第十二章 動物源性細菌

動物源性細菌病原生物學教研室布魯斯菌屬(Brucella)

簡稱布氏菌屬，是一類G-短小桿菌。本菌屬有4個生物種、13個血清型，對人致病的有牛布魯斯菌、羊布魯斯菌、豬布魯斯菌和犬布魯斯菌，在我國流行占絕對優(yōu)勢的是羊布魯斯菌病，其次為牛布魯斯菌。

形態(tài)與染色

抗醇染色性對布魯斯菌有特殊鑒別意義：布魯斯菌呈蘭色，背景及非抗醇菌呈紅色。

生物學性狀培養(yǎng)特性

需氧菌，牛布魯斯菌在初次分離時需5%～10%CO2。

雙相肝浸液培養(yǎng)基----37℃，48h可長出微小、透明、無色的光滑菌落。生物學性狀生物學性狀生化反應

主要布魯斯菌的特性與鑒別菌種CO2需要脲酶試驗H2S產(chǎn)生含染料培養(yǎng)基中生長凝集試驗復紅（1：50000）硫堇（1：20000）抗A因子抗M因子牛布魯斯菌＋＋＋＋－＋－羊布魯斯菌－不定－＋＋－＋豬布魯斯菌－＋＋/－－＋＋＋生物學性狀抵抗力

本菌抵抗力較強。在土壤、皮毛、肉和乳制品及水中可生存數(shù)周至數(shù)月。但在濕熱60℃10min死亡；直射日光下10～20min死亡；3％來蘇兒中數(shù)分鐘死亡。對常用的抗生素也較敏感。

生物學性狀

抗原構造與分型

含有二種抗原物質(zhì)：M(melitensis)抗原（羊布魯斯菌菌體抗原）；A(abortus)抗原（牛布魯斯菌菌體抗原）。羊布魯斯菌M：A是20：1；牛布魯斯菌M：A是1：20；豬布魯斯菌M：A是1：2。本菌還含有L表面抗原，與沙門菌Vi抗原相似。

致病物質(zhì)

內(nèi)毒素是主要致病物質(zhì)。透明質(zhì)酸酶、莢膜等也具有較強的侵襲力。布魯斯菌引起的遲發(fā)型超敏反應與致病性有關。

致病性與免疫性致病性與免疫性所致疾病牛、羊、豬是本菌的主要自然宿主，感染后可引起母畜流產(chǎn)。人類對布魯斯菌易感，細菌可通過消化道和呼吸道粘膜、皮膚及眼結膜等途徑傳染于人，引起布魯斯菌病。反復呈波浪式熱型，故臨床上稱為波浪熱。

致病性與免疫性免疫性

一般認為布魯斯菌感染后形成的免疫是有菌免疫。最終變?yōu)闊o菌免疫。病后產(chǎn)生的抗體主要是IgG和IgM，有調(diào)理作用。布魯斯菌以細胞免疫為主。感染后可引起Ⅲ、IV型超敏反應。病程中免疫保護和病理損害往往交織存在。病原菌分離

血清學診斷皮膚試驗即布魯菌素皮膚超敏反應試驗（brucellinskintest）。

皮試陽性可診斷慢性或曾患過布魯菌病。

微生物學檢查法微生物學檢查法血清學診斷

凝集反應

定量凝集反應：一般血清效價1：160～1：320為陽性診斷標準。抗人球蛋白試驗（即Coomb’stest）

一般用于血清凝集試驗陰性、卻有明顯布魯菌病癥狀的病例。比凝集反應更靈敏，陽性出現(xiàn)早，消失晚。CF：CF主要是測定IgG型抗體，出現(xiàn)較晚，一般以1：10為陽性。

預防措施主要是控制和消滅牲畜布魯菌病，切斷傳播途徑和對疫區(qū)人畜接種減毒活菌苗，有效期約一年。急性病人用抗生素治療，慢性患者可用特異性菌苗脫敏治療。

防治原則芽胞桿菌屬（Bacillus）芽胞桿菌屬是一大群具有芽胞的革蘭陽性桿菌，其共同特點是絕大多數(shù)菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫徑的芽胞，多有周鞭毛，對營養(yǎng)要求不高，菌體呈長鏈狀排列，菌落為粗糙型。本菌屬包括：炭疽芽胞桿菌（B.anthracis）：類炭疽芽胞桿菌（B.anthracoid）：是實驗室常見的污染菌，包括蠟樣芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌、多粘芽胞桿菌、嗜熱脂肪芽胞桿菌等。第一節(jié)炭疽芽胞桿菌

形態(tài)與染色

生物學性狀炭疽桿菌芽孢（復紅、美藍染色×400）炭疽芽孢桿菌×1000（莢膜串珠反應培養(yǎng)特性

需氧菌。普通瓊脂平板：形成大而扁平、灰白色的粗糙型菌落，低倍鏡下可見卷發(fā)狀邊緣。碳酸氫鈉瓊脂平板：有毒株在5%CO2環(huán)境中孵育48h，由于產(chǎn)生莢膜而形成粘液型菌落，用接種環(huán)挑取時可見拉絲狀。

生物學性狀抵抗力

芽胞對外界因素的抵抗力強：在室溫干燥環(huán)境中能存活20余年，在皮革中能生存數(shù)年。牧場一旦被污染，傳染性可維持20～30年。煮沸10min，干熱140℃3h才能破壞芽胞。芽胞對化學消毒劑的抵抗力也很強；對碘較敏感，1：2500碘液經(jīng)10min即可破壞芽胞。本菌對青霉素、紅霉素、氯霉素均敏感。

生物學性狀抗原結構1．莢膜抗原具有抗吞噬作用，與毒力有關。無種屬特異性。2．菌體抗原為多糖抗原，由于耐熱，此抗原在病畜皮毛或腐敗臟器中雖經(jīng)長時煮沸仍可與相應抗體發(fā)生沉淀反應，稱為Ascoli熱沉淀反應。與其他芽胞桿菌、14型肺炎球菌多糖抗原、人類A血型物質(zhì)有共同成分，能發(fā)生交叉反應。3．芽胞抗原由芽胞的外膜、皮質(zhì)等組成的芽胞特異性抗原，具有免疫原性和血清學診斷價值。4．炭疽毒素由保護性抗原（PA）、致死因子（LF）和水腫因子（EF）三種蛋白質(zhì)組成的復合物。炭疽毒素具有抗吞噬作用和免疫原性。其相應抗體對宿主有一定的保護作用。

生物學性狀致病物質(zhì)

莢膜具有抗吞噬作用，有利于細菌在機體組織內(nèi)繁殖與擴散。炭疽毒素保護性抗原（PA）

致死因子（LF）

水腫因子（EF）致病性與免疫性毒性作用主要是直接損傷微血管的內(nèi)皮細胞，使血管通透性增加，有效循環(huán)血量不足，微循環(huán)灌注量明顯減少，血液呈高凝狀態(tài)，易形成感染性休克和彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）所致疾病

主要通過接觸病畜及其皮毛等：皮膚炭疽：細菌由手、頸、顏面部小傷口侵入，最多見。經(jīng)12～36h局部出現(xiàn)水泡、膿皰，最后壞死潰瘍，形成特有的黑色焦痂，故名炭疽，輕者2～3周治愈，重者死于敗血癥；腸炭疽：食入未煮熟的病畜肉類、病畜奶或污染食物引起。出現(xiàn)連續(xù)性嘔吐、腸麻痹及血便，以全身中毒為主，2～3d死于毒血癥；肺炭疽：吸入含有大量病菌芽胞的塵?？砂l(fā)生，又稱羊毛工人病。表現(xiàn)呼吸道癥狀，很快出現(xiàn)全身中毒癥狀。致病性與免疫性免疫性

感染炭疽（包括隱性感染和顯性感染）或接種疫苗后，均可獲得持久的免疫力。免疫作用主要與抗毒素及吞噬細胞的吞噬作用增強有關。

致病性與免疫性直接涂片鏡檢：見到有莢膜的典型竹節(jié)狀G+大桿菌，結合臨床癥狀可作出初步診斷。分離培養(yǎng)血瓊脂平板和碳酸氫鈉瓊脂平板標本觀察菌落特征，并做青霉素串珠試驗、動物試驗、噬菌體裂解試驗等鑒定。Ascoli試驗

免疫熒光法檢查病人的莢膜抗體，用ELISA檢查保護性抗體。微生物學檢查法性狀炭疽芽胞桿菌其他需氧芽胞桿菌

莢膜

+-動力-+溶血不溶血或微溶血多為迅速而明顯溶血肉湯生長絮狀沉淀，上層清晰沉淀，均勻渾濁，有菌膜青霉素串珠試驗

+-噬菌體裂解試驗

+-NaHCO2瓊脂平板粘液型菌落粗糙型菌落動物致病力試驗+-炭疽芽胞桿菌與其他需氧芽胞桿菌的鑒別

預防人類炭疽病的關鍵是加強家畜的管理及其炭疽病的防治，對易感家畜進行預防接種。病畜應嚴格隔離或處死深埋。死畜嚴禁剝皮或煮食，必須焚毀或深埋于2m以下并加大量石灰。對可疑污染的動物皮毛、用具等必須徹底消毒處理。對易感者，主要是牧民、屠宰牲畜人員、獸醫(yī)、制革工人等應進行特異性預防，用炭疽減毒活疫苗或炭疽純化菌苗，皮上劃痕、皮下注射或氣溶膠吸入接種，一般接種后半月產(chǎn)生免疫力，可維持1年。治療炭疽病以青霉素為首選，四環(huán)素、氯霉素、強力霉素、磺胺藥物等也有效。也可采用抗生素、磺胺藥物及抗炭疽血清的綜合療法。

防治原則第二節(jié)蠟樣芽胞桿菌

蠟樣芽胞桿菌廣泛分布于土壤、污水、塵埃中，對人類是條件致病菌，常因污染水、淀粉制品、奶制品等食物而引起食物中毒。只有食物中含菌量達到106/g時才能致病。致病物質(zhì)主要是腸毒素。本菌對紅霉素、氯霉素和慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺類耐藥。

耶爾森菌屬（Yersinia）

屬于腸桿菌科，有11個菌種，該屬細菌通常引起嚙齒動物、家畜和鳥類等動物感染，人類通過接觸動物、被節(jié)肢動物叮咬或食入被污染食物等途徑感染。

鼠疫耶氏菌----鼠疫小腸結腸炎耶氏菌----人類嚴重小腸結腸炎。

假結核耶氏菌----食用患病動物污染的食物而感染,多為胃腸炎、腸系膜淋巴結肉芽腫、回腸末端炎等。鼠疫耶爾森菌（Y.pestis）

俗稱鼠疫桿菌，是鼠疫的病原菌。鼠疫是在野生嚙齒類動物間傳播的一種烈性傳染病，歷史上曾發(fā)生過三次世界性大流行。通過鼠蚤叮咬而傳染人，引起嚴重疾病，死亡率極高。

形態(tài)與染色

生物學性狀培養(yǎng)特性

營養(yǎng)要求不高：固體培養(yǎng)基：形成無色透明、中央厚而致密、周圍菲薄而不整齊邊緣的細小菌落。肉湯培養(yǎng)基：“鐘乳石”狀發(fā)育，此特征具有鑒別意義。

生物學性狀抗原構造

1．F1抗原莢膜抗原，具有抗吞噬作用；

刺激機體產(chǎn)生抗體（保護性抗體）2．V和W抗原同一質(zhì)粒編碼。與毒力有關，能抑制吞噬細胞的吞噬作用。3．外膜蛋白與V-W基因在同一質(zhì)粒上；這些蛋白能使細菌突破機體的防御機制。4.鼠毒素是一種外毒素，為蛋白質(zhì)，具有抗原性。1μg即可使鼠致死，可引起局部壞死和毒血癥。但對人的損傷作用不清楚。

生物學性狀抵抗力

對理化因素抵抗力較弱。濕熱70～80℃10min或100℃1min可殺死該菌。在干燥痰中可存活3～7d，在蚤糞和土壤中能存活半年至1年以上。5%來蘇、0.1%0.2%升汞在20min內(nèi)可將痰液中病菌殺死。

致病物質(zhì)

毒力強，幾個細菌即可使人致病，其致病作用與F1抗原、V抗原的抗吞噬作用以及鼠毒素和內(nèi)毒素的毒性作用有關。致病性與免疫性所致疾病

鼠疫是自然疫源性傳染病。

傳播方式：鼠鼠蚤鼠。

臨床類型：腺鼠疫：劇烈的出血壞死性淋巴結炎，多在腹股溝。肺鼠疫：吸入染菌塵埃，易暴發(fā)流行，死亡率高。敗血癥型鼠疫：（原發(fā)性/繼發(fā)性）最嚴重，死亡率可高達100%。

死者皮膚常呈黑紫色，故有“黑死病”之稱。致病性與免疫性人人呼吸道/人蚤致病性與免疫性

免疫性

鼠疫病后能獲得持久免疫力，很少再感染。體液免疫：針對F1抗原、V-W抗原的抗體，具有調(diào)理吞噬、凝集細菌和殺菌作用；細胞免疫：由于鼠疫耶爾森菌主要在吞噬細胞內(nèi)繁殖，因此抗感染能力依賴于細胞免疫和吞噬細胞對病菌的消滅。

直接涂片鏡檢：革蘭染色、美藍染色，觀察形態(tài)和染色特性。

分離培養(yǎng)血瓊脂平板可疑菌落標本作涂片染色、噬菌體裂解試驗、血清凝集