GB/T 27637-2011副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27637—2011

副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

Real-timePCRmethodforthedetectionof

Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis

2011-12-30發(fā)布2012-04-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

GB/T27637—2011

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100013)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

/p>

年月第一版

20123

*

書號

:155066·1-44345

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T27637—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)北京盈九思科技發(fā)展有

:、、

限公司

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉中勇陳茹楊國海高云航曾碧健朱道中吳曉薇高小博

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27637—2011

副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了副結(jié)核分枝桿菌Mycobacteriumaviumparatuberculosis實(shí)時熒光檢

(subsp.)PCR

測方法的技術(shù)要求和操作規(guī)范

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于快速檢測培養(yǎng)物血樣奶樣糞便和組織等臨床樣品中副結(jié)核分枝桿菌

、、、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682—2008

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489—2008

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

值熒光信號量達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

Ct:。

脫氧核苷三磷酸

dNTP:deoxyribonucleosidetriphosphate,。

二甲基亞砜

DMSO:dimethylsulfoxide,。

乙二胺四乙酸

EDTA:ethylenediaminetetraaceticacid,。

磷酸鹽緩沖液

PBS:phosphatebuffersolution,。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:polymerasechainreaction,。

酶聚合酶

Taq:TaqDNA。

酶尿嘧啶糖基化酶

UDG:uracilDNAglycosylase,DNA。

4原理

本標(biāo)準(zhǔn)方法采用了探針實(shí)時熒光技術(shù)原理反應(yīng)體系中包括一對用于擴(kuò)增

TaqManPCR。DNA

的引物和一條能與產(chǎn)物特異雜交的熒光標(biāo)記探針探針的端標(biāo)記了被稱為報(bào)告基團(tuán)的熒光

,PCR。5’

素端標(biāo)記了淬滅基團(tuán)在進(jìn)行延伸反應(yīng)時酶的外切酶活性將端熒光基團(tuán)從探針上

,3’。PCR,Taq5’5’

切割下來使其與淬滅基團(tuán)分離從而儀器能檢測到端熒光基團(tuán)所發(fā)出的熒光信號一分子擴(kuò)

,,5’,PCR

增產(chǎn)物的生成伴隨一分子熒光信號的產(chǎn)生隨著擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)的增加儀器檢測到的熒光信號的累積

。,

反應(yīng)了擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化本標(biāo)準(zhǔn)方法以副結(jié)核分枝桿菌特異的基因序列為模板設(shè)計(jì)特異擴(kuò)增

。