌呤抗痛風(fēng)（抑制尿酸生成）6-氨基已酸纖溶酶-賴氨酸-氨基酰止血，抗纖溶（抑制纖溶酶）苯丙胺（麻黃素）單胺氧化酶腎上腺素（去甲腎上腺素）中樞興奮，抗哮喘競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑與磺胺類藥物磺胺類藥物，如對(duì)氨基苯甲酸的結(jié)構(gòu)類似物，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制細(xì)菌的二氫葉酸合成酶活性，從而達(dá)到抑菌效果。蝶呤對(duì)氨基苯甲酸Glu二氫葉酸合成酶二氫葉酸四氫葉酸嘌呤核苷酸二氫葉酸還原酶一碳單位磺胺類藥物磺胺類藥物的抗菌機(jī)理：TMP過渡態(tài)類似物作為競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑（2）非競(jìng)爭(zhēng)性抑制非競(jìng)爭(zhēng)性抑制(noncompetitiveinhibition)是指抑制劑與底物分別與酶分子上的不同位點(diǎn)結(jié)合，而引起酶活性降低的抑制作用。由于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑是與酶的活性中心以外的位點(diǎn)結(jié)合，所以，抑制劑的分子結(jié)構(gòu)可能與底物分子的結(jié)構(gòu)毫不相關(guān)。增加底物濃度也不能使非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用逆轉(zhuǎn)。*反應(yīng)模式E+SESE+P+

S－S+

S－S+ESIEIEESEP+IEI+SEIS+I非競(jìng)爭(zhēng)性抑制的特點(diǎn)是最大反應(yīng)速度vm減小，而米氏常數(shù)Km不變，如圖1-7所示。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制的Km和vm變化（3）反競(jìng)爭(zhēng)性抑制

在底物與酶分子結(jié)合生成中間復(fù)合物后，抑制劑再與中間復(fù)合物結(jié)合而引起的抑制作用稱為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制(uncompetitiveinhibition)。*反應(yīng)模式E+SE+PES+IESI++ESESESIEP反競(jìng)爭(zhēng)性抑制的特點(diǎn)是最大反應(yīng)速度vm和米氏常數(shù)Km同時(shí)減小，如圖l—8所示。

酶活性抑制作用的分類（六）激活劑的影響能夠增加酶的催化活性或使酶的催化活性顯示出來的物質(zhì)稱為酶的激活劑或活化劑。在激活劑的作用下，酶的催化活性提高或者由無活性的酶原生成有催化活性的酶。（1）無機(jī)離子激活劑Ca2+、Mg2+、Co2+、Zn2+、Mn2+等金屬離子和Cl-、Br-、I-等無機(jī)負(fù)離子。例如，(Ca2+)是α-淀粉酶的激活劑，鈷離子(Co2+)和鎂離子(Mg2+)是葡萄糖異構(gòu)酶的激活劑等。（2）小分子有機(jī)化合物抗壞血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽對(duì)某些含巰基的酶有激活作用，如3-磷酸甘油醛脫氫酶。另外，乙二胺四乙酸（EDTA）是金屬離子螯合劑，能解除重金屬離子對(duì)酶的抑制作用，也可視為激活劑。（3）生物大分子激活劑有的酶也可以作為激活劑，通過激活劑的作用使酶分子的催化活性提高或者使酶的催化活性顯示出來。例如，胰蛋白酶原可在腸激酶和胰蛋白酶的作用下，除去一個(gè)六肽，從而顯示出胰蛋白酶的催化活性。胰蛋白酶激活第四節(jié)

酶的活力測(cè)定在酶學(xué)和酶工程的研究和生產(chǎn)中，經(jīng)常需要進(jìn)行酶的活力測(cè)定，以確定酶量的多少以及變化情況。酶活力測(cè)定是在一定條件下測(cè)定酶所催化的反應(yīng)速度。在外界條件相同的情況下，反應(yīng)速度越大，意味著酶活力越高。酶催化反應(yīng)速度用單位時(shí)間(t)內(nèi)底物的減少量(S)或產(chǎn)物的增加量(p)表示。一.酶活力測(cè)定的方法酶活力測(cè)定的方法多種多樣，如化學(xué)測(cè)定法、光學(xué)測(cè)定法、氣體測(cè)定法等?？偟囊笫强焖?、簡便、準(zhǔn)確。酶活力測(cè)定均包括兩個(gè)階段。首先在一定條件下，酶與底物反應(yīng)一段時(shí)間，然后再測(cè)定反應(yīng)液中底物或產(chǎn)物的變化量。一般經(jīng)過如下幾個(gè)步驟：酶活力測(cè)定的一般步驟(1)根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液。(2)根據(jù)酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，確定酶催化反應(yīng)的溫度、pH值、底物濃度、激活劑濃度等反應(yīng)條件。(3)在一定的條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時(shí)記下反應(yīng)開始的時(shí)間。(4)反應(yīng)到一定的時(shí)間，取出適量的反應(yīng)液，運(yùn)用各種生化檢測(cè)技術(shù)，測(cè)定產(chǎn)物的生成量或底物的減少量。測(cè)定反應(yīng)液中底物的減少或產(chǎn)物的生成量，可采用化學(xué)