長(zhǎng)白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營(yíng)養(yǎng)特性研究

延邊大學(xué)本科畢業(yè)論文長(zhǎng)白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營(yíng)養(yǎng)特性研究TheMyceliumTissueIsolationandTheStudyonNutritionalCharacteristicsofWideSparassiacrispaofChangbaiMountain主要內(nèi)容材料與方法前言12結(jié)果與分析3結(jié)論4

前言繡球菌[Sparassiacrispa（Wulf.）Fr.]又名繡球蕈、對(duì)花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窩菌、白繡球花、繡球蘑。分類(lèi)學(xué)上隸屬于擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、非褶菌目、繡球菌科、繡球菌屬（Sparassis）。 繡球菌子實(shí)體肉質(zhì)潔白細(xì)嫩，有茴香氣味，鮮美異常，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，含有17種氨基酸，基本包含所有的必需氨基酸。藥用價(jià)值增加白血球，提高人體免疫力，對(duì)癌細(xì)胞具有直接殺傷作用繡球菌素具抗真菌活性治療高血壓、糖尿病、肝病等多種疾病

本試驗(yàn)對(duì)采自長(zhǎng)白山林區(qū)的野生繡球菌進(jìn)行組織分離，并研究其菌絲體生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件，篩選出適宜長(zhǎng)白山林區(qū)野生繡球菌菌絲生長(zhǎng)的最佳營(yíng)養(yǎng)條件，為開(kāi)發(fā)、利用這一野生資源提供理論依據(jù)。

材料本研究所用野生繡球菌標(biāo)本由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院食用真菌實(shí)驗(yàn)室課題組成員于2010年7月采自長(zhǎng)白山林區(qū)，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)圖力古爾教授鑒定。將標(biāo)本帶回室內(nèi)自然陰干，干燥后即可用于子實(shí)體組織分離菌種，純化培養(yǎng)，獲得試驗(yàn)所用菌株。試驗(yàn)材料供試培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄20g，瓊脂20g，加水至1000ml，pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨2g，MgSO40.5g，瓊脂20g，加水至1000ml，pH自然。試驗(yàn)方法1.組織分離1.1材料及用具野生繡球菌型大、顏色正、無(wú)霉、無(wú)蟲(chóng)害的子實(shí)體，無(wú)菌超凈工作臺(tái)，斜面培養(yǎng)基（10管），剪刀，鑷子，酒精燈1.2組織分離組織分離過(guò)程在超凈工作臺(tái)內(nèi)，整個(gè)過(guò)程要遵循無(wú)菌操作。1.3純化培養(yǎng)

剪刀剪取部分繡球菌子實(shí)體75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的子實(shí)體約1min無(wú)菌剪刀將四周邊緣剪掉選取遠(yuǎn)離基部的組織長(zhǎng)≈0.5㎝寬≈0.2㎝無(wú)菌鑷子夾取酒精燈外焰上方2-3次接種于斜面培養(yǎng)基中下部25℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)12天左右新生長(zhǎng)出的菌絲接種塊接種于平板培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)室純化培養(yǎng)所得菌絲接種于斜面培養(yǎng)基上25℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管后4℃冰箱中保存2.不同碳源對(duì)繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響碳源處理：分別設(shè)置果糖、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、麥芽糖包括葡萄糖各20g為碳源處理，以不加任何碳源為對(duì)照。重復(fù)次數(shù)：5次測(cè)定項(xiàng)目：菌絲長(zhǎng)速，菌絲長(zhǎng)勢(shì)，菌落色澤及菌落邊緣等特征。數(shù)據(jù)分析：采用Excel2003進(jìn)行整理，用SPSS11.5軟件中Duncan檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。氮源處理：以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為標(biāo)準(zhǔn)，分別設(shè)置酵母膏、麩皮、黃豆粉、KNO3、(NH4)2SO4、NH4Cl包括蛋白胨各2g為不同氮源處理，以不加任何氮源為對(duì)照。重復(fù)次數(shù)、測(cè)定項(xiàng)目、數(shù)據(jù)分析同碳源處理。3.不同氮源對(duì)繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響無(wú)機(jī)鹽處理：分別設(shè)置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、CuSO4包括MgSO4各0.5g為不同無(wú)機(jī)鹽處理，以不加任何無(wú)機(jī)鹽為對(duì)照。重復(fù)次數(shù)、測(cè)定項(xiàng)目、數(shù)據(jù)分析同碳源處理。4.不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響結(jié)果與分析

圖2分離純化后的繡球菌菌株1.野生繡球菌組織分離2.不同碳源對(duì)繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長(zhǎng)勢(shì)壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫(xiě)文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個(gè)重復(fù)的平均值±SE。表1不同碳源對(duì)繡球菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Table1TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa碳源CarbonSources日均長(zhǎng)速(mm·d-1)Dryweightofthemycelia(mm·d-1)菌絲長(zhǎng)勢(shì)Myceliumgrowthvigor菌絲色澤Myceliumcolour邊緣整齊度Shapeofmargin淀粉Starch1.14±0.18a+++潔白White整齊Regular乳糖Lactose1.07±0.13a+++乳白milkWhite不規(guī)則Irregular葡萄糖Glucose1.04±0.13a+++乳白milkWhite整齊Regular麥芽糖Maltose1.03±0.09a++淺白White不規(guī)則Irregular果糖Fructose0.72±0.04b+淺白White不規(guī)則Irregular蔗糖Sucrose0.70±0.02b++乳白milkWhite整齊Regular甘露醇Mannitol0.65±0.01b++潔白Whiteness整齊Regular對(duì)照CK0.29±0.02c+淺白White不規(guī)則Irregular圖3不同碳源對(duì)繡球菌菌絲體生長(zhǎng)影響Fig.3TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa3.不同氮源對(duì)繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響表2不同氮源對(duì)繡球菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Table2TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長(zhǎng)勢(shì)壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫(xiě)英文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個(gè)重復(fù)的平均值±SE。氮源NitrogenSources日均長(zhǎng)速（mm·d-1）Averagedayrowthrate(mm·d-1)菌絲長(zhǎng)勢(shì)MyceliumGrowthvigor菌絲色澤Myceliumcolour邊緣整齊度Shapeofmargin酵母膏Microzyme2.03±0.82a+++潔白Whiteness整齊Regular蛋白胨Peptone1.75±0.17ab+++潔白Whiteness整齊Regular硫酸銨(NH4)2SO41.71±0.13ab++淺白White整齊Regular黃豆粉Soybeanmeai1.65±0.11b++乳白MilkWhite不規(guī)則Irregular氯化銨NH4Cl1.57±0.17b++乳白MilkWhite整齊Regular麥麩Bran1.53±0.09b++淺白White不規(guī)則Irregular硝酸鉀KNO31.52±0.10b+淺白White不規(guī)則Irregular對(duì)照CK1.15±0.05c+淺白White不規(guī)則Irregular圖4不同氮源對(duì)繡球菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Fig.4TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa表3不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)繡球菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Table3TheeffectsofdifferentInorganiconthegrowthofmyceliumofSparassiacrispa4.不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長(zhǎng)勢(shì)壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫(xiě)英文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個(gè)重復(fù)的平均值±SE。無(wú)機(jī)鹽inorganic日均長(zhǎng)速(mm·d-1)Averagedayrowthrate(mm·d-1)菌絲長(zhǎng)勢(shì)MyceliumGrowthvigor菌絲色澤Myceliumcolour邊緣整齊度Shapeofmargin硫酸鈣CaSO41.75±0.09a+++潔白Whiteness整齊Regular硫酸鎂MgSO41.53±0.11ab++潔白Whiteness整齊Regular硫酸鋅ZnSO41.47±0.17ab+++乳白MilkWhite整齊Regular硫酸錳MnSO41.37±0.15b++乳白MilkWhite不規(guī)則Irregular對(duì)照CK1.01±0.02c+淺白White不規(guī)則Irregular硫酸銅CuSO40.00±0.00d–––圖5不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)繡球菌菌絲體生長(zhǎng)的影響Fig.5TheeffectsofdifferentInorganiconth