飼料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦生長和抗氧化酶活力的影響

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材料和方法

1.1試驗材料與裝置

試驗于河北省唐山市金鵬養(yǎng)殖基地舉行，試驗材料選用泰國正大自交系的F1代蝦苗，對蝦根基餌料購于唐山金鵬飼料有限公司。選取18個養(yǎng)殖池（規(guī)格為5m×6m×1.4m）作為試驗場所，分成6組，編號分別為對照組C1和試驗組C2，C3，C4，C5，C6，每組設(shè)3個重復。制作直徑為1.3m、高度1.5m的網(wǎng)箱18個，分成6組，分別編號為對照組QC和試驗組QS0.5、QS1、QS2、QS3和QS4，每組設(shè)3個重復。養(yǎng)殖池與網(wǎng)箱相對應(yīng)，即C1池對應(yīng)QC組，C2池對應(yīng)QS0.5組，以此類推。

1.2飼養(yǎng)管理

蝦苗培育至體長3.5cm左右，蝦苗初始體質(zhì)量（0.72±0.01）g·尾-1，對蝦標粗終止后，隨機選取300尾凡納濱對蝦稱質(zhì)量后放入網(wǎng)箱中。為保證網(wǎng)箱試驗環(huán)境同實際生產(chǎn)環(huán)境的一致性，每個網(wǎng)箱距池壁1.5m。養(yǎng)殖用水為過濾的自然海水，鹽度為（29±1）‰，水溫為（28±2）℃，溶氧為（7.3±0.3）mg·L-1。每天投餌4次（分別在06：00、10：00、14：00、22：00），投喂量為對蝦體質(zhì)量的6%～10%。養(yǎng)殖前期（0～4周）每天換水量為池水的1/4～1/3，中后期（5～8周）每天換水量為池水的1/3～1/2。整個試驗僅在投餌期間中斷曝氣，投喂餌料1h后恢復曝氣。

1.3試驗設(shè)計

投喂餌料2h前，先將根瘤菌兌水稀釋5倍后再和飼料充分攪拌，根瘤菌在飼料中添加的劑量分別為0，0.5%，1.0%，2.0%，3.0%和4.0%，與之相對應(yīng)的網(wǎng)箱編號為QC組、QS0.5組、QS1組、QS2組、QS3組和QS4組。每次投喂后40min利用虹吸管收集網(wǎng)箱中殘餌，經(jīng)烘箱70℃烘干后記錄投喂量和殘餌量，每周稱質(zhì)量1次，用以矯正投餌率，記錄投餌量。每周檢測水體pH值、氨氮、亞硝酸鹽，總氮和硝酸鹽濃度。試驗周期為56d。

1.4凡納濱對蝦生長指標測定

稱取每個網(wǎng)箱中凡納濱對蝦總質(zhì)量并記錄終末存活數(shù)Nf，用于計算成活率;隨機抽取15尾對蝦稱質(zhì)量，測量體長，用于計算肥滿度;在冰盤上解剖分開肝胰臟用濾紙洗掉水分后稱質(zhì)量，用于計算肝體比。各指標計算公式如下：

1.5凡納濱對蝦血清和肝胰臟中抗氧化酶測定

在網(wǎng)箱中隨機抽取15尾對蝦取血，取血部位在對蝦的第5步足基部血竇中。血液放置于1.5mL離心管中，為防止凝固，在離心管內(nèi)參與適量抗凝劑，在冰箱內(nèi)（4℃）放置24h，然后以5000r·min-1離心10min，取其上清液置于-80℃超低溫冰箱內(nèi)待測。再將15尾對蝦在冰盤上取出肝胰腺，用濾紙吸干水分后稱重后置于10mL離心管中，參與9倍體積勻漿介質(zhì)，冰浴勻漿，冷凍離心（4℃，10000r·min-1，10min），取上清液分裝于1.5mL離心管中，用于超氧化物歧化酶（SOD）、酚氧化酶（PO）、過氧化氫酶（CAT）和堿性磷酸酶（AKP）測定。

將每毫克組織蛋白在1mL回響液中SOD抑制率達50%時所對應(yīng)的SOD量定義為一個SOD酶活力單位（U）;將回響體系中OD490每分鐘增加0.001定義為一個PO酶活力單位（U）;將每毫克組織蛋白每秒鐘分解1μmolH2O2的量定義為一個CAT酶活力單位（U），將每克組織蛋白在37℃與基質(zhì)作用15min產(chǎn)生1mg酚定義為1個AKP酶活力單位（U）。SOD、PO、CAT活性以酶活單位·毫克蛋白-1（U·mg-1）表示，AKP活性以酶活單位·克蛋白-1（U·g-1）表示。全體指標測試方法均參照商品化試劑盒（購自南京建成生物工程研究所）舉行，吸光度值使用UV-1240紫外-可見分光光度計測定。

1.6數(shù)據(jù)處理

對蝦生長指標和抗氧化酶活力數(shù)據(jù)均以平均值±標準差（Mean±SD）表示。使用SPSS17.0軟件舉行統(tǒng)計分析。其中對蝦生長指標使用單因素方差分析（one-wayANOVA），抗氧化酶活性使用配對T檢驗分析。

2結(jié)果與分析

2.1飼料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦生長的影響

由表1可知，在凡納濱對蝦成活率方面QS0.5組極顯著高于對照組（P0.01），其他試驗組雖都有所提高，但沒有展現(xiàn)先升高后降低的趨勢。在肥滿度、增重率、餌料系數(shù)和特定生長率方面QS2極顯著高于對照組（P0.01），肥滿度、增重率、餌料系數(shù)和特定生長率分別為（5.72±0.12）%、（818.16±7.93）%、（1.08±0.07）和（5.92±4.04）%，且肥滿度、增重率和特定生長率展現(xiàn)了先上升后下降的趨勢。通過以上數(shù)據(jù)和實際生產(chǎn)的需求，最終確定根瘤菌在飼料中的最適添加量為2g·kg-1。

2.2飼料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦抗氧化酶活性的影響

2.2.1對凡納濱對蝦SOD活性的影響?zhàn)D料添加根瘤菌對凡納濱對蝦肝胰腺和血清中SOD活性的影響如圖1所示。QS2組血清中SOD活力為46.5U·mg-1，QS1組肝胰腺中SOD活力為27.5U·mg-1，均顯著高于對照組（P0.05），血清中SOD活性隨根瘤菌添加量的變化展現(xiàn)先升高后降低的趨勢。

2.2.2對凡納濱對蝦PO活性的影響?zhàn)D料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦血清PO活性的影響見圖2。隨根瘤菌添加量的增加，雖然對蝦血清和肝胰腺中PO活性均呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢，但血清中PO活力同對照組相比不顯著（P0.05），而QS2組肝胰腺中PO活性達成最高值為2.71U·mg-1，進一步驗證了根瘤菌在飼料中的最適添加量為2g·kg-1。2.2.3對凡納濱對蝦CAT活性的影響?zhàn)D料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦肝胰腺和血清中CAT活性的影響如圖3所示。隨根瘤菌添加量的增加，對蝦血清和肝胰腺中過氧化氫酶CAT活性均呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢。試驗組均顯著高于對照組（P0.05）。CAT活力最高值展現(xiàn)在QS1組，血清中CAT活性最高值為4.25U·mg-1，而肝胰腺中CAT活性峰值為6.10U·mg-1。

2.2.4對凡納濱對蝦AKP活性的影響?zhàn)D料添加根瘤菌對凡納濱對蝦肝胰腺和血清中AKP活性的影響如圖4所示，血清中AKP活性隨根瘤菌添加量的增加不斷升高，而肝胰腺中AKP活力隨根瘤菌添加量的增加展現(xiàn)先升高后降低的趨勢。試驗組肝胰腺中AKP活性較對照組差異顯著（P0.05），肝胰腺中AKP活性最強的展現(xiàn)在QS2組，達3.2U·g-1。

3討論

3.1飼料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦生長性能的影響

在添加不同微生態(tài)制劑用于大菱鲆、草魚、吉富羅非魚的試驗結(jié)果均說明，微生態(tài)制劑都能促進水產(chǎn)養(yǎng)殖動物生長，提高其生長性能[9-11]。在青魚根基飼料中添加不同濃度的枯草芽抱桿菌8周后，試驗組青魚終體質(zhì)量和魚體增質(zhì)量均顯著高于對照組（P0.05），而餌料系數(shù)顯著低于對照組（P0.05）[12]。有研究表明[13]，將兩株枯草芽孢桿菌作用于凡納濱對蝦，對蝦增重率和特定生長率均顯著提高（P0.05）。有研究指出[14]，菌株的品種、活性、培養(yǎng)條件、添加濃度、投喂方式和飼養(yǎng)環(huán)境條件等都會使益生菌對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的作用效果產(chǎn)生差異。微生態(tài)制劑自身可以供給一片面可吸收蛋白，同時還有利于促進飼料中蛋白質(zhì)的消化、吸收。有研究者察覺[8]，根瘤菌有助于改善中國對蝦仔蝦腸道健康狀況，促進養(yǎng)分物質(zhì)消化吸收，利于對蝦生長，這與本研究的結(jié)論一致。本研究的試驗結(jié)果表明，飼料中添加根瘤菌有利于提高凡納濱對蝦的肥滿度、增重率、特定生長率并降低餌料系數(shù)。在成活率方面，試驗組較對照組差異不顯著（P0.05），這與保苗終止后對蝦體質(zhì)相對較好同時成活率較高有關(guān)，通過這一點也恰恰反映了養(yǎng)殖初期保苗的重要性[15]。試驗組對蝦的餌料系數(shù)展現(xiàn)了先降低后升高的趨勢，說明飼料中添加根瘤菌有利于降低餌料系數(shù)，但并不是添加量越多越好，根據(jù)試驗最終確定根瘤菌的最適添加量為2g·kg-1。

3.2飼料中添加根瘤菌對肝胰腺和血清中抗氧化酶活性的影響

本試驗研究了飼料中添加根瘤菌對凡納濱對蝦血清和肝胰腺中SOD、PO、CAT和AKP活性的影響。這4種酶在甲殼動物非特異性免疫中發(fā)揮了重要作用，其中SOD和CAT是機體內(nèi)的抗氧化酶，在除掉超氧自由基，防止生物大分子損傷方面發(fā)揮重要的生理作用[16];酚氧化酶原系統(tǒng)是對蝦防衛(wèi)和識別的重要系統(tǒng)[2];AKP是動物體內(nèi)重要的解毒酶類[17]。已有研究說明，添加益生菌可以提高水產(chǎn)動物的非特異性免疫活力。黃美珍[18]將光和細菌拌入中國對蝦的飼料，經(jīng)過22d試驗察覺蝦體PO、SOD和溶菌酶活力均比對照組顯著提高，本研究也得到了好像的結(jié)論。試驗結(jié)果說明，根瘤菌處理后凡納濱對蝦血清和肝胰腺中SOD、PO、CAT、AKP4種酶的活力較對照組均有所提高，其中SOD