標準解讀

《NY/T 680-2003 禽白血病病毒P27抗原酶聯免疫吸附試驗方法》是一項農業(yè)行業(yè)標準，旨在提供一種檢測禽類樣本中禽白血病病毒（ALV）P27抗原的方法。該標準詳細描述了使用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）技術來定性或定量分析禽類組織、血液等樣本中的P27抗原水平。P27是一種由禽白血病病毒編碼的蛋白質，在病毒感染過程中扮演重要角色，因此其存在與否可以作為判斷是否感染禽白血病的一個重要指標。

根據此標準，整個實驗流程包括但不限于以下幾個關鍵步驟：

  • 樣本準備：需要從待測動物身上采集合適的生物材料，如血清或其他體液。
  • 包被板制備：將特異性識別P27抗原的抗體固定于固相載體上。
  • 加樣與反應：向包被有抗體的微孔板中加入待檢樣品，并讓其充分作用一段時間，以便目標抗原能夠與固相上的抗體結合。
  • 洗滌去除未結合物質后，再加入另一種標記有酶的抗體，這種抗體同樣能特異性地與P27抗原結合。
  • 再次洗滌并添加底物溶液，通過酶催化底物產生顏色變化。
  • 最后一步是讀取結果，通常借助于酶標儀測量每個孔內的吸光度值，從而間接反映出樣品中P27抗原的含量。


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  • 2003-07-30 頒布
  • 2003-10-01 實施
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文檔簡介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶聯免疫吸附試驗方法

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２００３０７３０發(fā)布２００３１００１實施

中華人民共和國農業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６８０—２００３

前言

本標準的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標準由農業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出并歸口。

本標準起草單位：農業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標準主要起草人：陳西釗、蘇敬良、王宏偉、田克恭、吳清民、王傳彬。

Ⅰ

書

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶聯免疫吸附試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了禽白血病病毒（ＡＬＶ）ｐ２７抗原酶聯免疫吸附試驗方法。

本標準適用于檢測雞蛋蛋清以及雞胚組織細胞培養(yǎng)物中的ＡＬＶｐ２７蛋白抗原。

２狆２７抗原酶聯免疫吸附試驗

２．１試驗材料

２．１．１試劑

２．１．１．１抗ｐ２７蛋白抗體：應用提純的禽成髓細胞性白血病病毒ｐ２７蛋白免疫家兔制備。

２．１．１．２陽性抗原：含雞白血病／肉瘤病毒群特異性ｐ２７蛋白抗原的雞蛋清。

２．１．１．３陰性抗原：無雞白血病／肉瘤病毒群特異性ｐ２７蛋白抗原的ＳＰＦ雞蛋清。

２．１．１．４酶結合物：辣根過氧化物酶標記的抗ｐ２７蛋白抗體。

２．１．１．５磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）：配制見第Ａ．１章。

２．１．１．６包被液：配制見第Ａ．２章。

２．１．１．７洗滌液：配制見第Ａ．３章。

２．１．１．８樣品稀釋液：配制見第Ａ．４章。

２．１．１．９底物溶液：配制見第Ａ．６章。

２．１．１．１０終止液：配制見第Ａ．７章。

２．１．２器材

ａ）酶聯檢測儀；

ｂ）聚苯乙烯板；

ｃ）微量加樣器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｄ）３７℃恒溫培養(yǎng)箱。

２．１．３樣品

２．１．３．１雞蛋樣品：將待檢雞蛋小的一端朝上放置，打碎蛋殼，用移液器無菌吸取蛋清，密裝于滅菌小

瓶內。

２．１．３．２細胞培養(yǎng)物：用移液器無菌吸取細胞培養(yǎng)物，密裝于滅菌小瓶內，４℃或－３０℃保存或立即送

檢。試驗前將送檢樣品統(tǒng)一編號，試驗時不做稀釋。

２．２操作方法

２．２．１用包被液將抗ｐ２７蛋白抗體作４０００倍稀釋，每孔１００μＬ加入９６孔聚苯乙烯板中，４℃過夜。

２．２．２取出包被好的聚苯乙烯板，將液體倒棄，每孔加２５０μＬ洗滌液漂洗三次，每次２ｍｉｎ，甩干。

２．２．３每孔加１５０μＬ質量濃度為１％的明膠封閉液，３７℃反應６０ｍｉｎ。

２．２．４重復２．２．２。

２．２．５在Ａ１、Ａ２孔各加１００μＬ標準陰性對照，Ａ３、Ａ４孔各加１００μＬ標準陽性對照。

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