檢材及檢材處理課件

9月1日2006年第二章檢材及檢材處理（續(xù)）月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年可供選用的方法月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年1．預處理預處理是前處理的第一步，包括檢材制備、調整酸堿度、去除蛋白及結合物的水解等。

月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年（2）調整酸、堿度理論酸性物質，抑制解離最適宜的pH值是低于該毒物的pKa值1～2；堿性毒物，則宜高于該毒物的pKa值1～2；具酸、堿兩性的毒物也可尋找一最佳pH條件，抑制其解離。在調節(jié)酸堿度時，還應考慮到毒物本身的穩(wěn)定性等具體情況。例如，某些具有酯、酰胺、亞酰胺、甙鍵等結構的化合物，在酸性或堿性條件下有可能分解，必要時需采用緩沖液來保持酸堿度。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年（3）去除蛋白質有些檢材富含蛋白質，蛋白質要干擾檢測，蛋白質方法很多，各種方法有各自特點及適用范圍。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

沉淀蛋白質方法方法試劑主要適合分離的毒物①加入與水混溶的有機溶劑無水乙醇、甲醇、乙腈、丙酮等酸性、中性及堿性毒物②加入無機鹽類常用硫酸銨堿性毒物及其代謝物③加入酸性沉淀劑三氯醋酸、高氯酸、鎢酸、苦味酸酸性、中性毒物④加入重金屬鹽類汞鹽、銅鹽、鋅鹽等酸性、中性及堿性毒物月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年酸水解法如對嗎啡、吩噻嗪類、巴比妥類等都能顯著提高回收率，但對不耐熱或遇酸易水解的物質如烏頭堿、阿托品、可卡因、撲熱息痛、安定、利眠寧等不適用。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年酶水解法在一定pH值及常溫條件下，酶能使生物檢材如組織、血液中呈結合狀態(tài)的毒物釋放出來。酶消化法的優(yōu)點是消化作用溫和，凈化程度好，避免了某些毒物的分解。缺點是消化時間較長，試劑不易保存。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年2．液‐液提取法物質在不同溶劑中有不同的溶解度。當兩種互相不混溶的溶劑共存時，溶質在這兩種溶劑中分配的溶解量不同。利用這一性質將溶質從一種溶劑中轉移到另一種溶劑中的過程稱為液‐液萃取。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

萃取可以將所需組分從水相轉移到有機溶劑中去，也可使之從有機溶劑轉移到水溶液中，后者常稱作反萃取或反提。萃取或反萃取的效率主要取決于分配比。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年分配比與萃取效率當溶質在互不相溶的兩種溶劑中溶解分配達到平衡時，兩相中該溶質的濃度比分配比（distributioncoefficient），以D表示如下月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

CO

為有機相中該溶質的濃度

CA為水相中該溶質的濃度

W0為兩相中溶質的總量

W1為一次萃取后水相中的溶質留存量

VO為有機溶劑的體積

VA為水的體積

月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年在實際中，由于溶劑不可能完全不混溶，被萃取液體積及其濃度也可能改變，故萃取效率不可能與以上計算完全一致，但如果測得分配比后，可據(jù)此估算，以比較萃取方法的優(yōu)劣。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年萃取方法液‐液萃取應制備適當?shù)乃嗖⑦x擇適當?shù)挠袡C溶劑。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年有機溶劑一些難溶于有機溶劑的，如季銨鹽等，不宜用液‐液萃取，可改用液‐固萃取。因水相中常含多種其他組分，選用溶劑時還應考慮到能使那些不需要的組分不進入或少進入有機相。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年萃取方式萃取可采用一次、多次或連續(xù)萃取等方式。乳化問題可通過長時間靜置、鹽析、加破乳劑或高速離心等辦法解決。連續(xù)萃取是一種反復循環(huán)萃取的方式，其優(yōu)點是避免多次萃取的繁瑣操作、減少有機溶劑的用量、避免乳化發(fā)生等；但費時較長，不宜使用混合溶劑，也不宜用于反萃取。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年注意①避免毒性②減少乳化③脫水劑脫水④避免反應（如氯仿與胺類毒物）⑤防止毒物損失及燃燒事故月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年改良Stas‐Otto法當分析目標不夠明確，或疑有多種理化性質不同的毒物存在時可采用改良Stas‐Otto法月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年液‐固提取法

（liquid-solidextraction）應用廣泛的檢材前處理方法，根據(jù)固定相填料的種類不同可分為正相固相萃取、反相固相萃取、離子交換固相萃取等。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年正相固相萃取填料多為硅膠，鍵合有極性基團，如丙氰基、二醇基、丙氨基等。柱上的保留行為取決于極性化合物分子結構中的極性基團與硅膠鍵合相上的極性基團之間的相互作用。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年離子交換固相萃取陰離子交換柱的填料通常是將脂肪族季銨鹽鍵合在硅膠上。季銨鹽堿性很強，帶有正電荷，能夠將帶負電荷的化合物保留在柱上而與雜質分離開。

選擇合適的pH條件是實現(xiàn)高效萃取的關鍵。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

除了上述三種類型的固相萃取柱外，還有的固相萃取是利用吸附作用或分子篩作用實現(xiàn)待檢物的分離。這類固相柱的填料包括無鍵合硅膠、三氧化二鋁、硅膠鎂、石墨、大孔樹脂等，適用于極性和非極性毒物的萃取。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年固相柱基本構造圖月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年三種洗脫方式月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年可通過減壓抽吸或加壓方式提高效率可以避免液‐液萃取所帶來的許多麻煩，比如乳化、低回收率及廢液等。而且操作簡單，處理樣品快。要根據(jù)分離對象的不同通過實驗篩選合適的固定相材料、洗脫條件（包括洗脫所用溶劑、洗脫時間等）。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

固相微萃取

（solidphasemicroextraction，SPME）萃取頭伸入檢樣中或置于樣品上部空間，保留一定時間，待檢物吸附于其上后取出纖維頭。在進行氣相色譜（gaschromatography，GC）或高效液相色譜（highperformanceliquidchromat-ography，HPLC）分析時，將纖維頭直接插入儀器，利用熱解吸附或流動相將待檢毒物洗脫下來進行檢測。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年簡單方便，快速，集采樣、萃取、濃縮、進樣為一體。但該法的缺點是纖維頭的壽命不長圖2-12SPME器械圖左：SPME手柄中：SPME萃取頭右：SPME的總裝置圖月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

圖2‐9SPME‐GC及SPME‐HPLC分析示意圖收回萃取頭插入檢樣瓶收回萃取頭伸出萃取頭吸附待測物插入GC進樣口熱解吸樣品插入LC進樣口流動相解吸收回萃取頭進入柱子流動相月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年三、其他前處理技術實現(xiàn)提取、分離目的或提高檢測的靈敏度、準確度及擴大檢測對象范圍，比如化學衍生化、柱切換等技術。這些技術還能簡化繁瑣的操作過程，尤其是柱切換技術使在線凈化富集待檢物能簡便、快速地實現(xiàn)。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年化學衍生化在一定條件下，利用某些特殊的試劑與毒物反應，使生成的衍生化產(chǎn)物更有利于在色譜儀上進行分離和檢測。擴大了色譜法的應用范圍，使得一些難于直接用氣相色譜法或液相色譜法檢測的毒物也能夠被檢測出來。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

在氣相色譜法中，目的在于：①增加待檢物的揮發(fā)性，擴大分析范圍；②增加待檢物的熱穩(wěn)定性；③改善待檢物的色譜行為，即制成衍生物后容易與其他組分或雜質分開；④增加某些檢測器對待檢物的靈敏度和選擇性。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

高效液相色譜法對于待檢物的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性要求不高，所以較少采用衍生化技術。但是在有些情況下，為了使待檢物在檢測器上有更高的響應值以及改善色譜行為。月1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年1日2006年9月1日2006年

衍生化反應及衍生化試劑一般需要滿足以下條件：①反應迅速且對條件要求不苛刻；②反應定量進行，重復性好；③反應選擇性高，只與待檢物