膠體金組研發(fā)思路

膠體金組研發(fā)思路●明確對象●檢測方法-膠體金法●膠體金的制備

●標(biāo)金過程●試紙條的組成●性能評估●投入市場目錄1

明確對象豬瘟

犬細(xì)小

犬瘟

豬瘟病毒是豬瘟的病原,主要通過直接接觸，或由于接觸污染的媒介物而發(fā)病。臨床表現(xiàn)：

最急性型：發(fā)病急，高熱稽留，痙攣，抽搐，皮膚和可視粘膜發(fā)紺，有出血點，很快死亡。

急性型和亞急性型：高熱，精神沉郁，食欲減退，初便秘，后腹瀉，公豬包皮積液，離心端有出血點或紅斑不褪色，少數(shù)神經(jīng)癥狀，死亡率高。

慢性型：食欲時好時壞，體溫時高時低，便秘與腹瀉交替進(jìn)行。耳尖、尾根和四肢皮膚經(jīng)常發(fā)紫壞死，甚至干脫,消瘦，全身衰竭，后肢麻痹，行走不穩(wěn)或不能立。

繁殖障礙型（母豬帶毒綜合癥）：早中期感染，母豬流產(chǎn)、死產(chǎn)、木乃伊胎等；孕后期感染，外表正常，仔豬也終身帶毒，免疫耐受（不產(chǎn)生免答）。豬瘟2檢測方法-膠體金法

不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保存、運(yùn)輸，在室溫下可長期保存，不需冷藏。1操作簡便、易于肉眼觀察結(jié)果，不需經(jīng)過特殊復(fù)雜培訓(xùn)，操作者安全，對環(huán)境無污染。2操作快速、短時間獲得檢測結(jié)果，一般10—15分鐘即可得出結(jié)論，便于大批量篩查，取量少，檢測成本均較低，無需特殊儀器。3適用范圍廣泛，檢測標(biāo)本種類多，可用于查血、尿液或糞便，因而適合各種檢查。特異性較強(qiáng)、結(jié)果有可重復(fù)性。43膠體金的制備膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。因此對每次制好的膠體金應(yīng)加以檢定，主要檢查指標(biāo)有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無凝集顆粒等。采用化學(xué)還原法制備膠體金時，通過改變反應(yīng)體系中氯金酸與還原劑的比例（增加或減少還原劑的量）可得到所需不同直徑的金顆粒。要還原材料：氯金酸（HAuCl4）所用還原劑：檸檬酸鈉還原制備金溶膠標(biāo)金過程4復(fù)溶PH蛋白封閉液離心調(diào)試膠體金的標(biāo)記pH：在pH接近和稍高于蛋白質(zhì)的等電點時,膠體金蛋白質(zhì)的吸附力最強(qiáng);pH過高過低都不利于兩者的結(jié)合,因此標(biāo)記時選擇精密的酸堿度測定儀器或者試紙條,采用不同方法重復(fù)校正,并進(jìn)行梯度試驗找到最佳的標(biāo)記pH。蛋白：過多蛋白質(zhì)標(biāo)記,造成浪費(fèi)的同時引起試紙的拖帶現(xiàn)象;過少蛋白質(zhì)標(biāo)記,導(dǎo)致膠體金標(biāo)記不完全,從而降低試紙的靈敏度及假陽性現(xiàn)象的出現(xiàn)。也需要在試驗中進(jìn)行梯度試驗,反復(fù)比較不同標(biāo)記量的標(biāo)記物在破壞試驗中的穩(wěn)定性,確定最佳的標(biāo)記量。5試紙條的組成檢測線質(zhì)檢線吸收墊樣品墊硝酸纖維素膜連接墊（膠體金墊）背襯（底板）6性能評估性能評估從3個重復(fù)批次的試紙條中分別隨機(jī)抽取一定數(shù)量試紙條，分別測試陰性檢測液和陽性檢測液，考察每一批次試紙條的線條是否均一、顏色深淺是否相當(dāng)、檢測結(jié)果是否一致。將制作好的試紙條放入密封袋內(nèi)，內(nèi)置干燥劑片，置于45"C烘箱內(nèi)，分別于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，測試試紙條的穩(wěn)定性。重復(fù)性測試穩(wěn)定性測試(加速老化試驗）特異性測試特異性檢驗是正確認(rèn)識試劑盒對結(jié)構(gòu)類似物抗干擾能力的指