標準解讀

《GB/T 34728-2017 無乳支原體PCR檢測方法》是一項國家標準，旨在規(guī)范無乳支原體（Mycoplasma agalactiae）的聚合酶鏈反應(PCR)檢測技術。該標準詳細規(guī)定了從樣本采集到結果分析的一系列步驟和技術要求，適用于動物源性材料中無乳支原體DNA的定性檢測。

首先，在采樣方面，標準指出了不同類型的樣品應該如何正確地收集與保存，確保所取得的樣本能夠準確反映被檢測對象的真實情況。對于液體樣本如血液或奶液，推薦使用無菌容器直接采集；而對于固體組織，則需先進行適當?shù)奶幚砗笤偃?。所有樣本均應在低溫條件下盡快送至實驗室，并按照特定條件儲存以防止目標DNA降解。

接著是核酸提取環(huán)節(jié)，這是整個PCR檢測流程中的關鍵步驟之一。標準提供了多種有效的DNA提取方法供選擇，包括但不限于酚/氯仿抽提法、硅膠膜吸附法等。無論采用哪種方式，最終目的都是要獲得高純度且足夠用于后續(xù)擴增實驗的模板DNA。

然后進入PCR擴增階段。根據(jù)《GB/T 34728-2017》，應選用特異性引物針對無乳支原體特有的基因序列進行擴增。此外，還對反應體系組成、循環(huán)參數(shù)設置等方面給出了具體指導，確保實驗過程可控且結果可靠。

最后，在結果判定上，《GB/T 34728-2017》明確了陽性對照和陰性對照的重要性，通過比較待測樣品與這些對照之間的電泳條帶差異來確定是否存在目標病原體。同時，也強調了重復性和再現(xiàn)性的要求，保證每次檢測都能得到一致的結果。


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  • 正在執(zhí)行有效
  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T34728—2017

無乳支原體PCR檢測方法

PCRforMycoplasmaagalactiae

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T34728—2017

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物衛(wèi)生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所

:。

本標準起草人儲岳峰趙萍高鵬程陳勝利賀英逯忠新

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T34728—2017

無乳支原體PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了無乳支原體檢測方法的技術要求

PCR。

本標準適用于檢測羊山羊和綿羊臨床樣品和分離培養(yǎng)物中無乳支原體的核酸

()。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

接觸傳染性無乳癥

CA:(ContagiousAgalactia)

Maa無乳支原體Mcolasmaaalactiae

g:(ypg)

聚合酶鏈式反應

PCR:(PolymeraseChainReaction)

核酸電泳緩沖液

TAE:(Tris-Aceticacid-EDTA)

顏色變化單位

CCU:(Colorchangeunit)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNAPolymerase)

脫氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

脫氧核糖核苷三磷酸

dNTPs:(DeoxyribonucleosideTriphosphates)

堿基對

bp:(BasePair)

4儀器器材

41儀器

.

高速冷凍離心機擴增儀核酸電泳儀水平電泳槽恒溫水浴鍋普通冰箱低溫冰箱

、PCR、、、、、(-70℃)、

凝膠成像系統(tǒng)高壓滅菌鍋組織勻漿設備

、、。

42器材

.

微量加樣器無菌濾

(0.5μL~10μL、2μL~20μL、20μL~200μL、100μL~1000μL)、0.22μm

器無菌棉拭子滅菌采樣容器

、、。

5試劑

51反應預混合液含Taq酶和上樣緩沖液

.2×PCR(、dNTPs

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