生物化學(xué)-2蛋白質(zhì)

ProteinstructureProteinChemistry2Toteachisnottofillavasebuttolightafire一、蛋白質(zhì)通論

蛋白質(zhì)是一切生物細(xì)胞和組織的主要組成部分，是生命活動所依據(jù)的物質(zhì)基礎(chǔ)。生物的各種生物功能也都靠蛋白質(zhì)體現(xiàn)。（一）蛋白質(zhì)的元素組成CHONS50%7%23%16%0~3%Others:P、Cu、Fe、Zn、Mn、Co、Se、I

蛋白質(zhì)氮元素的含量都相當(dāng)接近，一般在15%-17％，平均為16％。這是凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量的計算基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)含量＝蛋白氮×6.25（二）蛋白質(zhì)的分類1.按組成成分A.單純蛋白質(zhì)——單純蛋白不含有非蛋白質(zhì)部分。這類蛋白質(zhì)水解后的最終產(chǎn)物只有氨基酸。如清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白精蛋白、組蛋白以及硬蛋白等。B.結(jié)合蛋白質(zhì)——結(jié)合蛋白是指由單純蛋白和非蛋白成分結(jié)合而成的蛋白質(zhì)。如核蛋白、脂蛋白、磷蛋白、糖蛋白、血紅素蛋白、黃素蛋白、金屬蛋白。2.按分子的形狀或空間構(gòu)象A.纖維狀蛋白——分子很不對稱，形狀類似纖維。一般不溶于水。典型的有：膠原蛋白質(zhì)、彈性蛋白質(zhì)、角蛋白質(zhì)、絲蛋白質(zhì)等。OnlyGlyProeasyOnlyGlyOnlyGlyOnlyGly1MajorcomponentofconnectivetissueTendonsSkinLipsB.球狀蛋白質(zhì)——分子的形狀接近球形，空間構(gòu)象比纖維狀蛋白復(fù)雜。球狀蛋白質(zhì)的溶解性較好，能結(jié)晶，生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)大多數(shù)屬于這一類。典型的有：肌球蛋白、血紅蛋白等。Myoglobin(Mb)Hemoglobin(Hb)（三）蛋白質(zhì)的大小與分子量生物大分子是由某些基本單位按一定順序和方式連接所形成的多聚體（polymer），包括蛋白質(zhì)、核酸、脂類及糖等。分子量一般大于10000。O||－O－P－O－

|

O－

NNHNH2|NNHOOHHOHHHCH2OHOHOHOHHOCH2OHHHHCH2－O－CO－R1|CH－O－CO－R2|CH2－OPOR1|||－C－C－N－C－

||R2HlipidsMonosaccharidesNucleotidesAminoacidsmembranesmembranesNucleicAcidsProteinsPhosphodiesterbondPeptidebondGlycosidicbondMonomer

蛋白質(zhì)分子量的變化范圍很大，從大約6000-1000000道爾頓(Da)或更大。某些蛋白質(zhì)是由兩個或更多個蛋白質(zhì)亞基(多肽鏈)通過非共價結(jié)合而成，稱寡聚蛋白質(zhì)。有些寡聚蛋白質(zhì)的分子量可高達數(shù)百萬甚至數(shù)千萬道爾頓。ACPMTKRHDERATKSAcetylcarrierprotein,ACPAcetylCoA:ACPtransacylase,ATMalonylCoA:ACPtransacylase,MT

Ketoacyl-ACPsynthase,KSKetoacyl-ACPreductase,KR.

β-Hydroxybutyryl-ACPdehydrase,HDEnoyl-ACPreductase,ER.（四）蛋白質(zhì)構(gòu)象和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的組織層次1.蛋白質(zhì)構(gòu)象

蛋白質(zhì)分子是由氨基酸首尾相連而成的共價多肽鏈，每一種天然蛋白質(zhì)都有自己特有的空間結(jié)構(gòu)或稱三維結(jié)構(gòu)，這種三維結(jié)構(gòu)通常被稱為蛋白質(zhì)的構(gòu)象。構(gòu)象

是指具有相同結(jié)構(gòu)式和相同構(gòu)型的分子在空間里可能的多種形態(tài)，構(gòu)象形態(tài)間的改變不涉及共價鍵的破裂。一級結(jié)構(gòu)

二級結(jié)構(gòu)三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)多肽連中AA的排列順序,包括二硫鍵的位置（國際純化學(xué)與應(yīng)用化學(xué)委員會(IUPAC)）；二級結(jié)構(gòu)：多肽鏈借助氫鍵形成有規(guī)則的局部結(jié)構(gòu)，如α螺旋、β折疊、β轉(zhuǎn)角，無規(guī)卷曲；三級結(jié)構(gòu)：球狀蛋白質(zhì)在二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，借助次級鍵形成的相對獨立的完整結(jié)構(gòu)。四級結(jié)構(gòu)：具有三級結(jié)構(gòu)的組成單位(亞基)之間的聚合方式。2.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的組織層次一級結(jié)構(gòu)-Ala-Glu-Val-Thr-Asp-Pro-Gly-二級結(jié)構(gòu)超二級結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域三級結(jié)構(gòu)四級結(jié)構(gòu)（五）蛋白質(zhì)的功能1.催化蛋白質(zhì)的一個最重要的生物學(xué)功能是作為有機體新陳代謝的催化劑——酶。酶是蛋白質(zhì)中最大的一類。2.調(diào)節(jié)許多蛋白質(zhì)具有調(diào)節(jié)其他蛋白質(zhì)執(zhí)行其生理功能的能力，這些蛋白質(zhì)稱為調(diào)節(jié)蛋白。3.轉(zhuǎn)運功能是從一地到另一地轉(zhuǎn)運特定的物質(zhì)。4.貯存這類蛋白質(zhì)是氨基酸的聚合物，生物體必要時可利用蛋白質(zhì)作為提供充足氮素的一種方式。5.運動作為運動基礎(chǔ)的收縮和游動蛋白具有共同的性質(zhì)，它們都是絲狀分子或絲狀聚合體。6.結(jié)構(gòu)成分蛋白質(zhì)另一重要功能是建造和維持生物體的結(jié)構(gòu)。7.防御和進攻免疫反應(yīng)（免疫球蛋白）。8.異常功能二、肽（peptide）（一）肽與肽鍵的結(jié)構(gòu)

肽是由一個氨基酸的羧基和另一個氨基酸的氨基脫水縮合而成的化合物。氨基酸間脫水后形成的共價鍵稱肽鍵（酰氨鍵），其中的氨基酸單位稱氨基酸殘基。由兩個氨基酸形成的肽叫二肽，少于10個氨基酸的肽叫寡肽，多于10個氨基酸的肽叫多肽。肽鏈通常有N端寫到C端，如絲氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸寫作：

Ser-Gly-Try-Ala-Leu或SGYAL，如果倒過來寫，則表示不同的肽，如

Leu-Ala-Tyr-Gly-Ser。＋CH3+|H3N－CH－COO－CH2OH

+|H3N－CH－COO－CH3O+|||H3N－CH－C－

CH2OH

|N－CH－COO－|H

N-terminusC-terminus肽鍵PeptidebondH2O丙氨酰絲氨酸的形成①ThebondbetweenthecarbonalcarbonandthenitrogenisshorterthantypicalC－NsinglebondsbutlongerthantypicalC＝Ndoublebonds.C－N＞C::N＞C＝N

②ThebondbetweenthecarbonylcarbonandtheoxygenisslightlylongerthantypicalC=Odoublebonds.C::O＞C＝O

③Peptidebondshavesomedouble-bondpropertiesandcanbestberepresentedasaresonancehybridResonancestructureofthepeptidebondO||CCα2－－Cα1‥N|H‥O|CCα2－－Cα1N|H－+O|CCα2－－Cα1N|H－+δδX-raycrystallographicanalysesofsmallpeptidesN＝C0.127nm鍵長：0.132nmN－C

0.148nm（1）酰胺氮上的孤對電子與相鄰羰基之間的共振作用，形成共振雜化體，穩(wěn)定性高。（2）肽鍵具有部分雙鍵性質(zhì)，不能自由旋轉(zhuǎn)，具有平面性。（3）肽鍵亞氨基在pH0~14內(nèi)不解離。（4）肽鏈中的肽鍵一般是反式構(gòu)型，而Pro的肽鍵可能出現(xiàn)順反兩種構(gòu)型。肽鍵的結(jié)構(gòu)特點O|CCα2－－Cα1N|H－+δδ

肽單位：肽鍵的四個原子和與之相連的兩個α-碳原子所組成的基團。肽單位實際就是一個肽平面（二）肽單位與兩面角

肽鏈中的骨架是由－NH－CRH－CO－單位規(guī)則地重復(fù)排列而成，稱之為共價主鏈(mainchain或backbone)各種肽鏈的主鏈結(jié)構(gòu)都是一樣的，但側(cè)鏈R基的順序即氨基酸殘基順序不同。肽平面與α-碳原子之間形成的二面角(φ和ψ)

兩相鄰肽平面之間能以共同的Cα為定點而旋轉(zhuǎn)，繞Cα-N鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱φ角，繞C-Cα鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱ψ角。φ和ψ稱作二面角，亦稱構(gòu)象角。

Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu（三）肽鏈中AA的排列順序和命名

通常在多肽鏈的一端含有一個游離的-氨基，稱為氨基端或N-端；在另一端含有一個游離的-羧基，稱為羧基端或C-端。氨基酸的順序是從N-端的氨基酸殘基開始，以C-端氨基酸殘基為終點的排列順序。如下面的五肽可表示為：肽鍵和肽的結(jié)構(gòu)絲氨酰-甘氨酰-酪氨酰-丙氨酰-亮氨酸⑴寫出Z字形肽鏈骨架，其鍵數(shù)y＝3n－1(n為該多肽的氨基酸殘基數(shù))；⑵在Z字形肽鏈骨架的左邊寫上－NH3＋，依次寫上Cα，－C＝O，……直至最右邊的－COOH；⑶在Cα原子上寫出相應(yīng)氨基酸的R基團。多肽的書寫規(guī)則Ala-Ser-Cys-AspCHH3＋NO||CN|HCHC||OH|NCHO||CN|HCHCOOH|CH3COOH|CH3|OH|CH2||CH3|SH(四)肽的理化性質(zhì)1.肽的酸堿性質(zhì)主要決定于肽鍵中的游離末端α-NH2、游離末端α-COOH，以及側(cè)鏈R基上的可解離功能團。

2.肽鏈中游離α-氨基和游離α-羧基的間隔一般比氨基酸中的大，因此它們之間的靜電引力較弱。肽中的末端α-羧基的pK’值要比游離氨基酸中的大一些，而末端α氨基的pK’值要比氨基酸中的小一些(表3-8)。R基的pK'值在兩者之間區(qū)別不大。肽α-COOHpK’α-NH3+pK’R基pK’pIGly-Asp2.818.604.53.63Gly-Gly3.068.135.59Ala-Gly3.168.245.70Gly-Ala3.178.235.70Gly-Gly-Gly3.267.915.58Ala-Ala-Ala-Ala3.427.945.68Ala-Ala-Lys-Ala3.588.0110.589.30表3-8肽鏈中游離α氨基和游離α羧基pK值的變化3.兩性離子性質(zhì)和pI

當(dāng)溶液pH大于解離側(cè)鏈的pK’,占優(yōu)勢的離子形式是該側(cè)鏈的共軛堿,當(dāng)溶液的pH小于解離側(cè)鏈的pK’值,占優(yōu)勢的離子形式是它的共軛酸,即：

pH＞pK’→[HA]＜[A－]pH＜pK’→[HA]＞[A－]

凈電荷為零時的溶液pH就是該肽的等電點pI。4.肽的顏色反應(yīng)

黃色反應(yīng)是由硝酸與氨基酸的苯基(酪氨酸和苯丙氨酸)反應(yīng)生成二硝基苯衍生物而顯黃色。

雙縮脲反應(yīng)是多肽特有的顏色反應(yīng)。雙縮脲是兩分子的尿素經(jīng)加熱失去一分子NH3而得到的產(chǎn)物。雙縮脲能夠與堿性硫酸銅作用，產(chǎn)生蘭色的銅-雙縮脲絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。含有兩個以上肽鍵的多肽，具有與雙縮脲相似的結(jié)構(gòu)特點，也能發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成紫紅色或藍(lán)紫色絡(luò)合物。這是多肽定量測定的重要反應(yīng)。OO||||H3N－C－N－C－NH3H（五）天然存在的活性肽

在生物體中，多肽最重要的存在形式是作為蛋白質(zhì)的亞單位。但是,也有許多分子量比較小的多肽以游離狀態(tài)存在。這類多肽通常都具有特殊的生理功能,常稱為活性肽(activepeptide)。如腦啡肽；激素類多肽；抗生素類多肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等。

1.谷胱甘肽（GSH）：三肽（Glu-Cys-Gly），含有自由的巰基,具有很強的還原性,可作為體內(nèi)重要的還原劑,保護某些蛋白質(zhì)或酶分子中的巰基免遭氧化,使其處于活性狀態(tài)。Glu-Cys-Gly|S|S|Glu-Cys-Gly還原型谷胱甘肽氧化型谷胱甘肽

谷胱甘肽存在于動、植物及微生物中：1.參與體內(nèi)氧化還原反應(yīng)2.作為輔酶參與氧化還原反應(yīng)保護巰基酶或含Cys的蛋白質(zhì)中

SH的還原性防止氧化物積累

2.腦啡肽：為五肽，具有鎮(zhèn)痛作用，它們在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中形成，是體內(nèi)自己產(chǎn)生的一類鴉片劑。＋H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO－

Met-腦啡肽＋H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO－

Leu-腦啡肽

3.牛催產(chǎn)素與加壓素：均為九肽，分子中含有一對二硫鍵，兩者結(jié)構(gòu)類似。前者第八位為Leu，后者為Arg。前者可刺激子宮的收縮，促進分娩。后者可促進小動脈收縮，使血壓升高，也有抗利尿作用，參與水、鹽代謝的調(diào)節(jié)。Cys－－|Tyr|Ile|Gln|Asn|Cys－－|Pro|Leu|Gly－NH2S|||||||||SCys－－|Tyr|Ile|Gln|Asn|Cys－－|Pro|Arg|Gly－NH2S|||||||||S牛加壓素牛催產(chǎn)素4.鵝膏蕈堿

與真核生物的RNA聚合酶和牢固結(jié)合NHCOCH2NHCOCHNHCOCH3CHCHOHCH2OHCHHNCNHCHCNHCH2CCOCHNHHOCH2NHNHCHCHCH3CH2CH3COOOOCH2CH2SOOH

5.短桿菌肽S（環(huán)十肽）由細(xì)菌分泌的多肽，有時也都含有D-氨基酸和一些非蛋白氨基酸。如鳥氨酸（Ornithine,縮寫為Orn）。L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val

||L-OrnL-Orn

||L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu三、蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定基本策略：

氨基酸順序直測法＋片段重疊法基本步驟：(1)

測定末端氨基酸數(shù)目,確定蛋白質(zhì)分子是由幾條肽鏈構(gòu)成的；(2)

拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈,斷開多肽鏈內(nèi)二硫鍵并分離出每條肽鏈；(3)

將肽鏈完全水解,測定每條多肽鏈的氨基酸組成；(4)

鑒定多肽鏈N-末端、C-末端氨基酸殘基；

(5)

至少用兩種方法將多肽鏈水解成較小的片段；(6)

分離并測定各肽段的氨基酸序列；(7)

片段重疊法重建完整多肽鏈一級結(jié)構(gòu)；(8)

確定半胱氨酸殘基間形成二硫鍵交聯(lián)橋的位置。（一）測定一級結(jié)構(gòu)的基本策略和步驟(1)純化蛋白質(zhì)(3)多肽鏈的部分裂解(4)多肽片段測序

Edman降解（PITC試劑）(5)多肽鏈的總組裝

(6)二硫鍵位置的確定SS+TDI

SGE

CY

CFFCYK

HNYCFR

KTDI

HNY

GVAGR

GVAGRFRSGEGVAGRFCYKTDIHNYCFRSGEGVAGRFCYKTDIHNYCFRSGE|S|S|用酶法(胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶等)或化學(xué)法(CNBr)將肽鏈裂解成小片段測定每一個多肽片段的序列多肽片段在多肽鏈中測序的決定氧化或還原法分開二硫鍵用不同的方法獲得另一套多肽小片段（二）蛋白質(zhì)測序（總圖）蛋白質(zhì)(二硫鍵相連的兩條不同的多肽鏈)(2-2)斷裂二硫鍵測定每一個多肽片段的序列(2-1)確定蛋白質(zhì)多肽鏈數(shù)

N-末端或C-末端分析Howmanypeptidesinprotein?牛胰島素蛋白中2個N-末端和2個C-末端；N-末端鑒別：1-Dimethylaminonaphthalene-5-sulfonyl

chloride(1-二甲基氨萘-5-磺酰氯)-----Dansylchloride(丹磺酰氯)與肽鏈N-末端第一個游離氨基反應(yīng)，根據(jù)黃色熒光強度來確定。AChainGly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-AsnBChainPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leu-Tyr-Leu-Val-Cys-Gly-Glu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-AlaS|S||S|S||S|S|(2-1)確定蛋白質(zhì)多肽鏈數(shù)（N-末端或C-末端分析）N-末端分析——丹磺酰氯OOOO||||||||H2N－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－||||R1R2R3R4

N(CH3)2||O＝S＝O|ClN(CH3)2||O＝S＝O|

OOOO||||||||NH－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－||||R1R2R3R4

H2N－CH－COO－|R2H2N－CH－COO－|R3H2N－CH－COO－|R4NH－CH－COO－|R1N(CH3)2||O＝S＝O|

OH－HClH2OH++5-Dimethylamino-1-naphthalenesulfonylchloride(dansylchloride)DansylpolypeptideDansylaminoacid(fluorescent)FreeaminoacidsPolypeptideCarboxypeptidaseARn≠Arg,Lys,ProRn-1≠ProCarboxypeptidaseBRn≠Arg,Lys,Rn-1≠ProAminopeptidasescleaveresiduesfromtheN-terminusCarboxy-andamino-peptidasesarecollectivelyknownasexopeptidasesOOOO

||||||||

H2N－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－OH||||Rn-3Rn-2Rn-1

RnH2N－CH－COO－|RnOOO||||||

H2N－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－OH|||Rn-3Rn-2Rn-1H2OCarboxypeptidase+C-末端分析——羧肽酶（Carboxypeptidase

）O||???－NH－CH－C－???|CH2|S|S

|CH2

|???－NH－CH－C－???||O2R－SHO||???－NH－CH－C－???|CH2|SH2+R－S－S－R6HCOOOHO||???－NH－CH－C－???|CH2|SO3H+6HCOOHR－SHHS－CH2－CH2OHMercaptoethanol巰基乙醇HS－CH2－COOHMercaptoaceticacid巰基乙酸HS－CH2－(CHOH)2－CH2－SHDithiotheritol,DTT二硫蘇糖醇(2-2)斷裂二硫鍵（過甲酸氧化法或巰基化合物還原法）用胰蛋白酶（Trypsin）裂解多肽鏈獲得一套多肽片段；（Wedonotknowtheorderofthefragments!!）用CNBr裂解同一多肽鏈獲得另一套多肽片段；（Wedonotknowtheorderofthefragmentsalso!!）通過比對兩套多肽片段，可獲得完整的（原初）多肽鏈。Phe-Trp-Met-Gly-Ala-Lys-Leu-Pro-Met-Asp-Gly-Arg-Cys-Ala-GlnCNBr裂解片段胰蛋白酶裂解片段CNBrCNBrTrypsinTrypsin(3)多肽鏈的部分裂解CNBr裂解多肽的化學(xué)反應(yīng)CH3|

+S－C

N|CH2CH2|－NH－CHC|:NH－CH－C－

|||RO

＝O

+

H3N－CH－C－

|||RO

+PeptidylhomoserinelactoneCH3|S:|CH2CH2|－NH－CHC|:NH－CH－C－

|||RO

＝OCN|BrCyanogenbromide+CH3|

+S－CN

－NH－CHCH2H2CC||N－CH－C－

|||RO

+O

－NH－CHCH2H2COC||OH2O胰蛋白酶（Trypsin）Rn-1=positivelychargedresiduesArg,Lys;Rn

ProChymotrypsinRn-1=bulkyhydrophobicresiduesPhe,Trp,Thr;

Rn

Pro嗜熱菌蛋白酶

Rn

=Ile,Phe,Trp,Thr,Val;Rn-1

ProEndopeptidaseV8Rn-1=GluOOOO||||||||－NH－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－||||RRn-1RnRScissilebond胰蛋白酶等內(nèi)肽酶裂解多肽的位點酸水解結(jié)合堿水解測定

酸水解：

6NHClat120℃for10to100hTrp被破壞，Ser,Thr,和Tyr部分被破壞Gln和Asn分別變?yōu)镚lu和Asp(4)多肽片段測序

堿水解：2to4NNaOHat100℃for4-8h.

蛋白質(zhì)完全水解，色氨酸在水解中不受破壞。水解過程中許多氨基酸都受到不同程度的破壞。部分的水解產(chǎn)物發(fā)生消旋化，產(chǎn)物是D-型和L-型氨基酸的混合物。Inordertoquantitatetheaminoacidresiduesafterhydrolysis,eachmustbederivatizedatabout100%efficiencytoacompoundthatiscolored.Pre-orpost-columnderivatizationcanbedone.ThesecanbeseparatedusingHPLCinanautomatedsetup-eachAAhasknownelutiontime鄰苯二醛氨基酸組成的測定：氨基酸分析儀Edman降解法測序（Phenylisothiocyanate,PITC試劑）Edmandegradationusedtoautomaticallysequencethe<50AApeptidefragmentsSequentiallydegradesinwardfromtheN-terminusPTH-aminoacidisthenidentifiedbysignatureTLC,HPLC,gelelectrophoresis,GLC,etc.

－NH－C－

||S

OOO..||||||

HN－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－···|||R1

R2R3

－N＝C＝S

OOO..||||||

H2N－CH－C－NH－CH－C－NH－CH－C－···|||R1

R2R3

+OO+||||H3N－CH－C－NH－CH－C－···||R2R3

NC||SN|HR1|CHO||CPhenylisothiocyanate(PITC)polypeptideOH－PTCpolypeptideAnhydrousF3CCOOH+H+OriginalpolypeptidelessItsN-terminalresiduePTH-aminoacid1234567891011121314

H3N－Y－R－G－M－D－I－K－Q－M－K－F－A－M－K－COO－Y－R－G－MKF－A－M－KK－F－A－MQ－M－KD－I－K－Q－MG－M－D－I－KY－RTrypsincleavesafterKorR(positivelychargedaminoacids)Q－M－KG－M－D－I－KF－A－M－KY－RCyanogenBromide(CNBr)CleavesafterMeti.eM–XD－I－K－Q－MKK－F－A－MY－R－G－M(5)多肽鏈的總組裝+-+-第二向ab(6)二硫鍵位置的確定第一向pH6.5圖中a，b兩個斑點是由一個二硫鍵斷裂產(chǎn)生的肽段Brown和Hartlay對角線電泳圖解四、蛋白質(zhì)的氨基酸序列與生物功能（一）胰島素（Insulin）胰島素（Insulin）由51個氨基酸殘基組成，分為A、B兩條鏈。A鏈21個氨基酸殘基,B鏈30個氨基酸殘基。A,B兩條鏈之間通過兩個二硫鍵聯(lián)結(jié)在一起，A鏈另有一個鏈內(nèi)二硫鍵。(二)血液凝固與氨基酸序列的局部斷裂血液凝固是一系列復(fù)雜的生物化學(xué)過程。這一過程的主要環(huán)節(jié)有二：一是血漿中的凝血酶原受到血漿和血小板中一些因子的激話而形成凝血酶；二是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶的激活下轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使血液變成凝膠。內(nèi)凝系統(tǒng)外凝系統(tǒng)ⅫⅫa固相激活酶相激活Ⅲ(TF)TF-Ⅶ、Ca2＋Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ、Ca2＋ⅩⅩa凝血酶原Ⅱ凝血酶Ⅱ纖維蛋白原Ⅰ纖維蛋白Ⅰ1.凝血酶原激活物形成2.凝血酶形成3.纖維蛋白形成國際命名的凝血因子

編號中文名英文名因子Ⅰ纖維蛋白原fibrinogen因子Ⅱ凝血酶原prothrombin因子Ⅲ組織凝血酶原tissuethromboplastin因子Ⅳ鈣離子Ca++因子Ⅴ前加速素proaccelerin因子Ⅵ前轉(zhuǎn)變素proconvertin因子Ⅶ抗血友病因子antihemophilicfactor.AHF因子Ⅸ血漿凝血激酶PTC因子Ⅹstuart-protetfactor因子Ⅺ血漿凝血酶前質(zhì)PTA因子Ⅻ接觸因子contactfacpor因子ⅩⅢ纖維蛋白穩(wěn)定因子fibrin-stabilizing1.凝血酶原的激活

凝血酶原（糖蛋白），66000Da，582個氨基酸殘基，N末端含5-6個γ-羧基谷氨酸。凝血酶原Xa催化Arg274-Thr275和Arg323-Ile324斷裂，放出N端片段的同時，形成A、B片段，該兩片段由二硫鍵相連，形成有活性的凝血酶；

凝血酶，分子量為34000，由二條肽鏈通過一個二硫鍵交聯(lián)而成，一條肽鏈（A鏈）含49個殘基，另—條肽鏈含259個殘基。2.凝血酶的形成釋放的肽段AB1274323582SS3.纖維蛋白形成

纖維蛋白原含兩條α鏈、兩條β鏈（461個殘基）和兩條γ鏈。6條肽鏈的N末端部分集中在中間，在這里包括纖維肽（fibrinopeptide）A和B，即能被凝血酶切斷的部分；它們的C末端對稱地分布在分子的兩端。纖維蛋白原分子共含29個二硫鍵，將6條肽鏈交聯(lián)成一個整體分子。H2N-AAH2N-H2N--NH2-NH2-NH2ααBBββγγCOOHBβAαγCOOHCOOHHOOCHOOCHOOCBβAαγSSSS

凝血酶從二條α鏈和二條β鏈的N末端各斷裂一個特定的肽鍵(-Arg-Gly之間的肽鍵)，釋放出二個纖維肽A(19肽)和二個纖維肽B(21肽)。它們都含有較多的酸性氨基酸殘基：纖維肽A：Glu-Asp-Gly-Ser-Asp-Asp-Pro-pro-Ser-Gly-Phe-Leu-The-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg;纖維肽B：CH3CO-Thr-Glu-Phe-Pro-Asp-Tyr-Asp-Glu-Gly-Glu-Asp-Asp-Arg-Pro-Lys-Val-Gly-Leu-Gly-Ala-Arg；H2N-AAH2N-H2N--NH2-NH2-NH2ααBBββγγCOOHBβAαγCOOHCOOHHOOCHOOCHOOCBβAαγSSSSH2N-H2N-H2N--NH2-NH2-NH2ααββγγCOOHβαγCOOHCOOHHOOCHOOCHOOCβαγSSSS凝血酶A、B肽切除后，減少了蛋白質(zhì)分子的負(fù)電荷，促進了纖維蛋白分子的直線