4-保健食品功效成分檢測技術(shù)與方法

保健食品功效成分檢測技術(shù)與方法提綱一．保健食品的檢驗有關(guān)要求二．保健食品理化檢驗及常用的分析方法介紹三．保健食品功效成分的檢測四．保健食品功效成分檢測其它有關(guān)問題一、保健食品的檢驗有關(guān)要求1、檢驗依據(jù)2、檢驗要求1、主要檢驗依據(jù)保健食品管理辦法（1996年衛(wèi)生部46令）保健食品注冊管理辦法衛(wèi)生部健康相關(guān)產(chǎn)品檢驗機構(gòu)認(rèn)定與管理辦法（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)［1999］第76號）衛(wèi)生部發(fā)布的與保健食品相關(guān)的文件保健食品通用衛(wèi)生要求（1996年）保?。üδ埽┦称吠ㄓ脴?biāo)準(zhǔn)（GB16740）保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范（2003年版）食品國標(biāo)GB/T5009——2003企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)2、檢驗要求保健食品檢驗機構(gòu)CDC系統(tǒng)藥檢系統(tǒng)檢驗要求1.保健食品應(yīng)具有與產(chǎn)品配方和申報的保健功能相適應(yīng)的功效成分或特征成分，申報時須檢測配方中主要原料所含的功效成分或特征成分。檢驗要求保健食品評審專家委員會可根據(jù)產(chǎn)品的具體配的項目。檢驗機構(gòu)受理保健食品檢測時，申報單位應(yīng)提供該產(chǎn)品的配方、工藝及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)資料。保健食品的功效成分檢測工作應(yīng)在SFDA部原來認(rèn)定的檢測機構(gòu)進行。檢驗要求功效成分或指標(biāo)性成分、含量及其檢驗方法根據(jù)產(chǎn)品及原料確定，應(yīng)與申報的功能有一定的關(guān)系功效成分或指標(biāo)性成分、含量及其檢驗方法應(yīng)分別列出依據(jù)以下二方面確定產(chǎn)品的功效成分（或標(biāo)志性成分）并說明理由與申報保健功能有關(guān)的功效成分代表產(chǎn)品特性的標(biāo)志性成分按標(biāo)準(zhǔn)（規(guī)范）規(guī)定的檢測方法檢測無標(biāo)準(zhǔn)檢測方法的，應(yīng)用比較權(quán)威的檢測方法，并標(biāo)明方法的出處無相關(guān)檢測方法的，申請人應(yīng)提供詳細(xì)的檢測方法和方法學(xué)研究及驗證少5批加樣回收率等內(nèi)容及驗證報告檢驗要求的檢測方法應(yīng)根據(jù)其產(chǎn)品適用的方法學(xué)范圍選擇以下進行測定：國家標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)國際上權(quán)威分析方法檢驗要求1.在沒有相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方法時，企業(yè)應(yīng)建立自己的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。自主開發(fā)研究的分析方法，申報單位需向檢測機構(gòu)提供方法學(xué)研究的相關(guān)資料。檢驗要求質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中文文本編寫格式須符合GB／T1.1－2000則的規(guī)定內(nèi)容須包括資料性概述要素（封面、目次、前言）、規(guī)范性一般要素（產(chǎn)品名稱、范圍、規(guī)范性引用文件）、規(guī)范性技術(shù)要素（技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運輸、儲存、規(guī)范性附錄）以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)編寫說明附錄中列出檢驗方法和原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）功效成分標(biāo)示范圍，具體標(biāo)示方法一般性功效成分（或標(biāo)志性成分）多糖、膳食纖維等功效成分（或標(biāo)志性成分）需要限定范圍的，可按指標(biāo)值±x%定范圍，如總蒽醌、蘆薈苷等。X值依據(jù)研制產(chǎn)品的檢測資料確定折算成每日攝入量不得大于允許攝入量營養(yǎng)素補充劑中維生素類按指標(biāo)值的0.8-1.8按指標(biāo)值的0.75-1.25倍確定其指標(biāo)范圍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)編制說明中應(yīng)詳細(xì)提供功效成分（或標(biāo)志性成分）依據(jù)及理由二、保健食品理化檢驗及常用的分析方法介紹1、保健食品常見的檢驗項目2、保健食品檢驗常用的分析方法1、保健食品常見的檢驗項目感官指標(biāo)（性狀）水分灰分凈含量與負(fù)偏差崩解時限微生物限度重金屬（Pb、As、Hg）農(nóng)藥殘留量（六六六、滴滴涕）功效成分其它感官檢查法物理檢查法化學(xué)分析法物理化學(xué)分析法感官檢查法主要依靠人的感覺器官，即視覺、嗅覺、進行衛(wèi)生學(xué)評價時具有重要的意義。物理檢查法折光率等，用以判定物質(zhì)的純度。不溶性固形物物?；瘜W(xué)分析法定性分析化學(xué)反應(yīng)的顏色、沉淀定量分析重量分析揮發(fā)法、萃取法、沉淀法容量分析法物理化學(xué)分析法比色和分光光度法原子吸收分光光度法熒光分析法原子熒光光譜法電位分析法層析法氣相色譜法高效液相色譜法物理化學(xué)分析法IRHPCEHPLC-MS/MSGC-MS/MSICP-MS三、保健食品功效成分的檢測（一）、保健食品原料（二）、保健食品功效成分類別和相應(yīng)檢測指標(biāo)（三）、保健食品功效成分檢測方法（四）、保健食品分析方法的建立和析方法學(xué)驗證（五）、實例分析（一）、 保健食品原料普通食品植物類（中草藥）動物類真菌類益生菌類核酸類新資源食品營養(yǎng)素其他（三）保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)1、增強免疫力功能多糖（靈芝、蟲草、香菇等）、腺苷、氨基酸、人參皂苷類、花粉、黨參、黃芪、伏苓、枸杞、人參、阿膠、大棗、靈芝、靈芝孢子粉、桑葚、西洋參、螺旋藻、冬蟲夏草、蜂王漿、鐵皮石斛、蜂膠、牛初乳、杜仲、銀耳、牛膝等2、輔助降血脂功能黃酮類、魚油（EPA、DHA、DPA）、亞麻酸、亞油酸、茶多酚、苦蕎粉、鈍頂螺旋藻、決明子、維生素E、銀杏葉、荷葉、月見草油、沙棘油、紅曲制劑、甲殼素、植物甾醇、γ-谷維素等保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)3、輔助降血糖功能苦瓜總苷、三價鉻、多糖類、黃酮類、紅曲、三七、葛根、澤瀉、田七、何首烏、黃芪、黃精、人參、烏梅、知母、生地、決明子、山藥、山楂、紅花、甘山梨酸糖醇、異麥芽糖醇、乳糖醇、蜂膠、桑葉、D-甘露、糖醇、百合4、抗氧化功能茶多酚、黃酮類、維生素C、硒保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)5、輔助改善記憶功能EPA、DHA、DPA、Ve、磷脂、牛磺酸6、緩解視疲勞功能B-胡蘿卜素、葉黃素、維生素類7、促進排鉛功能N-葡萄糖基L-半胱氨酸、谷胱甘肽、牛初乳粉、珍珠粉、維生素C、葡萄糖酸鋅、酪蛋白磷酸肽、?；撬帷⒛咎谴?、清咽功能金銀花、胖大海青果、冰片、薄荷腦9、輔助降血壓功能黃酮類保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)10、改善睡眠功能褪黑素、松果體素、低聚糖11、促進泌乳功能12、緩解體力疲勞功能人參、西洋參皂苷類、多糖類、維生素類、淫羊藿苷13、提高缺氧耐受力功能角鯊烯、維生素E、角鯊烯、沙棘籽油、枸杞子、黃精、冬蟲夏草、螺旋澡、膠股藍、茶多酚、珍珠粉、牛初乳、黨參、紅景天、馬鹿葺、川芎、當(dāng)歸、刺五加、靈芝、黃芪、三七、銀杏葉、紅花保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)14、對輻射危害有輔助保護功能紅景天、茶多酚、維生素C、當(dāng)歸、蜂膠、原花青素、靈芝、銀耳、維生素E、螺旋藻、殼聚糖、枸杞、銀杏葉、女貞子、黃芪、香菇、番茄紅素、刺五加、β-胡蘿卜素等15、減肥功能決明子、蘆薈、黃芪、山楂、番瀉葉、黃酮、肉堿、大黃酸、茶多酚、荷葉等保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)16、改善生長發(fā)育功能鈣、鋅、Vd、Vb6等17、增加骨密度功能鈣、?；撬?、Vd、Vc18、改善營養(yǎng)性貧血功能Fe，蘆薈19、對化學(xué)性肝損傷有輔助保護功能黃酮、多糖保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)20、祛痤瘡功能梔子、丹皮、銀花、薄荷、蘆薈、野菊花21、祛黃褐斑功能蘆薈、山藥、茯苓、薏米22、改善皮膚水份功能23、改善皮膚油份功能保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)24、調(diào)節(jié)腸道菌群功能益生菌、低聚糖類25、促進消化功能(成人和兒童)山楂、麥芽、雞內(nèi)金、山藥、黨參、萊服子、扁微晶纖維素、膳食纖維、低聚半乳糖、大豆低聚糖保健食品類別和功效成分檢測指標(biāo)26、通便功能制何首烏、火麻仁、決明子、枳實、萊菔子、桃仁、百合、玉竹、阿膠、蘆薈、黃芪、膳食纖維、大豆膳食纖維、低聚果糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖、螺旋藻、橘皮、蜂蜜、山楂、幾丁聚糖、番瀉葉、羅漢果、大黃、甘桑椹、乳酸菌、決明子膠、瓜爾豆膠、阿拉伯膠27、對胃黏膜損傷有輔助保護功能部分常見保健食品原料為主的產(chǎn)品指標(biāo)檢測項目產(chǎn)品類型營養(yǎng)素補充劑五加科參類

檢測項目產(chǎn)品中標(biāo)識的營養(yǎng)素(包括維生素和礦物質(zhì))皂甙蕈類（靈芝、蘑菇等） 膳食纖維冬蟲夏草菌絲體紅景天類

腺苷紅景天甙部分常見保健食品原料為主的產(chǎn)品指標(biāo)檢測項目蘆薈類大蒜類螺旋藻類茶葉類魔芋類

蘆薈甙大蒜素蛋白質(zhì)、胡蘿卜素、維生素B1、維生素B2茶多酚膳食纖維部分常見保健食品原料為主的產(chǎn)品指標(biāo)檢測項目纖維素類磷脂類（原料）紅曲類

膳食纖維丙酮不溶物、乙醚不溶物等洛伐它丁脂肪酸、維生素E脂肪酸部分常見保健食品原料為主的產(chǎn)品指標(biāo)檢測項目初乳類蛇、蝎等

免疫球蛋白錳、蛋白質(zhì)蚓激酶（溶纖酶）、蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)、氨基酸角鯊烯蜂皇漿

產(chǎn)品指標(biāo)檢測項目角鯊烯10-羥基癸烯酸甲殼質(zhì)產(chǎn)品褪黑素產(chǎn)品

總黃酮脫乙酰度，產(chǎn)品如為復(fù)方應(yīng)檢測原料的脫乙酰度蛋白質(zhì)、氨基酸褪黑素產(chǎn)品原料（褪黑素）需提供原料純度證明并檢測（三）保健食品功效成分檢測方法保健食品中紅景天甙的測定保健食品中大蒜素的測定保健食品中蘆薈甙的測定保健食品中脫氫表雄甾酮（DHEA）的測定保健食品中吡啶甲酸鉻的測定酰胺和咖啡因的測定保健食品功效成分檢測方法保健食品中肌醇的測定保健食品中肉堿的測定保健食品中α-亞麻酸、γ-亞麻酸的測定保健食品中免疫球蛋白IgG的測定保健食品中人參皂甙的高效液相色譜測定保健食品中原花青素的測定保健食品功效成分檢測方法保健食品中核苷酸的測定保健食品中洛伐他丁的測定保健食品中中藥功效成分的鑒別方法保健食品中銀杏葉總黃酮的高效液相色譜測定聚糖的測定保健食品中金雀異黃素的測定保健食品功效成分檢測方法保健食品中茶氨酸的高效液相色譜測定素和乙素的高效液相色譜測定保健食品中腺苷的測定保健食品中褪黑素的測定保健食品功效成分檢測方法保健食品中總皂甙的測定保健食品中總黃酮的測定殼聚糖的游離氨基測定及脫乙酰度的計算蚓激酶活性的測定紅曲產(chǎn)品中桔青霉素的測定（四）保健食品分析方法的建立和析方法學(xué)驗證分析方法的選擇分析方法學(xué)驗證的內(nèi)容·分析方法建立實例分析分析方法的選擇根據(jù)分析對象的性質(zhì)選擇準(zhǔn)確、可靠的方法數(shù)選擇可以滿足分析需要的分析方法分析方法的實用性，方法應(yīng)簡便易行，樣品前同時測定成本低、所用試劑和材料不特殊、種類少、穩(wěn)定性高、環(huán)保、毒性小等。方法要經(jīng)過驗證和評價分析方法學(xué)驗證的內(nèi)容精密度準(zhǔn)確度靈敏度檢測限檢測上限定量限方法的適用范圍最佳測定范圍選擇性和專屬性耐用性不確定度評估精密度(precision)度。精密度反映了隨機誤差的大小。常用標(biāo)準(zhǔn)差（S）或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。平行性（replicability）相同分析方法、樣品、實驗室、分析人員、分析設(shè)備、分析時間重復(fù)性（repeatability）相同分析方法、樣品、實驗室，但分析人員、分析設(shè)備、分析時間中至少有一項不同再現(xiàn)性（reproducibility）相同分析方法、樣品，但實驗室，分析人員、分析設(shè)備、分析時間均不同精密度平行性重復(fù)性再現(xiàn)性備注方法√√√樣品√√√地點√√×人員√√××?xí)r間√√××分散設(shè)備√√××濃度水平333樣品（n）999室內(nèi)室間準(zhǔn)確度（accuracy）是用一個特定的分析程序所獲得的分符合程度的度量。機誤差的綜合指標(biāo)。決定分析結(jié)果的可靠程度準(zhǔn)確度的評價方法

X1-X0P（%）=————×100MP——加入的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的回收率M——加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量1——加入標(biāo)準(zhǔn)樣品的測定值0——未知樣品的測定值用回收率評價準(zhǔn)確度需注意事項不同濃度水平，加入量與樣品濃度相近（80%、100%、120%），不能超過方法的線性范圍，加標(biāo)量不得超過待測物含量的3倍。與其它組分的關(guān)系不同。選定與被測樣品相似的標(biāo)準(zhǔn)參考物更加可靠。樣品中某些組分對被測成分產(chǎn)生的干擾（負(fù)），有時很難靠回收率實驗發(fā)現(xiàn)。如果可能，用不同方法比較。靈敏度（sensitivity）一個方法的靈敏度是指該方法對單位線的斜率（k）用于度量靈敏度。A=kc+a檢測限（limitofdetection,LOD）指對某一特定的分析方法在給定的置所能識別的極限。分光光度法檢測限的確定以扣除空白值后的吸光度為0.01應(yīng)的濃度值為檢測限。2. 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量×0.013.檢測限=————————————4. 標(biāo)準(zhǔn)吸光度-空白吸光度色譜法檢測限的確定以最低檢出量（或濃度）表示檢測限。S=3NS——最小響應(yīng)值（峰高或峰面積）N——噪音信號標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量×S最低檢出量=————————————標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的響應(yīng)值注：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量盡量接近最低檢出量，較為準(zhǔn)確。檢測上限（maximumdetectability）指與標(biāo)準(zhǔn)曲線直線部分最高界點相應(yīng)的濃度值。當(dāng)樣品中待測物質(zhì)的濃度值超過檢測上限時，無法定量。定量限（limitofquantitation,LOQ）定量下限：在限定誤差能滿足要求的前提下，用特定分析方法取SN=10N對于消除了系統(tǒng)誤差的特定方法來說，精密度要求越高，則定量下限高出檢測限越多。定量上限：能準(zhǔn)確地定量測定待測物質(zhì)的最大濃度或量。對于消除了系統(tǒng)誤差的特定方法來說，精密度要求越高，則定量上限低于檢測上限越多。方法的適用范圍某一特定方法的檢測下限至檢測上限之間的測定。最佳測定范圍（optimumconcentrationrange）亦稱有效測定范圍，在限定誤差能滿足能準(zhǔn)確地定量測定待測物質(zhì)的濃度或量。最佳測定范圍應(yīng)小于方法的適用范圍，的最佳測定范圍越小。檢測上限定量上限斜率K=靈敏度定量下限檢測限

最佳測定范圍

方法適用范圍選擇性和專屬性其它組分的存在不干擾的測定方法組成的。在測定條件有小的變動是，測定結(jié)果不受影響的承受程度。樣品溶液的穩(wěn)定性提取次數(shù)、時間HPLC流動相比例、PH、……（五）、分析方法建立實例分析實例1高效液相色譜法測定保健食品中的淫羊藿苷1范圍

高效液相色譜法測定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood本方法規(guī)定了保健食品中淫羊藿苷的測定方法。本方法適用于以淫羊藿或淫羊藿提取物為主要原料生產(chǎn)的保健食品中淫羊藿苷的測定。原理將粉碎的膠囊內(nèi)容物、丸劑或液體試樣經(jīng)提取、濃縮等前處理后，根據(jù)高效液相色譜紫外檢測器定性定量檢測。試劑除非另有說明，在分析中僅使用重蒸水。3.1乙醇分析純乙腈色譜純提取液稀乙醇（乙醇546mL→1000mL）淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱量淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品0.012g，加入甲醇溶解并定容至25mL。此溶液每mL含0.48mg淫羊藿苷。儀器高效液相色譜儀：附紫外檢測器（UV）。超聲波清洗器。高效液相色譜法測定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood分析步驟試樣處理：固體試樣：取20粒以上膠囊、10g以上丸劑試樣進行粉碎，混勻，根據(jù)樣品含量，稱取0.5g～2.5g試樣（精確至0.001g），精密加入50mL稀乙醇，稱重，超聲提取60分鐘，取出，放冷至室溫，用稀乙醇補重，過濾，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm膜過濾后供液相色譜分析用。液體試樣：取100mL以上液體試樣，混勻，精密吸取50mL至10mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)0.45μm膜過濾后供液相色譜分析用。液相色譜參考條件5.2.1色譜柱：C18柱，5μm，4.6×250mm5.2.2柱溫：20～35℃。紫外檢測器：檢測波長270nm。高效液相色譜流動相：乙腈-水（26:74）。流速：1.0mL/min。進樣量：10～20μL。色譜分析：取10～20μL峰面積通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。高效液相色譜法測定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖高效液相色譜法測定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別配制濃度為0.004836～1.0104mg/mL的淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進行液相色譜分析，進樣量10μL，以峰面積對進樣量（μg）作標(biāo)準(zhǔn)曲線。分析結(jié)果的表述由y=a+bx得[（yx-a）/b]×V1×10-3×100X=M×V2式中：X——試樣中淫羊藿苷的含量，g/100g；yx——試樣峰面積；V1——試樣稀釋倍數(shù)，mL；M——試樣質(zhì)量，g；V2——樣品進樣量，μg。5.4.2結(jié)果表示計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。技術(shù)參數(shù)準(zhǔn)確度方法的回收率在95.0%～105.0%之間。允許差平行樣相對誤差≤2%。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證1儀器及試藥儀器高效液相色譜儀：附紫外檢測器（UV）島津2010液相色譜儀；AgiLent1100液相色譜儀；島津2010/SPD-M1.1.2超聲波清洗器。試劑除非另有說明，在分析中僅使用重蒸水。純凈水為Milli-Q純水系統(tǒng)二次制備。1.2.1乙醇分析純。乙腈色譜純。稀乙醇（乙醇546mL→1000mL）。樣品前烈立舒膠囊：澳美制藥生產(chǎn)。中國勁酒：勁牌有限公司生產(chǎn)。海狗丸：深圳市寶和堂保健品有限公司出品。標(biāo)準(zhǔn)品：淫羊藿苷（批號：110737-200414，中國藥品生物制品檢定所提供）。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證2樣品及處理固體試樣：取10粒膠囊內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定；或取10g丸劑，研細(xì)，混勻，取約2.5g，精密稱定。精密加入稀乙醇50mL，稱重，超聲處理60分鐘，放冷至室溫，再稱重，加稀乙醇補足減失的重量。濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm膜過濾后作為供試品溶液。液體試樣：取100mL以上液體試樣，混勻，精密吸取50mL，減壓濃縮至近干，用稀乙醇轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)0.45μm標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證3對照品精密稱取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品12.33mg，置25mL量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證4線性及范圍精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5mL，1mL、2mL，分別置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1mL，2mL，3mL，5mL，10mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按給定的色譜條件，分別精密吸取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品進樣量（g）回歸方程為：y=2.2260×106x-1.3159×104，r=0.9998淫羊藿苷在0.09864～4.932μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。（見附圖1）標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證12000000

進樣量（μg） 峰面積積分值100000008000000面積6000000面峰4000000200000000

1 2 3 4 淫羊藿苷進樣量（）

0.098640.19728

2164524280110.394568504510.394568504510.4932120729960.986421414141.479632356712.46653874794.93211020132標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證5檢測限和定量限檢測限精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液（濃度為0.009864mg/mL）1.0mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測定，進樣量10μL。此濃度標(biāo)準(zhǔn)品的峰高為相應(yīng)噪音的峰高的3倍。故本方法的檢測限為0.9864×10-3μg。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證淫羊藿苷檢測限色譜圖標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證定量限精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液（濃度為0.009864mg/mL）1.0mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測定，進樣量10μL，連續(xù)進樣5次，結(jié)果見下表。故本方法的定量限為9.864×10-3μg。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證進樣次數(shù)峰面積積分進樣次數(shù)峰面積積分值平均值RSD%244121.48%124556224838324044424025524597標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證16小時內(nèi)穩(wěn)定性試驗結(jié)果小時峰面積積分值平均值小時峰面積積分值平均值RSD%0119543021171502411719506119025211817750.90%8116495510119228312118178314118900916117880816小時內(nèi)淫羊表標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證重復(fù)性試驗結(jié)果試驗重復(fù)次數(shù)試驗重復(fù)次數(shù)含量取樣量（g）（g/100g）平均值RSD%1.04562.04%10.26741.086910.26741.086920.24941.074530.24851.057840.49981.040950.50001.044060.50301.003970.50311.041980.50381.023690.50561.0474100.75031.0398110.76021.0399120.75101.0465號:QLS050107)12份（低濃度3份，中間濃度6份，高濃度3份），按樣品溶液制備方法制備，依給定色譜條件測定含量標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證儀器精密度取

儀器精密度試驗結(jié)果峰面積積同一供試品溶液，按給定色譜條件重復(fù)進樣6面積積分值

進樣次數(shù) 1234369212343692223452403234834623460740.13%423425145235077362345878

平均 RSD%標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證中間精密度試驗33臺不同的設(shè)備對同一批（QLS050107批）量

測定儀器測定結(jié)果測定儀器測定結(jié)果（g/100g）平均RSD%1島津2010液相色譜儀1.062AgiLent1100液相色譜儀1.091.071.42%3島津2010/SPD-M液相色譜儀1.06標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證8回收率分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液（精密稱取淫羊藿苷29.32mg置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。濃度：0.2932mg/mL）5.0、10.015.0mL，置100mL錐形瓶中，揮干溶劑，取本品(批號:QLS050107)0.25g，共9份，按樣品溶液制備收率測得量-樣品中含量回收率%=×100%對照品加入量回收率試驗結(jié)果量(mg)入量量(mg)入量(mg)2.65374.106899.12%2.65374.1338100.96%2.61401.46604.065198.98%98.45%2.61404.0913100.77%2.60984.023796.45%2.60983.994194.43%2.77195.614596.95%2.77195.682199.26%2.66842.93205.570398.97%98.02%2.66845.580199.31%2.64335.479796.74%2.64335.483496.87%2.65796.876395.92%2.65796.940997.39%2.67884.39806.892995.82%96.81%2.67886.900996.00%2.63706.939897.84%2.63706.942297.89%

對照品加

測得量

回收率%

平均值 總平均% RSD%97.76% 0.87%標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證9專屬性取未加入淫羊藿藥材的空白對照樣品0.5g，按樣品溶液制備方法制備。按給定色譜條件進行測定，結(jié)果未檢測出淫羊藿苷的色譜峰標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證專屬性色譜圖（色譜圖從下到上依次為溶劑、缺淫羊藿陰性、淫羊藿苷對照品、樣品）標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證10耐用性分別采用3根不同商品規(guī)格的色譜柱，對同一批（QLS050107批）依給定測定條件測定含量色譜柱規(guī)格色譜柱規(guī)格測定結(jié)果（g/100g）平均RSD%PhenomenxGemini5μ，C110A，250×4.6mmAgilentC，250×4.6mm181.071.061.060.71%18HiQSilC18W，250×4.6mm，No.00W001691.06標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證11不確定度P±0.050P（k=2）標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證12其他有關(guān)說明采用已建立的方法，測定了不同配方、不同劑型的保健食品中淫羊藿苷的含量。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證中國勁酒中淫羊藿苷的含量測定供試品溶液的制備精密量取本品50mL，減壓濃縮至近干，用稀乙醇轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜濾過，即得。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品12.59mg，置25mL甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0.5mL，1mL，2mL，分別置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取對照品溶液1mL，2mL，3mL，5mL，10mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按給定的色譜條件，分別精密吸取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，注入藿苷標(biāo)準(zhǔn)品進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定法精密吸取供試品溶液10μL值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算供試品溶液中淫羊藿苷的含量。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證海狗丸中淫羊藿苷的含量測定供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，混勻，精密稱取2.5g，精密加入稀乙醇50mL，搖勻，稱重，超聲處理60補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45m濾膜濾過，即得。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備同“中淫羊藿苷的含量測定”項下。測定法精密吸取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積積分值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算供試品溶液中淫羊藿苷的含量。標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證樣品測定結(jié)果試樣名稱試樣名稱含量RSD%中國勁酒2.40×104/100mL0.54%海狗丸1.28×102/100g0.75%標(biāo)準(zhǔn)起草說明和方法學(xué)驗證其他保健食品色譜圖（1中國勁酒；2海狗丸；3淫羊藿苷對照品）保健食品功效成分檢測實例分析實例2HPLC-DAD-MS法同時測定保健食品中六種大豆異黃酮類成分的含量天然藥物及保健食品概況一．天然藥物的特點來源廣泛成分復(fù)雜多樣功效成分不唯一質(zhì)量控制和評價難度大天然藥物及保健食品概況二、保健食品的特點概念來源食品、藥食同源、維生素、礦物質(zhì)質(zhì)量和安全性問題標(biāo)準(zhǔn)功效成分不明確違法添加嚴(yán)重外源性有害殘留物控制穩(wěn)定性、可控性檢測一致性均一性天然藥物及保健食品概況三、天然藥物及保健食品分析檢測的發(fā)展趨勢功效性檢測代謝產(chǎn)物安全性檢測外源性有害殘留物檢測內(nèi)源性有毒物質(zhì)的檢測穩(wěn)定性、可控性檢測一致性均一性色譜質(zhì)譜技術(shù)在天然藥物和保健食品分析中的應(yīng)用一．功效成分檢測（常量、微量）二．安全性檢測（有害殘留、有毒成分）三．穩(wěn)定性和可控性（指紋圖譜技術(shù)）HPLC-DAD-MS在天然藥物和保健食品分析中的應(yīng)用介紹大豆異黃酮類成分概況功效和用途：大豆異黃酮作為天然的植物雌激素，具有泛的關(guān)注和研究。市場概況：我國市場上有關(guān)大豆異黃酮類成分的中藥、天然藥物、植物提取物、保健食品（進口、國產(chǎn)）繁多，質(zhì)量參差不齊。標(biāo)準(zhǔn)概況：目前只控制1-2種成分大豆異黃酮類成分概況R1 OR2中文名稱R文名OH R1R2R3大豆苷元DaidzeinOHHH大豆苷DaidzinO-GluHH染料木素GenisteinOHHOH染料木苷GenistinO-GluHOH黃豆黃素GlyciteinOHOCH3H黃豆黃苷GlycitinO-GluOCH3H大豆異黃酮類成分概況目前大豆異黃酮類成分常見的分析方法：紫外分光光度法薄層掃描法高效液相色譜法這些方法在準(zhǔn)確性、合理性、可操作性等方面均有欠缺，大多數(shù)方法只報道了測定其中1～2實質(zhì)量。標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀S1S2S3S4多成分同時測定？對照品檢測成本單成分同時測定多成分常規(guī)的HPLC 法用于多成分分析1、大豆苷2、黃豆黃苷3、染料木苷4、大豆苷元5、黃豆黃素6、染料木素

12 34 5 6色譜條件液相色譜儀：WatersAlliance2690高效液相色譜儀色譜柱：AgilentzorbaxSB-C18（4.6×150mm,5μ柱溫：25℃流動相：0.2%甲酸-乙腈（梯度）流速：1ml/min檢測波長：DAD時間0.2%甲酸（%）乙腈（%）流動相梯度表時間0.2%甲酸（%）乙腈（%）0min901018min782225min782243min703045min5050樣品測定CRS S3S1 S4S2 S5HPLC-DAD-MS法用于多成分同時測定A B用一個對照品同時測定多個成分——校正因子法校正因子（以染料木素計）染料木甙

濃度(mg/ml)校正因子平均校正因子 RSD(%0.2041.350.4080.2041.350.4081.380.8161.421.6321.392.041.353.061.420.152.180.32.050.62.201.22.081.52.142.252.070.02561.670.05121.620.10241.690.20481.640.2561.660.3841.661.39 2.27黃豆黃甙 2.12 2.94黃豆黃素

1.66 1.46計算因子（以染料木素計）化合物大豆甙

濃度(mg/ml)校正因子平均校正因子 RSD(%0.211.980.211.980.421.920.841.881.681.942.11.993.151.920.0761.210.1521.260.3041.170.6081.230.761.181.141.21.21 2.93常規(guī)法替代法含量常規(guī)法替代法含量(%)RSD(%)含量(%)RSD(%)0.301.080.321.650.071.830.051.790.621.260.611.050.861.630.891.220.061.960.081.920.471.280.461.51中文名稱大豆苷以單成分為對照同時測定多成分時，最大的困難——被測成分的識別？？？A C DFBEHPLC-DAD-MS用于多成分同時測定Mix-standard-72126:DiodeArray8.0e-26.0e-2UA4.0e-22.0e-2

9.6210.5823.20

14.47

25.45

36.57

280Range:9.468e-21.650.00.00 Mix-standard-72124:SIRof6ChannelsES+90

5.00 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 20.00 22.50 25.00 27.50 30.00 32.50 35.00 37.50 40.0023.35 TIC3.36e525.50%9.6310.71

36.5314.47-10Time0.002.505.007.5010.0012.5015.0017.5020.0022.5025.0027.5030.0032.5035.00 37.5040.00HPLC-DAD-MS 提供的信息MIX-CRS-7201Mix-standard-7201165(37.065)MIX-CRS-7201Mix-standard-7201165(37.065)3:SIRof6ChannelsES+100271.08.85e42.658e-1Mix-standard-72012214(37.010) 6:DiodeArray2.658e-1260.42.0e-16:DiodeArray0.0 06:DiodeArrayMix-standard-7201116Mix-standard-7201116(26.026)3:SIRof6ChannelsES+100285.06.61e47.325e-2256.47.325e-25.0e-2 320.46:DiodeArray0Mix-standard-72011046:DiodeArray0Mix-standard-7201104(23.322)3:SIRof6ChannelsES+100255.01.61e3Mix-standard-72011408(23.577)1.0e-10.0

249.4

1.221e-11.221e-1302.46:DiodeArray06:DiodeArray

285.0 417.0433.0447.0Mix-standard-7201878(14.743)

Mix-standard-720166(14.761)1.0e-1

260.4

3:SIRof6Channels1.643e-11001.643e-1

271.0

433.0

2.64e40.0Mix-standard-7201644(10.843)

06:DiodeArrayMix-standard-720149(10.931)6:DiodeArray258.4 8.63e-25.0e-2 321.46:Diode6:DiodeArrayMix-standard-7201587(9.893)

3:SIRof6ChannelsES+1000

285.0

447.0

4.84e41.345e-1Mix-standard-7201441.345e-1Mix-standard-720144(9.805)3:SIRof6ChannelsES+100255.01.53e4

250.4

417.0nm0m/znm0m/z250300350400100125150175200225250275300325350375400425450475500525550575600625650675700725750775800%UA%%UA%%UA%%UA%%UA%%UA%HPLC-DAD-MS 提供的信息中文名稱分子量保留時間UV光譜大豆苷元25426.1218，249，302大豆苷41610.6218，251染料木素27041.3223，260染料木苷43215.9218，260黃豆黃素28428.2218，254，320黃豆黃苷44611.7218，258，320HPLC-DAD-MS條件液相色譜條件：液相色譜儀：WatersAlliance2690高效液相色譜儀色譜柱：AgilentzorbaxSB-C18（4.6×150mm,5μm）柱溫：25℃流動相：0.2%甲酸-乙腈（梯度）流速：1ml/min（DAD）；0.2ml/min（質(zhì)譜檢測器）質(zhì)譜條件：WatersmicromassZQ液質(zhì)聯(lián)用儀，ESI正離子檢測：毛細(xì)管電壓3.0KV，錐孔電壓40v，源溫度120℃，去溶劑溫度150℃。去溶劑氣（N2）流速：300L/hr.離子掃描范圍：100-700m/z；選定m/z255,271,285,417，433和447進行選擇性離子掃描（SIM）HPLC-DAD-MS用于多成分同時測定sample1-72015:DiodeArray9.66 Range:1.35e+28.0e+16.0e+1UA4.0e+1

10.61

14.442.0e+10.0

1.612.02 4.31

19.1620.06

23.04

25.260.0040.00sample1-72012:SIRof6Channels

2.50 5.00 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 20.00 22.50 25.00 27.50 30.00 32.50 35.00 37.509.67 TIC7.66e4%10.70

23.2114.47

19.27

25.27

26.6436.258.98

29.041 Time0.00 2.50 5.00 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 20.00 22.50 25.00 27.50 30.00 32.50 35.00 37.5040.00常規(guī)方法HPLC-DAD計算因子HPLC-DAD-MS對照品替代法應(yīng)用范圍定的線性范圍內(nèi)。分的分析（如黃酮類、皂苷類等）。產(chǎn)品的常規(guī)例行檢測有較大的優(yōu)勢。進一步驗證工作（耐用性考察，如儀器、色譜柱類型、流動相比例、柱溫、PH等優(yōu)勢簡便、快速、高效經(jīng)濟實用改善目前部分對照品嚴(yán)重缺乏的局面新的質(zhì)量控制和評價思路復(fù)雜體系擴展應(yīng)用——膽酸類成分測定（HPLC-ELSD）400.001 2 3300.00200.00Vm

6 74 5 8100.000.005.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00Minutes1、牛黃熊去氧膽酸 2、牛黃膽酸鈉 3、牛黃鵝去氧膽酸4、熊去氧膽酸 5、豬去氧膽酸 6、膽酸7、鵝去氧膽酸 8、去氧膽酸擴展應(yīng)用——低聚糖類成分測定（HPLC-RID）20.0018.0016.0014.0012.0010.00VM8.00

1 3520205 833564 4 5622608750871986.00 9 9983434.00 12.003020.00 2-2.00

0.0010.0020.00

2.00 4.00 6.00 8.0012.00 14.00 16.00 18.00分鐘1、蔗糖（Sucrose）2、蔗果三糖（kestose）3、棉籽糖（Raffinose）4、蔗果四糖（Nystose）5、蔗果五糖（Fructofranosylnystose）6、水蘇糖（Stachyose）擴展應(yīng)用——PUFAs（ω3）類成分測定（HPLC-ELSD）1200.001000.00 1800.002V 600.002m3400.00200.000.000.0024.00

2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00分鐘1、二十碳五烯酸(EPA) 2、二十二碳六烯酸(DHA)3、二十二碳五烯酸(DPA)擴展應(yīng)用——馬兜鈴酸類成分測定（HPLC-DAD-MS）Total100 26100 26.23 53.36

1 5

9.65e52232.03

6457.504447.58%3333.162.11-30.0045.00

5.0050.00

10.0055.00

15.0060.00

20.00 25.00 30.00 35.00

Time

40.001、馬兜鈴酸C 2、7-羥基馬兜鈴酸A 3、馬兜鈴酸D4、馬兜鈴酸B 5、馬兜鈴酸A 6、去硝基馬兜鈴酸A實例3RP-HPLC-RID法同時測定保健食品中6種常見低聚糖的含量提綱一．二．三．總結(jié)與討論一、低聚糖概況低聚糖(Oligosaccharide)或稱寡糖，是由2～10個單糖通過糖苷普通低聚糖兩大類。普通低聚糖：蔗糖、乳糖、麥芽糖、麥芽三糖和麥芽四糖益細(xì)菌雙歧桿菌的增殖因子。功能性低聚糖：包括水蘇糖、棉子糖、異麥芽酮糖、乳酮此它們不被消化吸收而直接進入大腸內(nèi)優(yōu)先為雙歧桿菌所利用，是雙歧桿菌的增殖因子低聚糖概況1999年我國公布的“則行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)”對功能性低聚糖的定義為：功能性低聚糖（functionaloligosaccharide）是由10個相同或不同的單糖，以糖苷鍵聚合而成；具有糖類某些共同的特性，可直接代替糖料作為腸吸收，可到達大腸部；具有促進人體雙岐桿菌的增殖等生理功能。低聚果糖、低聚異麥芽糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚乳果糖、乳酮糖、黑曲霉低聚糖等低聚糖的功能和保健作用促進雙岐桿菌增殖，調(diào)整腸道功能。酸,所以腸內(nèi)的酸堿度(PH值)偏向強酸性,這樣可以抑制病原菌的繁殖,防止人體受到感染。故雙岐桿菌是典型的有益菌群(俗稱長壽菌),增殖。有研究表明:每天攝入10克低聚糖,連續(xù)服用10～15天,腸道內(nèi)的雙岐桿菌活菌數(shù)可增加40倍。目前廣譜和強力的抗菌素廣泛用于各種疾病的治療,但它們在殺死病菌的同時,也使人體腸道內(nèi)正常的菌群可行。低聚糖的功能和保健作用低能量低聚糖很難或不被人體消化吸收,所提供的能量值很低或根本可供糖尿病人、肥胖病人和低血糖病人食用。膳食纖維功能如有降低血清膽固醇的作用,還能促進腸道廢物的排泄,有預(yù)防結(jié)腸癌的作用。低聚糖的功能和保健作用預(yù)防齲齒低聚糖不會引起牙齒齲變,因齲齒是由于口腔微生物特別是突的合適作用的營養(yǎng)底物,因此不會引起牙齒齲變,有利于保持口腔衛(wèi)生。促進生成營養(yǎng)物質(zhì):由于雙岐桿菌在腸道內(nèi)能自然合成微生素B1、B2、B6、B12、能力增強。（6）其他功能：降血脂、降血壓、預(yù)防骨質(zhì)疏松等。低聚糖的功能和保健作用自然界含量少：例如洋蔥、大蒜、天門冬、菊苣根等含有低聚果糖,大豆中含有大豆低聚糖。需要補充：從一般膳食習(xí)慣上看,每天攝取的低聚糖往往很難達到推薦量標(biāo)準(zhǔn)。因此,對于嬰幼兒、老人和工作壓力康尤其是消化系統(tǒng)的健康是非常有益的2003年日本低聚糖保健食品市場分布概況（共54億美元）14.20%4.90%11.20%

2%1.60%2.10%

64%

控制體重防齲齒骨健康調(diào)節(jié)膽固醇我國常見的對低聚糖我國對低聚糖的研究始于上世紀(jì)80模和商品化則在80年代默契。麥芽糖、低聚甘露糖我國衛(wèi)生部批準(zhǔn)的具有改善腸道潤腸通便功能的保健食芽糖、低聚甘露糖等。大豆低聚糖棉子糖、水蘇糖等。其中棉子糖和水蘇糖被稱為大豆低聚糖的主要功效成分。調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用。同時大豆低聚糖還具有抑制病原菌、防止便秘、腹瀉、保護肝用等多種生理功能，另外，大豆低聚糖對糖尿病人可作為糖的替代品。所以，大豆低聚糖類成分在近20并迅速發(fā)展成為一種新型的保健食品。低聚果糖低聚果糖(fructooligosaccharides,FOS)是以蔗糖為原料經(jīng)微生物酶作用而制得的由葡萄糖和果糖組成的雜低聚糖混合物，包括蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)、蔗果六糖(GF5)等低聚糖。低聚果糖漿類似水溶道和潤腸通便功能的保健食品原料。低聚果糖低聚果糖低聚果糖（Fructooligosaccharides，簡稱FOS）是指1-4個果糖基以β-（2→1）糖苷糖連接在蔗糖的D-果糖基上而形成的蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）、蔗果五糖和蔗果六糖（GF5）的混合物。產(chǎn)品中低聚果糖總含量是指蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖和蔗果六糖占干物質(zhì)的百分含量，其中，蔗果六糖含量不得超過FOS總含量的5％，超過部分不計。FOS總含量大于等于50％的產(chǎn)品稱為普通型低聚果糖（G型），總含量大于等于90％的產(chǎn)品稱為高純度低聚果糖（P型）。低聚果糖和大豆低聚糖的主要成分中文名稱英文名稱結(jié)構(gòu)特點蔗果三糖kestoseG-F2蔗果四糖nystose,G-F3蔗果五糖fructofranosylnystoseG-F4蔗糖sucroseG-F1棉籽糖kestoseG-F-Ga1水蘇糖raffinoseG-F-Ga2二、測定方法研究目前低聚果糖和大豆低聚糖類成分常見的分析方法：紫外分光光度法高效液相色譜法這些方法在準(zhǔn)確性、合理性、可操作性等方面均有欠缺，大多數(shù)方法只報道了測定其中1～2個成分的含量，不能較為全面地反應(yīng)產(chǎn)品的真實質(zhì)量。研究目標(biāo)糖類成分的分析方法HPLC-RID法果五糖、水蘇糖共六種成分HPLC-RID 法用于6種成分的測定1、蔗糖2、蔗果三糖3、棉籽糖4、蔗果四糖5、蔗果五糖6、水蘇糖1

色譜條件Waters515高效液相色譜儀，2414視差折光檢測器。蔗糖、蔗果三糖、棉籽糖、蔗果四糖、蔗果五糖、水蘇糖對照品均購自北京禾境科技發(fā)展中心。實驗所用乙腈為色譜純，其他溶劑為分析純，水為純凈水，過Millipore0.22μm濾膜。含大豆低聚糖保健食品樣品共4市售。2色譜條件 色譜柱AgilentzorbaxNH2（4.6m5μm）柱溫5℃；流速min-；流動相由流動相水-乙腈（30：70）等度進行洗脫，視差折光檢測器內(nèi)部溫度設(shè)為35℃；理論塔板數(shù)按蔗糖計算不低于2000。方法3溶液的制備對照品溶液分別精密稱取蔗糖、蔗果三糖、棉籽糖、蔗分別配制成蔗糖為1.19mg·mL-1、蔗果三糖為1.13mg·mL-1棉子糖1.02mg·mL-1、蔗果四糖1.08mg·mL-1、蔗果五糖1.05mg·mL-1、水蘇糖1.12mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液分別精密秤取樣品（市售大豆低聚糖類保健食品，多為粘稠液體）0.5g于25ml的容量瓶中，用流動相溶液定容，充分搖勻，過0.45μm試品溶液。方法4方法與結(jié)果線性關(guān)系考察分別吸取對照品溶液2.0，4.0，8.0，10.0，15.0，20.0μL定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，計算其回歸方程，見表1。結(jié)果表明蔗糖在2.38～23.8μg、蔗果三糖在2.26～22.6μg、棉子糖在2.04～20.4μg、蔗果四糖在2.16～21.6μg、蔗果五糖在2.10～21.0μg、水蘇糖在2.24～22.4μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。6種低聚糖的線性關(guān)系成分 回歸方程 r蔗糖蔗果三糖棉子糖蔗果四糖蔗果五糖水蘇糖

Y5×Y3×Y2×Y2×Y8×Y7×

－1.485×10－1.143×10－1.621×10－1.092×10－2.127×10－2.305×10

0.99950.99930.99940.99970.99910.999220.0018.0016.0014.00A12.00A10.00VM8.00

1 2 03 8

4 5 6

對照品6.004.00

9

9 3.12.000.00

.2-2.0035.00

0.008.0016.00

10.0018.00

2.00分鐘

12.0020.00

4.00 6.0014.0030.0025.00B20.00BVM

5 . 5 . 3 815.0010.005.00

557

410.000.00

2.00

4.00 6.008.0016.00

10.00 12.00 14.0018.00 20.001、蔗糖（Sucrose）

、蔗果三糖（kestose）3、棉籽糖（Raffinose）4、蔗果四糖（Nystose）5、蔗果五糖（Fructofranosylnystose）6、水蘇糖（Stachyose）方法穩(wěn)定性試驗精密吸取供試品溶液10μL，每隔2h.進樣一次，共6果五糖、水蘇糖的RSD分別為0.99%，0.96%，1.21%，1.22%，0.97%，0.87%，表明12h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。精密度實驗分別精密吸取對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，測水蘇糖的RSD分別為（n＝5）0.93%，0.98%，1.11%，1.01%，1.54%，1.03%，表明儀器精密度良好。最低檢測限和定量限以信噪比3:1為標(biāo)準(zhǔn)測得蔗糖、蔗果三糖、棉子糖、蔗果四糖、蔗果五糖、水蘇糖的最低檢測限分別為0.52，0.88，0.61，0.73μg，0.93μg。以信噪比10:1時的進樣量作水蘇糖的定量限分別為2.73，1.73，2.64，2.03，2.43μg，2.79μg。方法重復(fù)性實驗取同一樣品5份，按樣品處理方法平行提取并同法測定6種水蘇糖的RSD分別為1.25%，1.21%，0.96%，0.93%，1.33%,1.14%,表明本法重復(fù)性良好?；厥章试囼灢捎眉訕踊厥章蕦嶒灧椒ā７謩e精密秤取已知含量的1號樣品0.25g共9份，每3份1組，按高、中、低3個水平分別精密加入一定量對照品（相當(dāng)于樣品中各成分含有量的80%，100%