大化實(shí)驗(yàn)三吸光光度法

第二章吸光光度法

2.1光譜分析法概述2.2吸光光度法基本原理2.3目視比色法與可見(jiàn)分光光度法2.4顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇2.5吸光度測(cè)量條件的選擇2.6分光光度法的應(yīng)用1學(xué)習(xí)要求1.了解物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收；2.掌握光的吸收定律；3.掌握比色分析和吸光光度分析方法及其儀器；4.了解顯色劑及顯色反應(yīng)條件的選擇，光度測(cè)定條件的選擇；5.了解吸光光度法的應(yīng)用。2

2.1光譜分析法概述

一、光分析法及其特點(diǎn)

光分析法：基于電磁輻射能量與待測(cè)物質(zhì)相互作用后所產(chǎn)生的輻射信號(hào)與物質(zhì)組成及結(jié)構(gòu)關(guān)系所建立起來(lái)的分析方法；電磁輻射范圍：r射線～無(wú)線電波所有范圍；相互作用方式：發(fā)射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等；光分析法在研究物質(zhì)組成、結(jié)構(gòu)表征、表面分析等方面具有其他方法不可區(qū)代的地位；3三個(gè)基本過(guò)程：（1）能源提供能量；（2）能量與被測(cè)物之間的相互作用；（3）產(chǎn)生信號(hào)。基本特點(diǎn)：（1）所有光分析法均包含三個(gè)基本過(guò)程；（2）選擇性測(cè)量，不涉及混合物分離（不同于色譜分析）；（3）涉及大量光學(xué)元器件。4二、電磁輻射的基本性質(zhì)

電磁輻射（電磁波）：以接近光速（真空中為光速）傳播能量；電磁輻射具有波動(dòng)性和微粒性；

c：光速（3×1010cm/s）

；λ：波長(zhǎng)；ν：頻率；σ：波數(shù)；E：能量；h：普朗克常數(shù)光的波長(zhǎng)越短（頻率越高），其能量越大。

c

描述波動(dòng)性的基本關(guān)系式：λ=—(nm)

ν

粒子性，光電效應(yīng)：光吸收與發(fā)射→光量子→粒子性

c

光子能量：E=hν=h—λ

（普朗克方程）↘，E↗；↗，E↘5輻射能的特性：

(1)吸收物質(zhì)選擇性吸收特定頻率的輻射能，并從低能級(jí)躍遷到高能級(jí)；

(2)

發(fā)射將吸收的能量以光的形式釋放出；

(3)散射丁鐸爾散射和分子散射；

(4)折射折射是光在兩種介質(zhì)中的傳播速度不同；

(5)反射

(6)干涉干涉現(xiàn)象；

(7)衍射光繞過(guò)物體而彎曲地向他后面?zhèn)鞑サ默F(xiàn)象；

(8)偏振只在一個(gè)固定方向有振動(dòng)的光稱為平面偏振光。678三、光分析法分類

一）.光譜法：

基于物質(zhì)與輻射能作用時(shí)，分子發(fā)生能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射的波長(zhǎng)或強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法；光譜法：原子光譜、分子光譜；

91、原子光譜（線性光譜）：基于原子外層電子躍遷的原子吸收光譜（AAS）；原子發(fā)射光譜（AES）、原子熒光光譜（AFS）；基于原子內(nèi)層電子躍遷的X射線熒光光譜（XFS）；基于原子核與射線作用的穆斯堡譜；10

2、分子光譜（帶狀光譜）：

基于分子中電子能級(jí)、振-轉(zhuǎn)能級(jí)躍遷；可見(jiàn)光譜法；紫外光譜法（UV）；

紅外光譜法（IR）；

分子熒光光譜法（MFS）；

分子磷光光譜法（MPS）；

核磁共振與順磁共振波譜（N）；

11原子光譜為線狀光譜，分子光譜為帶狀光譜；為什么分子光譜為帶狀光譜？原子光譜圖分子光譜圖12二）、非光譜法：

不涉及能級(jí)躍遷，物質(zhì)與輻射作用時(shí)，僅改變傳播方向等物理性質(zhì)；偏振法、干涉法、旋光法等；13光分析法光譜分析法非光譜分析法折射法圓二色性法X射線衍射法干涉法旋光法原子吸收光譜原子發(fā)射光譜原子熒光光譜X射線熒光光譜原子光譜分析法分子光譜分析法紫外光譜法紅外光譜法分子熒光光譜法分子磷光光譜法核磁共振波譜法14四、光分析方法的進(jìn)展

1.采用新光源，提高靈敏度級(jí)聯(lián)光源：電感耦合等離子體-輝光放電；激光蒸發(fā)-微波等離子體

2.

聯(lián)用技術(shù)電感耦合高頻等離子體（ICP）—質(zhì)譜激光質(zhì)譜：靈敏度達(dá)10-20g3.新材料光導(dǎo)纖維傳導(dǎo)，損耗少；抗干擾能力強(qiáng)；15

4.交叉電致發(fā)光分析；光導(dǎo)纖維電化學(xué)傳感器

5.檢測(cè)器的發(fā)展電荷耦合陣列檢測(cè)器光譜范圍寬、量子效率高、線性范圍寬、多道同時(shí)數(shù)據(jù)采集、三維譜圖，將取代光電倍增管；光二極激光器代替空心陰極燈，使原子吸收可進(jìn)行多元素同時(shí)測(cè)定；16

在光譜分析中，依據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法稱為吸光光度法,按所用光的波長(zhǎng)不同分為:

紅外吸收光譜：分子振動(dòng)光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍2.51000m,主要用于有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定。

紫外吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍200400nm（近紫外區(qū)），可用于結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。

可見(jiàn)吸收光譜：電子躍遷光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍400750nm，主要用于有色物質(zhì)的定量分析。本章主要講授紫外可見(jiàn)吸光光度法。五、吸光光度法17六、可見(jiàn)吸光光度法特點(diǎn)

比色分析和可見(jiàn)光光度法主要應(yīng)用于測(cè)試樣中微量組分，與滴定分析、重量分析法相比，有如下特點(diǎn)：1、靈敏度高下限一般可達(dá)：10-5~10-6mol/L2、準(zhǔn)確度高相對(duì)誤差：比色法5~6%，光度法2~5%3、操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速4、應(yīng)用廣泛

182.2吸光光度法基本原理一、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收

1．光區(qū)（10～1000m）白光(太陽(yáng)光)：由各種單色光組成的復(fù)合光單色光：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)的光(由具有相同能量的光子組成)光的互補(bǔ):若兩種不同顏色的單色光按一定的強(qiáng)度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補(bǔ)?；パa(bǔ)光：按一定比例混合為白光的兩種光19波長(zhǎng)/nm400~430430~480480~500500~560560~590590~620620~760顏色紫色藍(lán)色青色綠色黃色橙色紅色可見(jiàn)光區(qū)：400-760nm紫外光區(qū)：近紫外區(qū)200-400nm

遠(yuǎn)紫外區(qū)10-200nm（真空紫外）202、物質(zhì)的顏色完全吸收完全透過(guò)吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光Why???

光作用于物質(zhì)時(shí)，物質(zhì)吸收了可見(jiàn)光，而顯示出特征的顏色。物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與光有著密切的關(guān)系，物質(zhì)呈現(xiàn)何種顏色，與光的組成和物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)。21

物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能吸收光的波長(zhǎng)也不同，這就構(gòu)成了物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收基礎(chǔ)。

物質(zhì)選擇性地吸收白光中某種顏色的光，物質(zhì)就會(huì)呈現(xiàn)其互補(bǔ)色光的顏色。

溶液顏色的深淺，取決于溶液中吸光物質(zhì)濃度的高低。

223、光吸收曲線

分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性使其對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度不同；不同波長(zhǎng)的單色光照射，吸光度不同—吸收曲線與最大吸收波長(zhǎng)

max23吸收曲線的討論：（1）同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)λmax（2）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似λmax不變。而對(duì)于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和λmax則不同24吸收曲線的討論：(3)吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。(4)不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長(zhǎng)下吸光度A有差異，在λmax處吸光度A的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。(5)在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。25二、光的吸收基本定律1.吸光度與透光率透光度(透光率)T

:描述入射光透過(guò)溶液的程度:

T=I

t/I0

（T：0~100%）吸光度A＝lg（I0/It)（A：0～∞）吸光度A與透光度T的關(guān)系:

A

＝－lg

T全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%26

2.朗伯(Lambert)定律

布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系。A∝b

3.比耳(Beer)定律

1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系。A∝c

27

A＝lg（I0/It)=εbc

式中A：吸光度；描述溶液對(duì)光的吸收程度；

b：液層厚度(光程長(zhǎng)度)，通常以cm為單位；

c：溶液的物質(zhì)的量濃度，單位mol·L－１；

ε：摩爾吸光系數(shù)，單位L·mol－１·cm－１；

或:A＝lg（I0/It)=abc

c：溶液的濃度，單位g·L－１

a：吸光系數(shù)，單位L·g－１·cm－１

a與ε的關(guān)系為：

a=ε/M

（M為摩爾質(zhì)量）4.朗伯—比耳定律

二者的結(jié)合稱為朗伯—比耳定律，數(shù)學(xué)表達(dá)式285.朗伯—比耳定律的物理意義一束平行單色光通過(guò)有色溶液，溶液的吸光度與溶液的濃度和厚度成正比，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

A＝

lg（I0/It)=εbc

朗伯—比耳定律是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測(cè)定的依據(jù)。應(yīng)用于各種光度法的吸收測(cè)量；29

6.吸光系數(shù)

摩爾吸光系數(shù)ε在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度；吸光系數(shù)a(L·g-1·cm-1）相當(dāng)于濃度為1g/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度。30（1）吸收物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的特征常數(shù)；（2）不隨濃度c和光程長(zhǎng)度b的改變而改變。在溫度和波長(zhǎng)等條件一定時(shí)，ε僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待測(cè)物濃度無(wú)關(guān)；（3）可作為定性鑒定的參數(shù)；（4）同一吸收物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的ε值是不同的。在最大吸收波長(zhǎng)λmax處的摩爾吸光系數(shù)，常以εmax表示。εmax表明了該吸收物質(zhì)最大限度的吸光能力，也反映了光度法測(cè)定該物質(zhì)可能達(dá)到的最大靈敏度。

摩爾吸光系數(shù)ε的討論31（5）εmax越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)，用光度法測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度越高。

ε>105：超高靈敏；

ε=(6～10）×104

：高靈敏；

ε<2×104：不靈敏。（6）ε在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度。32

7.吸光度A的加和性

則總濃度等于各個(gè)組分吸光度之和：

A=A1+A2+..........+An

溶液中有幾種吸光物質(zhì)，彼此間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，則可：33三、標(biāo)準(zhǔn)曲線A

＝－lg

T=εbc

標(biāo)準(zhǔn)曲線：A-C（吸光度-濃度）曲線，又稱校準(zhǔn)曲線或工作曲線

01234C/mol·L-1A。。。。*0.80.60.40.20故由曲線的斜率即可求出ε34四.偏離朗伯—比耳定律的原因

標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯—比耳定律的偏離。引起這種偏離的因素（兩大類）：

（1）物理性因素，即儀器的非理想引起的；

（2）化學(xué)性因素。35（1）物理性因素難以獲得真正平行的純單色光。朗—比耳定律的前提條件之一是入射光為平行的單色光。分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光帶。復(fù)合光可導(dǎo)致對(duì)朗伯—比耳定律的正或負(fù)偏離。

非單色光、雜散光、非平行入射光都會(huì)引起對(duì)朗伯—比耳定律的偏離，最主要的是非單色光作為入射光引起的偏離。

36A克服方法：盡量選用較好的單色器入射波長(zhǎng)選擇在峰值位置（在波峰有一個(gè)A值相差較小的區(qū)域）2.非平行入射光導(dǎo)致光束的平均光程b′大于吸收池厚度b，實(shí)際測(cè)得的吸光度大于理論值，產(chǎn)生正偏離。37

朗—比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用；假定只有在稀溶液(c<10-2mol/L)時(shí)才基本符合，當(dāng)溶液濃度c>10-2mol/L時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對(duì)光的吸收。

故：朗伯—比耳定律只適用于稀溶液。

(2)化學(xué)性因素A散射、假吸收?？朔椒ǎ罕苊馊芤寒a(chǎn)生膠體或渾濁入射光會(huì)因散射而損失，導(dǎo)致T減小，實(shí)測(cè)的A偏高38溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)。使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。例：鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：

2CrO42-＋2H＋=Cr2O72-＋H2O

溶液中CrO42-、Cr2O72-的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。故此時(shí)溶液pH對(duì)測(cè)定有重要影響。392.3目視比色法與可見(jiàn)分光光度法

一.目視比色法

1.用同質(zhì)材料的比色管

2.配制不同量的標(biāo)準(zhǔn)溶液

3.同量的顯色劑，相同的實(shí)驗(yàn)條件，配成一套標(biāo)準(zhǔn)色階

4.待測(cè)物與標(biāo)準(zhǔn)色階的配制條件相同，置于色階中比較顏色度40c4c3c2c1c1c2c3c4特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、可測(cè)微量，復(fù)合光，誤差大。觀察方向觀察方向41

可見(jiàn)分光光度計(jì)二、可見(jiàn)光分光光度法

42一、基本組成光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示1.光源

在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。

可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在320～2500nm。

紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。43

2.單色器

將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；

④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。443.樣品室

樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。4.檢測(cè)器

利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。5.結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)

檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理45二、分光光度計(jì)的類型1.單光束

簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。2.雙光束

自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。463.雙波長(zhǎng)

將不同波長(zhǎng)的兩束單色光(λ1、λ2)快速交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器。產(chǎn)生交流信號(hào)。無(wú)需參比池?！?1～2nm。兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。472.4顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇一、顯色反應(yīng)的選擇1.選擇顯色反應(yīng)時(shí)，應(yīng)考慮的因素

靈敏度高、選擇性高、生成物穩(wěn)定、顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收，兩種有色物最大吸收波長(zhǎng)之差：“對(duì)比度”，要求△>60nm。2.配位顯色反應(yīng)

當(dāng)金屬離子與有機(jī)顯色劑形成配合物時(shí)，通常會(huì)發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移躍遷，產(chǎn)生很強(qiáng)的紫外—可見(jiàn)吸收光譜。483.氧化還原顯色反應(yīng)

某些元素的氧化態(tài)，如Mn（Ⅶ）、Cr（Ⅵ）在紫外或可見(jiàn)光區(qū)能強(qiáng)烈吸收，可利用氧化還原反應(yīng)對(duì)待測(cè)離子進(jìn)行顯色后測(cè)定。

例如：鋼中微量錳的測(cè)定，Mn2＋不能直接進(jìn)行光度測(cè)定

2Mn2＋＋5S2O82-＋8H2O=2MnO4＋

+10SO42-＋16H+

將Mn2＋

氧化成紫紅色的MnO4＋后，在525nm處進(jìn)行測(cè)定。494.顯色劑無(wú)機(jī)顯色劑：硫氰酸鹽、鉬酸銨、過(guò)氧化氫等幾種。有機(jī)顯色劑：種類繁多

偶氮類顯色劑：本身是有色物質(zhì)，生成配合物后，顏色發(fā)生明顯變化；具有性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對(duì)比度大等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂Ⅲ、PAR等。

三苯甲烷類：鉻天青S、二甲酚橙等50二、顯色反應(yīng)條件的選擇1.顯色劑用量

吸光度A與顯色劑用量CR的關(guān)系會(huì)出現(xiàn)如圖所示的幾種情況。選擇曲線變化平坦處。2.反應(yīng)體系的酸度

在相同實(shí)驗(yàn)條件下，分別測(cè)定不同pH值條件下顯色溶液的吸光度。選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)所對(duì)應(yīng)的pH范圍。3.顯色時(shí)間與溫度

實(shí)驗(yàn)確定4.溶劑

一般盡量采用水相測(cè)定，51三、共存離子干擾的消除1.加入掩蔽劑

選擇掩蔽劑的原則是：掩蔽劑不與待測(cè)組分反應(yīng)；掩蔽劑本身及掩蔽劑與干擾組分的反應(yīng)產(chǎn)物不干擾待測(cè)組分的測(cè)定。例：測(cè)定Ti4＋，可加入H3PO4掩蔽劑使Fe3+(黃色)成為Fe(PO４)23-(無(wú)色)，消除Fe3+的干擾；又如用鉻天菁S光度法測(cè)定Al3+時(shí)，加入抗壞血酸作掩蔽劑將Fe3+還原為Fe2+，消除Fe3+的干擾。2.選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)條件3.分離干擾離子52四、提高光度測(cè)定靈敏度和選擇性的途徑1.合成新的高靈敏度有機(jī)顯色劑2.采用分離富集和測(cè)定相結(jié)合3.采用三元(多元)配合物顯色體系

由一個(gè)中心金屬離子與兩種(或兩種以上)不同配位體形成的配合物，稱為三元(多元)配合物。多元配合物顯色反應(yīng)具有很高的靈敏度，一方面是因?yàn)槎嘣浜衔锉绕湎鄳?yīng)的二元配合物分子截面積更大；另一方面是因?yàn)榈诙虻谌湮惑w的引入，可能產(chǎn)生配位體之間、配位體與中心金屬離子間的協(xié)同作用，使共軛π電子的流動(dòng)性和電子躍遷幾率增大。三元配合物主要類型有：三元離子締合物、三元混配配合物、三元膠束(增溶)配合物。532.5吸光度測(cè)量條件的選擇

一.入射光波長(zhǎng)的選擇

一般應(yīng)該選擇λmax為入射光波長(zhǎng)。如果λmax處有共存組分干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。54I0It參比I0′IrI0′

=Ir

+Ia+ItIaI0′IrI0′

–Ir

=Ia+ItI0′

=Ir

+I0

真正進(jìn)入溶液部分的入射光

二.參比溶液的選擇為什么需要使用參比溶液？

測(cè)得的的吸光度真正反映待測(cè)溶液吸光強(qiáng)度。55參比溶液的選擇一般遵循以下原則：

⑴若僅待測(cè)組分與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)物在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，其它所加試劑均無(wú)吸收，用純?nèi)軇ㄋ?作參比溶液；⑵若顯色劑或其它所加試劑在測(cè)定波長(zhǎng)處略有吸收，而試液本身無(wú)吸收，用“試劑空白”(不加試樣溶液)作參比溶液；56

⑶若待測(cè)試液在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而顯色劑等無(wú)吸收，則可用“試樣空白”(不加顯色劑)作參比溶液；

⑷若顯色劑、試液中其它組分在測(cè)量波長(zhǎng)處有吸收，則可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，作為參比溶液。57參比溶液的選擇原則：扣除非待測(cè)組分的吸收A（樣）=A（待測(cè)吸光物質(zhì)）+A（干擾＋池）A（參比）=A（干擾+池）M無(wú)色+R=MR有色試液不只是M試劑不只是R示意圖參比液無(wú)色無(wú)色

MR

溶劑空白有色無(wú)色M’MR試樣空白無(wú)色有色MRR’試劑空白有色有色M’MRR’顯色空白58三.吸光度讀數(shù)范圍的選擇濃度測(cè)量值的相對(duì)誤差（Δc/c）不僅與儀器的透光度誤差ΔT有關(guān)，而且與其透光度讀數(shù)T的值也有關(guān)。

不同的透光度讀數(shù)，產(chǎn)生的誤差大小不同：

－lgT=εbc微分：－dlgT＝－0.434dlnT=-0.434T-1

dT

=εbdc兩式相除得：

dc/c=（0.434/TlgT

）dT

以有限值表示可得：

Δc/c=（0.434/TlgT）ΔT

59濃度測(cè)量值的相對(duì)誤差（Δc/c）不僅與儀器的透光度誤差ΔT有關(guān)，而且與其透光度讀數(shù)T的值也有關(guān)。

是否存在最佳讀數(shù)范圍？何值時(shí)誤差最小？60最佳讀數(shù)范圍與最佳值

設(shè)：ΔT=1%，則可繪出溶液濃度相對(duì)誤差Δc/c與其透光度T的關(guān)系曲線。如圖所示：當(dāng)：ΔT=1%，T在15%～65%之間時(shí)，濃度相對(duì)誤差較小，最佳讀