中藥重金屬檢測(cè)

中藥中重金屬檢測(cè)研究進(jìn)展——重金屬免疫檢測(cè)技術(shù)PPT模板下載：/moban/行業(yè)PPT模板：/hangye/節(jié)日PPT模板：/jieri/PPT素材下載：/sucai/PPT背景圖片：/beijing/PPT圖表下載：/tubiao/優(yōu)秀PPT下載：/xiazai/PPT教程：/powerpoint/Word教程：/word/Excel教程：/excel/資料下載：/ziliao/PPT課件下載：/kejian/范文下載：/fanwen/試卷下載：/shiti/教案下載：/jiaoan/

樣品前處理重金屬在實(shí)際樣品中往往以化合物的形態(tài)存在，一般不能直接進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)前進(jìn)行樣品前處理來除去干擾因素，并使金屬離子釋放到液相檢測(cè)環(huán)境中，以便后續(xù)檢測(cè)。基本原則：盡量完整地保留被測(cè)組分使被測(cè)組分得到有效濃縮常用樣品前處理方法濕式消解法干式消解法（灰化法）微波消解法硝酸硝酸-過氧化氫硝酸-高氯酸利用微波的穿透性和激活反應(yīng)能力，在密封裝置內(nèi)，使樣品溫度迅速升高，加入一定量的酸溶液，使樣品中有機(jī)物質(zhì)分解。Cu、As、Cd、PbHg究竟選用哪種方法,主要是根據(jù)分析元素及樣品基體的性質(zhì)而定。重金屬檢測(cè)技術(shù)ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.常規(guī)檢測(cè)技術(shù)新型檢測(cè)技術(shù)

電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP-AES）

比色法

原子吸收光譜法（AAS）

原子熒光光譜法（AFS）

紫外分光光度法

高效液相色譜法（HPLC）

電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）

高效液相-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HPLC-ICP-MS）

陽極溶出伏安技術(shù)（ASV）

免疫法檢測(cè)技術(shù)重金屬檢測(cè)技術(shù)ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.常規(guī)檢測(cè)技術(shù)新型檢測(cè)技術(shù)

電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP-AES）

比色法

原子吸收光譜法（AAS）

原子熒光光譜法（AFS）

紫外分光光度法

高效液相色譜法（HPLC）

電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）

高效液相-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HPLC-ICP-MS）

陽極溶出伏安技術(shù)（ASV）

免疫法檢測(cè)技術(shù)《中國藥典》2010年版一部中采用AAS或ICP-MS對(duì)甘草、丹參、黃芪、金銀花、西洋參、白芍、阿膠及枸杞子這8種藥材中的重金屬量進(jìn)行測(cè)定。

硫代乙酰胺法、砷斑法、銀鹽法操作簡(jiǎn)便準(zhǔn)確度和選擇性差紫外可見光分光光度法高效液相色譜法比色法重金屬+試劑=顯色→在紫外可見光下有吸收快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好干擾多、選擇性差多用于鉛、汞測(cè)定痕量金屬離子+有機(jī)試劑=穩(wěn)定的有色絡(luò)合物多元素同時(shí)測(cè)定絡(luò)合試劑的選擇有限原子熒光光譜法（AFS）檢測(cè)限低于AAS線性范圍寬干擾少操作簡(jiǎn)便靈敏度高應(yīng)用元素有限原子吸收光譜法（AAS）火焰原子吸收分光光度法石墨爐原子吸收分光度法二者常配合使用，前者檢測(cè)速度快，后者靈敏度高3.氫化物原子吸收法檢測(cè)限低、干擾小，但需專門的氫化物發(fā)生器，可檢測(cè)元素較少4.冷原子吸收法只用于含汞元素的測(cè)定電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP-AES）高頻感應(yīng)電流產(chǎn)生高溫，將反應(yīng)氣加熱、電離，利用元素發(fā)出的特征譜線進(jìn)行測(cè)定靈敏度高，檢測(cè)限低，精密度高，線性范圍寬及抗干擾能力強(qiáng)

能將多種金屬元素同時(shí)或順序測(cè)定，測(cè)定速度快

適用于絕大部分金屬元素的測(cè)定彌補(bǔ)了原子吸收法等不能同時(shí)測(cè)定多種元素的不足，在痕量元素分析中占有很大的優(yōu)勢(shì)應(yīng)用較多的是用其檢測(cè)各類中藥材或中藥復(fù)方中各重金屬含量電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）利用電感耦合等離子體將樣品汽化，使待測(cè)金屬元素分離出來，再進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定綜合ICP較高的離子化能力和MS的高分辨、高靈敏度及連續(xù)測(cè)定多種元素等的優(yōu)點(diǎn)，只需一次處理樣品，一次上機(jī)就可以同時(shí)給出測(cè)試結(jié)果，可與多種進(jìn)樣或分離技術(shù)聯(lián)用更低的檢出限，更寬的線性范圍，更強(qiáng)的抗干擾能力，更高的精密度及分析速度，可以提供精確的同位素信息，是目前痕量分析領(lǐng)域最先進(jìn)的方法其價(jià)格較為昂貴，應(yīng)用最多的仍然是對(duì)中藥重金屬的含量測(cè)定高效液相-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-ICP-MS）中藥中重金屬檢測(cè)大部分是測(cè)定中藥樣品中待測(cè)元素的總量，但僅依靠測(cè)定元素總量來評(píng)價(jià)毒理作用是片面的，關(guān)鍵是要分析元素的形態(tài)用HPLC將樣品中各元素形態(tài)進(jìn)行有效分離，再用ICP-MS進(jìn)行測(cè)定融合HPLC高效分離及ICP-MS低檢出限、寬線性范圍、能跟蹤多種元素及同位素信號(hào)等優(yōu)點(diǎn)目前多用于中藥中砷形態(tài)的分析和鎘含量的測(cè)定免疫法檢測(cè)技術(shù)一種輔助檢測(cè)方法用于現(xiàn)場(chǎng)抽檢，批量樣品快速掃描等檢驗(yàn)省時(shí)、省力、便于攜帶、易于操作、費(fèi)用低廉，靈敏度高和選擇性強(qiáng)重金屬離子本身為小分子物質(zhì)，不具備免疫原性和反應(yīng)原性，不能直接免疫動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體金屬離子帶有電荷，能與生物分子發(fā)生不可逆反應(yīng)導(dǎo)致動(dòng)物中毒免疫原性：刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞的能力反應(yīng)原性：與抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的能力既有免疫原性，又有反應(yīng)原性的物質(zhì)稱為完全抗原只有免疫原性，沒有反應(yīng)原性的物質(zhì)稱為半抗原只有設(shè)計(jì)金屬離子成為完全抗原，才能制備出單克隆抗體，進(jìn)而建立重金屬離子的免疫檢測(cè)方法前提工作選擇適當(dāng)?shù)慕j(luò)合物跟重金屬離子特異性結(jié)合，讓其具有一定的空間結(jié)構(gòu)，然后產(chǎn)生反應(yīng)原性，進(jìn)而能與相應(yīng)抗體產(chǎn)生特異性結(jié)合；將結(jié)合了金屬離子的化合物連接于載體蛋白上，產(chǎn)生免疫原性，便能制備出相應(yīng)抗體重金屬離子絡(luò)合物載體蛋白反應(yīng)原性（與抗體結(jié)合）免疫原性(產(chǎn)生抗體)關(guān)鍵：尋找合適的絡(luò)合物，即雙功能螯合劑目前常用的雙功能螯合劑：乙二胺四乙酸（EDTA）二乙烯三胺五乙酸（DTPA）載體蛋白：血藍(lán)蛋白（KLH）牛血清白蛋白（BSA）由于載體蛋白會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)針對(duì)其自身的抗體，為了減少干擾，篩選出重金屬-螯合物特異性的抗體，需合成與其他載體蛋白（如卵清蛋白（OVA））偶聯(lián)的復(fù)合物作為篩選用的檢測(cè)抗原。Cu(II)-DTPA-BSA：免疫抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體Cu(II)-DTPA-OVA：檢測(cè)抗原，也成包被抗原，固定在板上，用于篩選檢測(cè)重金屬離子的免疫檢測(cè)采用抗原抑制檢測(cè)的方法，按照抗體的種類分類：

單克隆抗體免疫檢測(cè)間接競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)(ELISA)一步法免疫檢測(cè)KinExA免疫檢測(cè)等

多克隆抗體免疫檢測(cè)熒光偏振免疫檢測(cè)(FPIA)膠體金快速免疫層析檢測(cè)法(CGEIA)目前應(yīng)用較多的是ELISA檢測(cè)法。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)技術(shù)較為成熟樣本前處理簡(jiǎn)單，便于大批量樣本快速檢測(cè)可以適應(yīng)重金屬殘留含量的微、痕量分析直接法間接法競(jìng)爭(zhēng)法……主要步驟1.單克隆抗體的制備2.單抗的鑒定3.Cu(II)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立4.間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法與ICP-AES法的比較1.單克隆抗體的制備制備完全抗原：通過雙功能螯合劑DTPA（p-SCN-Bn-DTPA）螯合Cu（Ⅱ），再分別與BSA、OVA偶聯(lián)，制備免疫完全抗原和檢測(cè)完全抗原動(dòng)物免疫：BALB／c小鼠首次免疫：Cu（Ⅱ）-DTPA-BSA+等量弗氏完全佐劑間隔14d，Cu（Ⅱ）-DTPA-BSA+弗氏不完全佐劑融合前3d，Cu（Ⅱ）-DTPA-BSA，直接腹腔注射加強(qiáng)免疫。Cu(II)-DTPA-BSA：免疫抗原Cu(II)-DTPA-OVA：檢測(cè)抗原，包被抗原細(xì)胞融合及篩選：免疫小鼠脾細(xì)胞+SP2/0細(xì)胞(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)篩選陽性雜交瘤細(xì)胞株（即可產(chǎn)生抗體，又可在體外無限繁殖，但效價(jià)低）腹水單抗的制備：注射陽性細(xì)胞株細(xì)胞，10d后根據(jù)小鼠生長狀況采集腹水。離心取上清，得腹水單抗2.單抗的鑒定腹水效價(jià)的測(cè)定單抗亞型的鑒定單抗特異性的檢測(cè)：間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。用Cu（Ⅱ）-DTPA-OVA包被酶標(biāo)板加入DTPA（pH8.0），10μl／孔；加入不同濃度的金屬離子Co（Ⅱ）、Pb（Ⅱ）、Hg（Ⅱ）、Fe（Ⅲ）、Mn（Ⅱ）、Mg（Ⅱ）、Zn（Ⅱ）、Al（Ⅲ）、Ca（Ⅱ）、Cr（Ⅲ），80μl／孔；加入10μl單抗腹水計(jì)算交叉反應(yīng)率（CR）3.Cu(II)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立最佳包被抗原（Cu(II)-DTPA-OVA）濃度及抗體工作濃度的確定用不同濃度的Cu(II)-DTPA-OVA作為包被抗原，加入梯度稀釋的腹水單抗，測(cè)定A450

值。以抗體稀釋倍數(shù)為橫坐標(biāo)，A450值為縱坐標(biāo)，繪制曲線，選擇斜率良好，A450值在1.0左右的抗原抗體濃度作為反應(yīng)濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及最低檢測(cè)限的確定最佳抗原濃度包被酶標(biāo)板，加入DTPA，10μl／孔加入不同濃度的Cu（Ⅱ）（0、10、50、125、250、500、2000和5000ng／ml），80μl／孔，混勻加入最佳工作濃度的腹水單抗，10μl／孔測(cè)定A450值。Cu(II)DTPAOVACu(II)DTPAOVACu(II)DTPAOVACu(II)DTPACu(II)DTPACu(II)DTPACu(II)Cu(II)DTPADTPAYYYYYY37℃孵育1h；洗滌3次Cu(II)DTPAOVACu(II)DTPAOVACu(II)DTPAOVAYYHRPTMB測(cè)定A450