GB/T 41799-2022限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測(cè)方法

ICS07080

CCSC.27

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T41799—2022

限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測(cè)方法

Assaymethodofrestrictionendonucleaseimpurity

2022-10-12發(fā)布2023-05-01實(shí)施

國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T41799—2022

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術(shù)語和定義

3………………1

原理

4………………………1

試劑或材料

5………………1

儀器設(shè)備

6…………………2

試驗(yàn)步驟

7…………………2

附錄規(guī)范性瓊脂糖凝膠電泳

A()………………………4

Ⅰ

GB/T41799—2022

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國工具酶標(biāo)準(zhǔn)化工作組提出并歸口

(SAC/SWG11)。

本文件起草單位福建南生科技有限公司通用生物安徽股份有限公司夏禾深圳生物技術(shù)有

:、()、()

限公司廈門銀祥集團(tuán)有限公司蘇州坤琪生物科技有限公司廈門中集信檢測(cè)技術(shù)有限公司上海鷹姿

、、、、

生命科技有限公司雷谷廈門生物醫(yī)藥有限公司北京化工大學(xué)山東大學(xué)安琪酵母股份有限公司

、()、、、、

復(fù)旦大學(xué)武漢科技大學(xué)北京中天標(biāo)科標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院有限公司廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限

、、、

公司

。

本文件主要起草人黃發(fā)燦雍金貴鄭登忠張志剛陳勁春陳秀蘭江鋒趙毅鐘江朱力姚娟

:、、、、、、、、、、、

楊忠華李超許文來王永成

、、、。

Ⅲ

GB/T41799—2022

引言

限制性核酸內(nèi)切酶是一類識(shí)別雙鏈中特定核苷酸序列的水解酶以內(nèi)切方式水解

DNADNA,

產(chǎn)生和末端限制性核酸內(nèi)切酶的作用底物是脫氧核糖核酸其他核酸

DNA,5'-PO33'-OH。(DNA),

內(nèi)切酶或核酸外切酶的污染會(huì)導(dǎo)致底物的降解或消失降低其他核酸內(nèi)切酶或核酸外切酶的污染是限

,

制性核酸內(nèi)切酶最重要的質(zhì)量保證制定限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測(cè)方法國家標(biāo)準(zhǔn)用以推動(dòng)該類工

。,

具酶的產(chǎn)業(yè)化對(duì)于限制性核酸內(nèi)切酶的生產(chǎn)和使用具有重要的意義

,。

Ⅳ

GB/T41799—2022

限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測(cè)方法

1范圍

本文件描述了限制性核酸內(nèi)切酶中污染其他核酸內(nèi)切酶或核酸外切酶等雜質(zhì)的檢測(cè)方法

。

本文件適用于限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)的檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件

。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

限制性核酸內(nèi)切酶restrictionendonuclease

以內(nèi)切方式水解產(chǎn)生和末端識(shí)別雙鏈中特定核苷酸序列的水

DNA,5'-PO33'-OH,DNADNA

解酶

。

32

.

雜質(zhì)impurity

影響核酸底物存在的其他核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶

。

4原理

由于無Bam酶切位點(diǎn)有個(gè)Bam酶切位點(diǎn)完全酶解后產(chǎn)生條譜

ФX174DNAHI,λDNA5HI,6

帶它們的大小及核苷酸順序均為已知樣品中無其他核酸內(nèi)切酶污染酶解產(chǎn)物在電泳板上形成的譜

,。,

帶與酶解時(shí)間過長用酶過多無關(guān)

、。

由于Bam切開雙鏈產(chǎn)生一對(duì)黏性末端其各有個(gè)堿基失去互補(bǔ)堿基形成突出單鏈其

HIDNA,5,

易受核酸外切酶作用丟失若干個(gè)堿基乃至形成平末端如果將此連接后再用Bam酶切結(jié)果

;DNAHI,

是無法切開如果該位點(diǎn)是在外顯子區(qū)或編碼區(qū)即意味其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列發(fā)生變化乃至某些生物

。,,

性狀發(fā)生改變例如質(zhì)粒所含Bam識(shí)別位點(diǎn)是在其抗四環(huán)素基因上如果使用被核酸外

。pBR322HI,

切酶污染的樣品Bam過量長時(shí)程切割然后再連接閉環(huán)后重新轉(zhuǎn)化受體菌該菌在含四環(huán)

HIpBR322,,

素培養(yǎng)基上無法生長而沒有這樣酶切的