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文檔簡介
聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳分離血清蛋白【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>
1.學(xué)習(xí)聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
2.掌握聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳的操作技術(shù)【實(shí)驗(yàn)原理】
聚丙烯酰胺是由單體丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯(lián)劑N,N’-甲叉雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(簡稱AP)和加速劑N,N,N’N’-四甲基乙二胺(簡稱TEMED)的作用下,聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。
2021/4/261聚丙烯酰胺凝膠電泳分離原理分子篩效應(yīng):分子量或分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì)通過一定孔徑分離膠時(shí),受阻滯的程度不同而表現(xiàn)出不同的遷移率,這就是分子篩效應(yīng)。電荷效應(yīng):電荷量不同,遷移率不同。濃縮效應(yīng)2021/4/262【實(shí)驗(yàn)器材】樣品:血清凝膠儲備液:1號液:pH8.9Tris~HCl緩沖液+TEMED2號液:Acr+Bis3號液:AP電泳緩沖液:pH8.3的Tris-Gly緩沖液染色液:氨基黑溶液脫色劑:冰乙酸2021/4/263【實(shí)驗(yàn)器材】電泳儀、圓盤電泳槽、電泳玻璃管、青霉素小瓶蓋、微量注射器、長針頭注射器、燒杯、移液管、ParaFilm膜。2021/4/264【實(shí)驗(yàn)步驟】1.凝膠的制備
(1)準(zhǔn)備工作:用ParaFilm膜密封細(xì)橡皮塞的一端,塞入放到木質(zhì)試管架上的小瓶塞中;2021/4/265(2)制備小孔膠(分離膠)凝膠濃度:7.5%試劑用量蒸餾水1號液2號液
1mL1mL2mL混勻3號液4mL2021/4/2662.灌膠,裝膠用滴管吸取凝膠沿管壁裝入玻璃管中,檢查管內(nèi)無氣泡,加完凝膠后沿管壁緩緩注入幾滴蒸餾水,聚合約40-60分鐘;時(shí)間到后,輕輕取下管底部的橡皮塞和ParaFilm膜,用濾紙吸取凝膠上方水層,將凝膠管垂直插入電泳槽圓孔中并盡量使各管高度一致,其余孔用膠塞堵住,電泳槽內(nèi)加注電泳液;2021/4/2673.加樣:
用微量注射器吸取20/50ml
的樣品(含溴酚藍(lán)),沿內(nèi)壁緩慢加入,注意觀察樣品的狀態(tài)變化;4.電泳:負(fù)極在上,正極在下,電流調(diào)節(jié)到2mA/管,開通電源;2min后,電流調(diào)節(jié)到5mA/管,電泳約1h左右,直到溴酚藍(lán)跑到凝膠底部。2021/4/2685.剝膠
2021/4/2696.固定與染色:將取下的膠條放入染色液中,在室溫下,固定染色10min。7.脫色:將染色完畢的膠條用自來水沖洗后浸泡在脫色液中;8.觀察并圖示記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2021/4/26109、人的價(jià)值,在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣,抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:39:01PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心,不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望,作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么,說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義,不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個(gè)人即使已登上頂峰,也仍要自強(qiáng)不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/39、人的價(jià)值,在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣,抬頭要有低氣。***2/3/20234:39:01PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心,不寬余請。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望,作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一個(gè)人炫耀什么,說明他內(nèi)心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、業(yè)余生活要有意義,不要越軌。**2/3/202317、一個(gè)人即使已登上頂峰,也仍要自強(qiáng)不息。***03-2月-23謝謝大家2021/4/26129、人的價(jià)值,在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣,抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:39:02PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心,不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望,作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么,說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32
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