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第三節(jié)高速逆流色譜分離技術(shù)

化學(xué)系1303班郭麗麗201306311025目錄概述1工作原理2溶劑系統(tǒng)的選擇3應(yīng)用4一、概述高速逆流色譜（High-SpeedCountercurrent

Chromatography,HSCCC）是一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)。該技術(shù)不需要固體支撐體，主要依據(jù)物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)的不同對物質(zhì)進(jìn)行分離，相對其他常用色譜（如柱色譜、高效液相色譜等）來說，具有無不可逆吸收和回收率高的特點，特別適合于天然活性成分的分離。二、HSCCC色譜的工作原理及其特點1、工作原理

HSCCC色譜包括儲液罐、泵、螺旋管分離柱、檢測器、色譜工作站或數(shù)據(jù)采集軟件或記錄儀以及餾分收集器等部分。選擇溶劑體系平衡選擇固定相充滿螺旋管柱高速旋轉(zhuǎn)螺旋管泵入流動相流動相流出，注入帶分離的樣品收集餾分2、HSCCC色譜的特點①應(yīng)用范圍廣，適應(yīng)性好②操作簡便，容易掌握③重現(xiàn)性好，回收率高④分離效率高，分離量較大⑥產(chǎn)品純度高三、溶劑系統(tǒng)的選擇1、溶劑系統(tǒng)的種類：

①弱極性溶劑體系

②中等極性溶劑體系

③強(qiáng)極性溶劑體系2、溶劑體系選擇的步驟（1）預(yù)測要分離物質(zhì)的極性，粗選一個溶劑體系；（2）取少量樣品于上下相各2毫升的溶劑體系中，用TLC進(jìn)行檢測，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來調(diào)節(jié)溶劑體系的極性，直到樣品在上下相中的分配比K為0.5~2為止；（3）用HPLC測定K值；（4)用分析型HSCCC進(jìn)行預(yù)分離，再用制備型高速逆流色譜進(jìn)行分離。3、選擇溶劑時應(yīng)注意（1）溶劑不造成樣品的分解或變性；（2）樣品在溶劑中有足夠高的溶解度；（3）樣品在溶劑系統(tǒng)中有合適的分配系數(shù)值（固定相為管柱總體積的50%以上，分配系數(shù)為0.5~2）；（4）固定相能實現(xiàn)足夠高的保留。四、應(yīng)用高速逆流色譜在分離純化木蝴蝶中的黃酮苷類化合物的應(yīng)用1、分配系數(shù)的測定利用HPLC測定樣品在不同溶劑體系的分配系數(shù)。

2、溶劑系統(tǒng)的確定根據(jù)文獻(xiàn)及被分離物的性質(zhì)選擇溶劑體系。包括：①氯仿-甲醇-水；②乙酸乙酯-正丁醇-水；③正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水。此處選用氯仿-甲醇-水

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