培養(yǎng)基成分及配制

第三章培養(yǎng)基及一般操作技術(shù)2023/2/71第一節(jié)培養(yǎng)基的概念、種類(lèi)和成分第二節(jié)培養(yǎng)基制備

第三節(jié)一般操作技術(shù)

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在離體培養(yǎng)條件下，不同種植物的組織對(duì)營(yíng)養(yǎng)有不同的要求，甚至同一種植物不同部位的組織對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求也不相同，只有滿(mǎn)足了它們各自的特殊要求，它們才能很好地生長(zhǎng)。因此，沒(méi)有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類(lèi)型的植物組織或器官。

第一節(jié)培養(yǎng)基的概念、種類(lèi)和成分

一、概念：培養(yǎng)基（culturemedium）是人工配制的含有各種營(yíng)養(yǎng)成分，經(jīng)過(guò)嚴(yán)格滅菌的適于植物生長(zhǎng)重要基質(zhì)。2023/2/73

在建立一項(xiàng)新的培養(yǎng)系統(tǒng)時(shí)，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培養(yǎng)才有可能成功。在植物組織培養(yǎng)歷史進(jìn)程中，事實(shí)上也緊密地伴隨著培養(yǎng)基的研制史。

2023/2/74不同的植物不同培養(yǎng)部位不同的培養(yǎng)目的需選用不同的培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基的種類(lèi)

培養(yǎng)基多數(shù)以發(fā)明人的名字來(lái)命名，如White培養(yǎng)基，Murashige和Skoog培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱(chēng)MS培養(yǎng)基)，也有對(duì)某些成分進(jìn)行改良稱(chēng)作改良培養(yǎng)基。2023/2/75

培養(yǎng)基種類(lèi)MS培養(yǎng)基1962B5培養(yǎng)基1968White培養(yǎng)基1937N6培養(yǎng)基1975KM-8P培養(yǎng)基1974Miller培養(yǎng)基1965Nitsch培養(yǎng)基1963WPM培養(yǎng)基19332023/2/76

1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。

特點(diǎn)：無(wú)機(jī)鹽離子濃度高，硝酸鹽含量較高廣泛用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)MS培養(yǎng)基及特點(diǎn):2023/2/77

1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn)：含有較低的銨，這可能對(duì)不少培養(yǎng)物的生長(zhǎng)有抑制作用。雙子葉植物尤其木本植物組培可選擇B5

培養(yǎng)基及特點(diǎn)：2023/2/78

1937年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的，1943年隨其專(zhuān)著的出版而問(wèn)世。1963年又作了改良，稱(chēng)作White改良培養(yǎng)基，提高了MgSO4的濃度和增加了硼素。White培養(yǎng)基特點(diǎn)：特點(diǎn)：無(wú)機(jī)鹽數(shù)量較低適于生根培養(yǎng)2023/2/791974年朱至清等為水稻等禾谷類(lèi)作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的N6培養(yǎng)基特點(diǎn)：

特點(diǎn);成分較簡(jiǎn)單，KNO3

和(NH4)2SO4含量高適合花藥培養(yǎng)2023/2/710

特點(diǎn)：有機(jī)成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素廣泛用于原生質(zhì)體培養(yǎng)，包括融合的培養(yǎng)

KM-8P培養(yǎng)基特點(diǎn)：

1974年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。2023/2/711培養(yǎng)基種類(lèi)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基通氣性較好，便于操作，但營(yíng)養(yǎng)分布不均，生長(zhǎng)發(fā)育不整齊。營(yíng)養(yǎng)分布均勻，生長(zhǎng)整齊一致，但通氣性差。培養(yǎng)基按是否加入凝固劑分為2023/2/712

培養(yǎng)基成分三、培養(yǎng)基的成分水無(wú)機(jī)鹽有機(jī)物植物激素培養(yǎng)體的支持材料其它輔助性物質(zhì)2023/2/713

水是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過(guò)程的介質(zhì)和溶媒。它是生命活動(dòng)過(guò)程中不可缺少的物質(zhì)。配制培養(yǎng)基母液時(shí)要用蒸餾水，以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性，防止儲(chǔ)藏過(guò)程發(fā)霉變質(zhì)。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)可用自來(lái)水。但在少量研究上盡量用蒸餾水，以防成分的變化引起不良效果。（一）水2023/2/714

無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分就是人們平常所說(shuō)的礦物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽或無(wú)機(jī)元素。它們?cè)谥参锷钪芯哂蟹浅Ｖ匾淖饔谩?/p>

如氮（N）、硫（S）、磷（P）是蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸和許多生物催化劑即酶的主要或重要組分。它們與蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸和酶的結(jié)構(gòu)、功能、活性等有直接的不可缺少的關(guān)系。

（二）無(wú)機(jī)元素2023/2/715

根據(jù)植物對(duì)這些元素需要量的不同或者根據(jù)目前植物培養(yǎng)基中添加的這些元素量的大小，可將它們分成大量元素和微量元素。

大量元素：一般指在培養(yǎng)基中的濃度大于0.5mmol/L的元素（或﹥100mg/L）。主要包括氮、磷、鉀、鈣、鎂和硫六種。微量元素：指小于0.5mmol/L的元素或﹤100mg/L）。2023/2/716大量元素（以Ms培養(yǎng)基為例）序號(hào)化學(xué)式化學(xué)名稱(chēng)用量mg/L1KNO3硝酸鉀19002NH4NO3硝酸銨16503KH2PO4磷酸二氫鉀1704MgSO4.7H2O硫酸鎂3705CaCL2.4H2O二氯化鈣44017微量元素（以MS培養(yǎng)基為例）序號(hào)化學(xué)名稱(chēng)化學(xué)式用量（mg/L)1碘化鉀KI0.832硼酸H3BO36.23硫酸錳MnSO4.4H2O22.34硫酸鋅ZnSO4.7H2O8.65鉬酸鈉Na2MoO4.2H2O0.256硫酸銅CuSO4.5H2O0.0257氯化鉀CoCL2.6H2O0.025181.大量元素

(1)N:是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分，是生命不可缺少的物質(zhì)。

在制備培養(yǎng)基時(shí)以硝態(tài)氮（NO3-N)或氨態(tài)氮（NH4-N)兩種形式供應(yīng)。大多數(shù)培養(yǎng)基既含有硝態(tài)氮（NO3-)又含有氨態(tài)氮（NH4+)。氨態(tài)氮（NH4-N)對(duì)植物生長(zhǎng)較為有利。供應(yīng)的物質(zhì)有KNO3、NH4NO3等。有時(shí)，也添加氨基酸來(lái)補(bǔ)充氮素。

缺氮時(shí)某些植物的愈傷組織會(huì)出現(xiàn)一種很引人注目的花色素苷的顏色，愈傷組織內(nèi)部不能形成導(dǎo)管。2023/2/719(2)P是磷脂的主要成分，而磷脂又是原生質(zhì)、細(xì)胞核的重要組成部分。磷也是ATP、ADP等的組成成分。

在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，向培養(yǎng)基內(nèi)添加磷，不僅增加養(yǎng)分、提供能量，而且也促進(jìn)對(duì)N的吸收，增加蛋白質(zhì)在植物體中的積累。

常用的物質(zhì)有KH2P04或NaH2P04等。缺磷或鉀時(shí)細(xì)胞會(huì)過(guò)度生長(zhǎng)，愈傷組織表現(xiàn)出極其蓬松狀態(tài)。2023/2/720

(3)K對(duì)碳水化合物合成、轉(zhuǎn)移、以及氮素代謝等有密切關(guān)系。

K增加時(shí)，蛋白質(zhì)合成增加，維管束、纖維組織發(fā)達(dá)，對(duì)胚的分化有促進(jìn)作用。但濃度不易過(guò)大，一般為1-3mg／L為好。

制備培養(yǎng)基時(shí)，常以KCl、KNO3等鹽類(lèi)形式提供。2023/2/721(4)Mg、S和CaMg是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑；S是含S氨基酸和蛋白質(zhì)的組成成分。

常以MgS04·7H20提供，用量為1-3mg／L較為適宜；

Ca是構(gòu)成細(xì)胞壁的一種成分，Ca對(duì)細(xì)胞分裂、保護(hù)質(zhì)膜不受破壞有顯著作用

常以CaCl2·2H20提供，缺硫時(shí)培養(yǎng)的植物組織會(huì)明顯的退綠。2023/2/7222.微量元素

微量元素包括Fe、Mn、Cu、Zn、Cl、B、Mo、Co等。鐵是一些酶（氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、過(guò)氧化氫酶等）的重要組成成分，又是葉綠素形成的必要條件

培養(yǎng)基中的鐵對(duì)胚的形成、芽的分化和幼苗轉(zhuǎn)綠有促進(jìn)作用

但由于Fe的特殊性質(zhì)，即很不穩(wěn)定、易沉淀，需要在酸性條件下才能比較穩(wěn)定，故在培養(yǎng)基配制時(shí)常常把Fe鹽單獨(dú)配制，且以螯合物的形式存在2023/2/723

B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物組織培養(yǎng)中不可缺少的元素，缺少這些物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)，發(fā)育異?，F(xiàn)象。Mn對(duì)糖酵解中的某些酶有活化作用，是三羧酸循環(huán)中某些酶和硝酸還原酶的活化劑。B能促進(jìn)糖的過(guò)膜運(yùn)輸，影響植物的有性生殖如花器官的發(fā)育和受精作用。B還具有抑制有毒的酚類(lèi)化合物的形成的作用，改善某些植物組織的培養(yǎng)狀況，缺硼時(shí)細(xì)胞分裂停滯，愈傷表現(xiàn)出老化現(xiàn)象。2023/2/724Zn是吲哚乙酸生物合成必需的，也是谷氨酸脫氫酶、乙醇脫氫酶等的活化劑。Cu是細(xì)胞色素氧化酶、多酚氧化酶等氧化酶的成分，可影響氧化還原過(guò)程。Mo是硝酸還原酶和鉬鐵蛋白的金屬成分。2023/2/725有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分碳水化合物維生素氨基酸肌醇天然復(fù)合物椰乳、水解酪蛋白、水解乳蛋白、酵母提取物、胰蛋白胨、西紅柿汁、香蕉粉、橘子汁、可可汁（三）有機(jī)元素2023/2/726氨基酸和有機(jī)附加物（以MS培養(yǎng)基為例）序號(hào)化學(xué)名稱(chēng)化學(xué)式用量(mg/L)1肌醇C6H12O6.2H2O1002甘氨酸NH2.CH2.COOH23鹽酸硫胺素C12H17CLN4OS.HCL0.14鹽酸吡哆醇C8H11O3N.HCL0.55煙酸NC5H4COOH0.527

選用種類(lèi)：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等蔗糖濃度：2－3%，胚培養(yǎng)為4－15%高壓滅菌部分糖會(huì)分解；大生產(chǎn)時(shí)可用綿白糖

不同糖類(lèi)對(duì)生長(zhǎng)的影響不同。從各種糖對(duì)水稻根培養(yǎng)的影響來(lái)看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相當(dāng)，麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類(lèi)需要量也不同，實(shí)驗(yàn)時(shí)要根據(jù)配方規(guī)定按量稱(chēng)取，不能任意取量。1.碳水化合物2023/2/728種類(lèi)：VB1(鹽酸硫胺素):促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力VB6(鹽酸吡哆醇):促根生長(zhǎng)

Vpp(煙酸):與代謝和胚發(fā)育有關(guān)

Vc(抗壞血酸):防組織褐變有時(shí)還使用生物素、葉酸、核黃素等。濃度：0.1－1.0mg/L

2.維生素(vitamin)2023/2/729

3.

肌醇（環(huán)己六醇）促進(jìn)糖類(lèi)物質(zhì)的相互轉(zhuǎn)化和活性物質(zhì)作用的發(fā)揮促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)以及胚狀體和芽的形成對(duì)組織細(xì)胞繁殖、分化的促進(jìn)作用使用濃度100mg/L注：用量過(guò)多則促褐變

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是很好的有機(jī)氮源，可直接被細(xì)胞吸收利用。

培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。4.氨基酸2023/2/731

為了特殊的培養(yǎng)目的，在一部分培養(yǎng)基中還添加了一些特殊成分，如水解酪蛋白，水解乳蛋白，酵母提取物，胰蛋白胨，椰乳，西紅柿汁，香蕉粉，橘子汁，可可汁等天然復(fù)合物以及活性炭，滲透調(diào)節(jié)劑等。5.天然復(fù)合物2023/2/732

是椰子的液體胚乳。它是使用最多、效果最大的一種天然復(fù)合物。在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。一般使用濃度在10％-20％1)椰乳2023/2/733

用黃熟的小香蕉，加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙?。?duì)pH值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應(yīng)用，對(duì)發(fā)育有促進(jìn)作用。濃度：150-200ml/l2)香蕉2023/2/734

去掉皮和芽后，加水煮30min，再經(jīng)過(guò)過(guò)濾，取其濾液使用，

用量為150-200g／L對(duì)pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。3)馬鈴薯2023/2/735

為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸（含有約20種氨基酸的混合物），使用濃度為100-200mg／L受酸和酶的作用易分解。4)水解酪蛋白或水解乳蛋白

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酵母提取液(YE)(0.01％-0.05％)，主要成分為氨基酸和維生素類(lèi)；麥芽提取液(0．01％-0．5％)蘋(píng)果和番茄的果汁、黃瓜的果實(shí)、未熟玉米的胚乳等。5)其他

2023/2/737(四)植物激素

植物激素是指自然狀態(tài)下植物體內(nèi)合成，并從產(chǎn)生處運(yùn)送到別處，對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生顯著作用的微量（1微摩爾/升以下）有機(jī)物。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是指一些具有植物激素活性的人工合成的物質(zhì)。2023/2/738植物激素（植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑）1、生長(zhǎng)素類(lèi)：IAA，IBA，2，4-D，NAA等。2、細(xì)胞分裂素類(lèi)：KT，6-BA，ZT等。3、赤霉素類(lèi)；GA1-GA4，GA7，GA9，GA16，GA24，GA25等4、脫落酸：ABA5、乙烯39植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)植物激素植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中使用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)主要有生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分裂素類(lèi)兩大類(lèi)，少數(shù)培養(yǎng)基中還添加赤霉素GA3等2023/2/740

1）種類(lèi)IAA

NAA

IBA

2,4－D

2）作用誘導(dǎo)愈傷組織形成和根分化，促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。根對(duì)生長(zhǎng)素最敏感，在極低濃度下(10.5-10.8mg／L)就可促進(jìn)生長(zhǎng)，其次是莖和芽。3）濃度0.05－5mg/L

天然的生長(zhǎng)素?zé)岱€(wěn)定性差，高溫高壓或受光條件易被破壞。在植物體內(nèi)也易受到體內(nèi)酶的分解。組織培養(yǎng)中常用人工合成的生長(zhǎng)素類(lèi)物質(zhì)1、生長(zhǎng)素類(lèi)2023/2/741IAA(吲哚乙酸)

是天然存在的生長(zhǎng)素，亦可人工合成，其活力較低，是生長(zhǎng)素中活力最弱的激素，對(duì)器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。NAA(萘乙酸)

在組織培養(yǎng)中的起動(dòng)能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖和生長(zhǎng)。2023/2/742

IBA(吲哚丁酸)

是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。

2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)

起動(dòng)能力比IAA高10倍，特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高，但它強(qiáng)烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。適宜的用量范圍較狹窄，過(guò)量常有毒效應(yīng)。生長(zhǎng)素配制可先用少量95％酒精助溶。2,4-D可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶。生長(zhǎng)素常配成1mg/ml的溶液貯于冰箱中備用。2023/2/743(2)GA(赤霉素)

種類(lèi)：有20多種，生理活性及作用的種類(lèi)、部位、效應(yīng)等各有不同。培養(yǎng)基中添加的是GA3。作用：促莖伸長(zhǎng)，促胚發(fā)育成植株；打破休眠；

特性：赤霉素溶于酒精，配制時(shí)可用少量95％酒精助溶。赤霉素不耐熱，高壓滅菌后將有70％-100％失效，應(yīng)當(dāng)采用過(guò)濾滅菌法加入。2023/2/744(3)細(xì)胞分裂素類(lèi)

這類(lèi)激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA、Kt(kinetin)、玉米素Ze等。其中Ze活性最強(qiáng)，但非常昂貴，常用的是6-BA。

細(xì)胞分裂素使用濃度：0.05-10mg／L。2023/2/745在培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素有三個(gè)作用：①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)。細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素相互作用，當(dāng)組織內(nèi)細(xì)胞分裂素／生長(zhǎng)素的比值高時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織或器官分化出不定芽。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。細(xì)胞分裂素多用于誘導(dǎo)不定芽的分化、莖、苗的增殖，③抑制根的分化。避免在生根培養(yǎng)時(shí)使用。2023/2/7461、瓊脂(agar)

作用：最好的固化劑。瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何營(yíng)養(yǎng)。特性：溶解在熱水中，成為溶膠，冷卻至40℃即凝固為固體狀凝膠。通常所說(shuō)的“煮化”培養(yǎng)基，就是使瓊脂溶解于90℃以上的熱水。濃度：瓊脂的用量在6-10g／L之間，若濃度太高，培養(yǎng)基就會(huì)變得很硬，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)難以擴(kuò)散到培養(yǎng)的組織中去。若濃度過(guò)低，凝固性不好。(五)、培養(yǎng)材料的支持物2023/2/747(六)、其它輔助性物質(zhì)1.抗生物質(zhì)2.抗氧化物3.活性炭2023/2/748種類(lèi)：青霉素、鏈霉素、慶大霉素等用量：5-20mg／L作用：防止菌類(lèi)污染，減少培養(yǎng)中材料的損失。對(duì)于剛感染的組織材料，可向培養(yǎng)基中注入5％-10％的抗菌素。注意：抗生素各有其抑菌譜，要加以選擇試用，也可兩種抗生素混用。但是應(yīng)當(dāng)注意抗生素對(duì)植物組織的生長(zhǎng)也有抑制作用，使用要慎重。1．抗生物質(zhì)2023/2/749

酚污染：

植物組織在切割時(shí)會(huì)溢泌一些酚類(lèi)物質(zhì)，接觸空氣中的氧氣后，自動(dòng)氧化或由酶類(lèi)催化氧化為相應(yīng)的醌類(lèi)，產(chǎn)生可見(jiàn)的茶色、褐色以致黑色。這些物質(zhì)滲出細(xì)胞外就造成自身中毒，使培養(yǎng)的材料生長(zhǎng)停頓，失去分化能力，最終變褐死亡。

在木本，尤其是熱帶木本及少數(shù)草本植物中較為嚴(yán)重。2、抗氧化物2023/2/750

目前還沒(méi)有徹底完善的辦法，只能按不同的實(shí)際情況，加用一些藥物，并適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度、及時(shí)轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上等辦法，使之有不同程度的緩解，當(dāng)然像嚴(yán)格選擇外植體部位、加大接種數(shù)量等也應(yīng)一并考慮。

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抗酚類(lèi)氧化常用的藥劑有半胱氨酸及Vc用量：50-200mg／L的濃度方法：洗滌剛切割的外植體表面或過(guò)濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。

其他抗氧化劑：二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。2023/2/752

活性炭為木炭粉碎經(jīng)加工形成的粉沫結(jié)構(gòu)，有很強(qiáng)的吸附作用，可以吸附非極性物質(zhì)和色素等大分子物質(zhì)，包括瓊脂中所含的雜質(zhì)，培養(yǎng)物分泌的酚、醌類(lèi)物質(zhì)以及蔗糖在高壓消毒時(shí)產(chǎn)生的5-羥甲基糖醛及激素等。3、活性炭2023/2/753

使用濃度——通常為0.5-1mg／L

作用——吸附外植體產(chǎn)生的致死性褐化物（初代培養(yǎng)）促進(jìn)新梢的形成和伸長(zhǎng)（新梢增殖階段），但其作用有一個(gè)閥值，一般為0.1％-0.2％。促進(jìn)生根（通過(guò)減弱光照保護(hù)了IAA），由于根的生長(zhǎng)加快，吸收能力增強(qiáng)，反過(guò)來(lái)又促進(jìn)了莖、葉的生長(zhǎng)?；钚蕴靠山档筒Ａ绲漠a(chǎn)生頻率，使用濃度一般0.3％。2023/2/754

每毫克的活性炭能吸附100ng左右的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，這說(shuō)明只需要極少量的活性炭就可以完全吸附培養(yǎng)基中的調(diào)節(jié)物質(zhì)。大量的活性炭加入會(huì)削弱瓊脂的凝固能力，因此，在使用時(shí)要有其量的意識(shí),使活性炭發(fā)揮其積極作用。

活性炭具有副作用，研究表示2023/2/755按性質(zhì)分基本培養(yǎng)基：MS、MT（MurashigeandTucher）White完全培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基＋其它成分（激素、有機(jī)物質(zhì)等）

第二節(jié)培養(yǎng)基的制備

56一、合適培養(yǎng)基的選擇合適培養(yǎng)基的選擇：基本培養(yǎng)基；各種激素的濃度與配比MS培養(yǎng)基適合于大多數(shù)雙子葉植物；B5和N6培養(yǎng)基適合于許多單子葉植物；White培養(yǎng)基適合于根的培養(yǎng)。

首先試用這些培養(yǎng)基進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)，在基本培養(yǎng)基確定之后，進(jìn)行不同種類(lèi)激素濃度和激素間相互比例的配合試驗(yàn)。2023/2/757

在植物組織培養(yǎng)工作中，通常先配制一系列母液，即貯備液。所謂母液是欲配制液的濃縮液，這樣不但可以保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性及配制時(shí)的快速移取，而且還便于低溫保藏。二、母液的配制2023/2/758

稱(chēng)量

母液分裝確定培養(yǎng)基

溶解

定容

貼標(biāo)簽保存于冰箱(一)母液配制流程圖2023/2/759

一般母液配成比所需濃度高10-100倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類(lèi)等。母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存，用時(shí)再按比例稀釋。(二)母液配制要求(以MS為例)

：2023/2/760具體要求：(1)大量元素母液可配成濃度20倍母液。(2)微量元素母液可配成濃度1000倍的母液。(3)鐵鹽母液可配成100倍的母液，(4)有機(jī)物母液可配成100倍的母液。(5)激素母液的配制每種激素必須單獨(dú)配成母液，濃度一般配成1mg／ml。用時(shí)根據(jù)需要取用。因?yàn)榧に赜昧枯^少，一次可配成50ml或100ml。2023/2/761IAA、IBA、GA溶于少量的95％的酒精加水定容；NAA熱水或少量95％的酒精加水定容；2,4-D可用少量1molNaOH溶解加水定容；Kt和BA少量1mol的HCI中加水定容；玉米素于少量95％的酒精加熱水到一定濃度。配制好的母液瓶上應(yīng)分別貼上標(biāo)簽，注明母液名稱(chēng)、配制倍數(shù)、日期及配1L培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)取的量。

激素溶解方法：2023/2/762Ms母液（儲(chǔ)備液）的配制與保存

成分

用量(g/l)每升培養(yǎng)基取用量(ml)母液1（大量元素20×）NH4NO3KNO3

MgSO4.7H2OCaCL2.2H2OKH2PO4母液2（微量元素1000×）KIH3BO3MnSO4.4H20ZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCL2.6H2O33387.48.83.40.826.222.38.60.250.0250.025

50

１63

成分用量（ｇ／ｌ）每升培養(yǎng)基用量（ｍｌ）母液3（鐵鹽100×）FeSO4.7H2ONa2.EDTA.2H2O2.783.73

10母液4（維生素、氨基酸100×）肌醇煙酸鹽酸吡哆醇鹽酸硫