LY/T 2896-2017大熊貓種群遺傳檔案建立技術(shù)規(guī)程

ICS65020

B65.

中華人民共和國林業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

LY/T2896—2017

大熊貓種群遺傳檔案建立技術(shù)規(guī)程

Aregulationforgiantpandapopulationgeneticarchives

2017-10-27發(fā)布2018-01-01實(shí)施

國家林業(yè)局發(fā)布

LY/T2896—2017

目次

前言

…………………………Ⅲ

范圍

1………………………1

術(shù)語和定義

2………………1

采樣頻次時間和路線

3、……………………1

采樣頻次與時間

3.1……………………1

采樣路線

3.2……………1

樣品的采集和保存方法

4…………………1

采樣工具

4.1……………1

糞便新鮮程度的判定

4.2………………2

糞便樣品的選取原則

4.3………………2

樣品采集方法

4.4………………………2

樣品記錄與編號

4.5……………………2

樣品的臨時保存

4.6……………………2

樣品的運(yùn)輸和實(shí)驗(yàn)室保存

4.7…………3

樣品的提取和保存方法

5DNA…………3

糞便樣品的提取

5.1DNA……………3

的保存

5.2DNA…………………………3

遺傳標(biāo)記選用原則

6………………………3

線粒體標(biāo)記

6.1…………………………3

性別鑒定分子標(biāo)記

6.2…………………3

微衛(wèi)星標(biāo)記

6.3…………………………3

實(shí)驗(yàn)流程

7…………………4

質(zhì)量檢測和線粒體標(biāo)記擴(kuò)增

7.1DNAPCR…………4

個體識別

7.2……………4

性別鑒定

7.3……………4

遺傳多樣性評估

7.4……………………4

線粒體標(biāo)記擴(kuò)增方法

8PCR………………4

引物合成

8.1……………4

擴(kuò)增體系及程序

8.2PCR………………4

大熊貓性別鑒定方法

9PCR………………5

擴(kuò)增引物的合成

9.1PCR………………5

擴(kuò)增體系及程序

9.2PCR………………5

電泳檢測

9.3……………5

性別判讀

9.4……………5

微衛(wèi)星標(biāo)記擴(kuò)增方法

10PCR……………5

Ⅰ

LY/T2896—2017

引物的設(shè)計合成與熒光標(biāo)記

10.1PCR、………………5

擴(kuò)增的反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序

10.2PCR………………5

產(chǎn)物的質(zhì)量檢測

10.3PCR……………6

微衛(wèi)星分型

10.4…………………………6

微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)的應(yīng)用

10.5……………6

種群遺傳檔案的內(nèi)容

11……………………6

采樣數(shù)據(jù)

11.1……………6

線粒體標(biāo)記測序數(shù)據(jù)

11.2………………6

性別鑒定數(shù)據(jù)

11.3………………………6

微衛(wèi)星標(biāo)記分型數(shù)據(jù)

11.4………………6

研究報告

11.5……………6

遺傳檔案數(shù)據(jù)的管理和使用

12……………7

附錄規(guī)范性附錄大熊貓糞便樣品采集記錄表

A()……………………8

附錄規(guī)范性附錄大熊貓微衛(wèi)星標(biāo)記編號名稱核心序列及來源

B()、、………………9

附錄規(guī)范性附錄大熊貓微衛(wèi)星標(biāo)記名稱擴(kuò)增引物及擴(kuò)增長度

C()、PCR…………10

Ⅱ

LY/T2896—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由國家林業(yè)局保護(hù)司提出并歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位四川大學(xué)中國科學(xué)院動物研究所中國大熊貓保護(hù)研究中心成都大熊貓繁育研

:、、、

究基地四川省野生動物資源調(diào)查保護(hù)管理站

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人岳碧松魏輔文李德生沈富軍楊旭煜古曉東張玲陳浩

:、、、、、、、。

Ⅲ

LY/T2896—2017

大熊貓種群遺傳檔案建立技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大熊貓樣品采集保存提取性別鑒定個體識別遺傳多樣性評估和種群遺傳

、DNA、、、

檔案建立的技術(shù)和方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于圈養(yǎng)大熊貓和野生大熊貓

。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

21

.

微衛(wèi)星序列microsatellitesequence

基因組中由個個核苷酸為基本重復(fù)單元組成的串聯(lián)重復(fù)序列例如

1~6DNA,(AC)n、(ACG)n、

等也稱短串聯(lián)重復(fù)序列或簡單重復(fù)序列

(ATTT)n,(shorttandemrepeats,STR)(simplesequences

在個體間重復(fù)次數(shù)發(fā)生變化的多態(tài)性微衛(wèi)星位序列可以作為微衛(wèi)星標(biāo)記使用

repeats,SSR)。,。

22

.

DNA樣品DNAsamples

利用大熊貓組織如毛發(fā)血液精液肌肉組織等或新鮮糞便提取的大熊貓基因組

(、、、)DNA。

3采樣頻次時間和路線

、

31采樣頻次與時間

.

野生大熊貓樣品的采集可結(jié)合保護(hù)區(qū)監(jiān)測和巡護(hù)等日常工作常年進(jìn)行

。

野生大熊貓樣品大規(guī)模集中采樣可在春季化雪后繁殖季節(jié)和冬季積雪前非繁殖季節(jié)開展對

()();

于交通比較方便的大熊貓分布密集區(qū)可以根據(jù)具體情況和工作目標(biāo)增加采樣次數(shù)各地可根據(jù)當(dāng)?shù)?/p>

,。

大熊貓的習(xí)性以及當(dāng)?shù)氐奈锖驓夂虼笮茇堉魇持癜l(fā)筍規(guī)律野外工作條件和后勤保障等因素確定具

、、、