標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 41799-2022 限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范限制性核酸內(nèi)切酶中可能存在的雜質(zhì)的檢測流程。該標(biāo)準(zhǔn)適用于生物技術(shù)領(lǐng)域中用于分子克隆、基因組研究等目的的限制性核酸內(nèi)切酶的質(zhì)量控制。

根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，首先明確了術(shù)語和定義部分，確保所有使用者對涉及的概念有一致的理解。例如，它界定了什么是限制性核酸內(nèi)切酶以及不同類型的雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)雜質(zhì)、DNA污染等）。

接著，在樣品準(zhǔn)備階段，詳細描述了如何正確地處理待測樣品以保證后續(xù)分析結(jié)果的有效性和準(zhǔn)確性。這包括但不限于樣品溶解條件的選擇、稀釋比例等因素。

對于檢測方法，《GB/T 41799-2022》提出了多種可行的技術(shù)路線供選擇，比如高效液相色譜法(HPLC)、聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)等，并為每種技術(shù)提供了具體的操作指南，包括儀器參數(shù)設(shè)置、實驗步驟等關(guān)鍵信息。此外，還特別強調(diào)了對照品的重要性，即通過與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)比較來定量未知樣品中的雜質(zhì)含量。

最后，標(biāo)準(zhǔn)文件還包括了數(shù)據(jù)記錄與報告的要求，確保整個檢測過程透明可追溯。要求記錄所有相關(guān)的信息，如使用的設(shè)備型號、試劑批號、操作人員姓名及日期等，并按照特定格式編寫最終報告。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2022-10-12 頒布
  • 2023-05-01 實施
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GB/T 41799-2022限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法_第1頁
GB/T 41799-2022限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法_第2頁
GB/T 41799-2022限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法_第3頁
GB/T 41799-2022限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法_第4頁
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文檔簡介

ICS07080

CCSC.27

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T41799—2022

限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法

Assaymethodofrestrictionendonucleaseimpurity

2022-10-12發(fā)布2023-05-01實施

國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布

國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T41799—2022

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術(shù)語和定義

3………………1

原理

4………………………1

試劑或材料

5………………1

儀器設(shè)備

6…………………2

試驗步驟

7…………………2

附錄規(guī)范性瓊脂糖凝膠電泳

A()………………………4

Ⅰ

GB/T41799—2022

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任

。。

本文件由全國工具酶標(biāo)準(zhǔn)化工作組提出并歸口

(SAC/SWG11)。

本文件起草單位福建南生科技有限公司通用生物安徽股份有限公司夏禾深圳生物技術(shù)有

:、()、()

限公司廈門銀祥集團有限公司蘇州坤琪生物科技有限公司廈門中集信檢測技術(shù)有限公司上海鷹姿

、、、、

生命科技有限公司雷谷廈門生物醫(yī)藥有限公司北京化工大學(xué)山東大學(xué)安琪酵母股份有限公司

、()、、、、

復(fù)旦大學(xué)武漢科技大學(xué)北京中天標(biāo)科標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院有限公司廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限

、、、

公司

。

本文件主要起草人黃發(fā)燦雍金貴鄭登忠張志剛陳勁春陳秀蘭江鋒趙毅鐘江朱力姚娟

:、、、、、、、、、、、

楊忠華李超許文來王永成

、、、。

Ⅲ

GB/T41799—2022

引言

限制性核酸內(nèi)切酶是一類識別雙鏈中特定核苷酸序列的水解酶以內(nèi)切方式水解

DNADNA,

產(chǎn)生和末端限制性核酸內(nèi)切酶的作用底物是脫氧核糖核酸其他核酸

DNA,5'-PO33'-OH。(DNA),

內(nèi)切酶或核酸外切酶的污染會導(dǎo)致底物的降解或消失降低其他核酸內(nèi)切酶或核酸外切酶的污染是限

,

制性核酸內(nèi)切酶最重要的質(zhì)量保證制定限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法國家標(biāo)準(zhǔn)用以推動該類工

。,

具酶的產(chǎn)業(yè)化對于限制性核酸內(nèi)切酶的生產(chǎn)和使用具有重要的意義

,。

Ⅳ

GB/T41799—2022

限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)檢測方法

1范圍

本文件描述了限制性核酸內(nèi)切酶中污染其他核酸內(nèi)切酶或核酸外切酶等雜質(zhì)的檢測方法

。

本文件適用于限制性核酸內(nèi)切酶雜質(zhì)的檢測

。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件

。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

限制性核酸內(nèi)切酶restrictionendonuclease

以內(nèi)切方式水解產(chǎn)生和末端識別雙鏈中特定核苷酸序列的水

DNA,5'-PO33'-OH,DNADNA

解酶

。

32

.

雜質(zhì)impurity

影響核酸底物存在的其他核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶

。

4原理

由于無Bam酶切位點有個Bam酶切位點完全酶解后產(chǎn)生條譜

ФX174DNAHI,λDNA5HI,6

帶它們的大小及核苷酸順序均為已知樣品中無其他核酸內(nèi)切酶污染酶解產(chǎn)物在電泳板上形成的譜

,。,

帶與酶解時間過長用酶過多無關(guān)

、。

由于Bam切開雙鏈產(chǎn)生一對黏性末端其各有個堿基失去互補堿基形成突出單鏈其

HIDNA,5,

易受核酸外切酶作用丟失若干個堿基乃至形成平末端如果將此連接后再用Bam酶切結(jié)果

;DNAHI,

是無法切開如果該位點是在外顯子區(qū)或編碼區(qū)即意味其對應(yīng)的氨基酸序列發(fā)生變化乃至某些生物

。,,

性狀發(fā)生改變例如質(zhì)粒所含Bam識別位點是在其抗四環(huán)素基因上如果使用被核酸外

。pBR322HI,

切酶污染的樣品Bam過量長時程切割然后再連接閉環(huán)后重新轉(zhuǎn)化受體菌該菌在含四環(huán)

HIpBR322,,

素培養(yǎng)基上無法生長而沒有這樣酶切的

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