疫苗制造基本程序新

疫苗制造基本程序新第一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日一、細(xì)菌性滅活疫苗制造

細(xì)菌性滅活疫苗簡(jiǎn)稱(chēng)滅活菌苗，種類(lèi)、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。（一）菌種與種子1.菌種

制苗用菌種多數(shù)為毒力強(qiáng)、免疫原性?xún)?yōu)良的菌株，通常使用1-3個(gè)品系，均由中國(guó)獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、凍干保存和供應(yīng)。各種用于制造菌苗的菌種應(yīng)按規(guī)定定期復(fù)壯，并進(jìn)行形態(tài)、培養(yǎng)特性、菌型、抗原性和免疫原性鑒定，合格菌種準(zhǔn)許用于制苗。2.種子培養(yǎng)將經(jīng)鑒定符合標(biāo)準(zhǔn)的菌種接種于菌苗生產(chǎn)規(guī)程中所規(guī)定的培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查、活菌計(jì)數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)后即為種子液，用于菌苗生產(chǎn)。種子液通常保存于2-8C冷暗處，不得超過(guò)規(guī)程規(guī)定的使用期限。第二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日（二）菌液培養(yǎng)

大量生產(chǎn)的細(xì)菌培養(yǎng)方法甚多，既有手工式的，也有機(jī)械化或自動(dòng)化的培養(yǎng)方式。機(jī)械化或自動(dòng)化的培養(yǎng)方式通稱(chēng)為反應(yīng)缸培養(yǎng)法，可供選擇的菌液培養(yǎng)法有：液體靜置培養(yǎng)法、液體深層通氣培養(yǎng)法、透析培養(yǎng)法及連續(xù)培養(yǎng)法等。

菌液培養(yǎng)也可采用固體培養(yǎng)法，該方法易獲得高濃度的細(xì)菌懸液，易稀釋成不同濃度，且含培養(yǎng)基的成分較少，所以比較適用于制備診斷用的抗原。第三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日（三）滅活

滅活菌苗通常根據(jù)細(xì)菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當(dāng)?shù)臏缁顥l件進(jìn)行，幾種滅活菌苗的滅活方法如表6-1所示。菌苗菌或毒素滅活方法豬丹毒氫氧化鋁菌苗豬丹毒桿菌菌液加入甲醛至0.2%-0.5%，37C殺菌18-24h。氣腫疽甲醛菌苗氣腫疽梭菌菌液加甲醛至0.5%，37-38C殺菌72-96h。破傷風(fēng)類(lèi)毒素破傷風(fēng)梭菌菌液上清加甲醛至0.4%，37-38C脫毒21-30d。肉毒梭菌C型菌苗（菌體毒素苗）C型肉毒梭菌菌液加加入甲醛至0.8%，37C殺菌脫毒18d。表6-1幾種滅活菌苗的滅活方法

第四頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日（四）濃縮

為提高某些滅活菌苗的免疫力，在培養(yǎng)過(guò)程中采取提高菌數(shù)的基礎(chǔ)上，再通過(guò)濃縮方法達(dá)到目的。常用的濃縮方法：氧化鋁膠吸附沉淀法離心沉降法羧甲基纖維沉淀法以上方法可使菌液濃縮一倍以上。此外，有些細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生分子量小的可溶性抗原（如豬丹毒桿菌產(chǎn)生的糖蛋白）也可經(jīng)氫氧化鋁吸附濃縮；將破傷風(fēng)脫毒液按鹽酸—食鹽法處理，以作進(jìn)一步精制成提純破傷風(fēng)類(lèi)毒素。第五頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

（五）配苗與分裝

由于滅活菌苗所用的佐劑不同，所以配苗方法也不相同。豬肺疫氫氧化鋁菌苗：可在加入甲醛滅活的同時(shí)，按比例加入氫氧化鋁膠配制；也可在菌液經(jīng)甲醛滅活后再按比例加入氫氧化鋁膠配苗。有的廠(chǎng)家禽霍亂油佐劑菌苗的配制程序?yàn)椋河跍缇挠腿閯?35m110號(hào)白油、11.4m1Span-85、3.6mlTween80混合液中，在邊攪拌下加入等量甲醛滅活菌液配制。配苗和分裝：應(yīng)充分混勻，及時(shí)塞塞、貼簽或印字。第六頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日二、細(xì)菌性活疫苗制造

弱毒菌種多系凍干品，由中國(guó)獸藥監(jiān)察所傳代、鑒定、保存與分發(fā)，少數(shù)由國(guó)家指定單位鑒定、保存與供給。菌種使用前應(yīng)按規(guī)程規(guī)定進(jìn)行復(fù)壯、挑選，并作形態(tài)、特性、抗原性和免疫原性鑒定，符合標(biāo)準(zhǔn)后方可用于制苗。將檢定合格的菌種接種子于規(guī)定的培養(yǎng)基，按規(guī)定的條件增殖培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查及有關(guān)的檢查合格者即可作為種子液。種子液通常在0～4C可保存2個(gè)月，在保存期內(nèi)可作為菌苗生產(chǎn)的批量種子使用。

細(xì)菌性活疫苗多指弱毒菌苗，盡管種類(lèi)與苗型甚多，但基本制造程序相同。（一）菌種與種子第七頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

按1%～3%量將種子液接種于培養(yǎng)基，然后依不同菌苗要求進(jìn)行培養(yǎng)。如豬丹毒弱毒菌須在在深層通氣培養(yǎng)中加入適當(dāng)植物油作消泡劑，通入過(guò)濾除菌的熱空氣進(jìn)行培養(yǎng)制造菌液；又加布氏桿菌豬2號(hào)與羊5號(hào)弱毒菌經(jīng)固體表面培養(yǎng)完成后須按規(guī)定要求將菌苔洗下制成菌液。菌液于0～4C暗處保存，待抽樣經(jīng)純粹、活菌數(shù)等檢查合格后使用。（二）菌液培養(yǎng)

為提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可進(jìn)行濃縮，以提高單位活菌數(shù)，常用的依縮方法有吸附劑吸附沉降法、離心沉降法等，如于豬丹毒菌液內(nèi)加入0.2%～0.25%羧甲基纖維素(CMC)進(jìn)行濃縮，也可用離心沉淀濃縮。濃縮菌液應(yīng)抽樣作純粹、活菌數(shù)等檢查。（三）濃縮第八頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

經(jīng)檢驗(yàn)合格的菌液，按規(guī)定比例加入保護(hù)劑配苗，充分搖勻后隨即進(jìn)行分裝，分裝量必須準(zhǔn)確。分裝好的菌苗迅速送入凍干柜進(jìn)行預(yù)凍、真空干燥，凍于完畢后立即加塞、抽空、封口，移入冷庫(kù)保存，并由質(zhì)檢部門(mén)抽樣檢驗(yàn)。（四）配苗與凍干第九頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日流程圖1——細(xì)菌疫苗和類(lèi)毒素制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基細(xì)菌分離菌種弱毒菌種配置、滅菌鑒定減毒濾過(guò)脫毒純化加吸附劑吸附檢驗(yàn)配制滅菌檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制滅菌原料佐劑滅活菌液配苗、乳化滅活疫苗培養(yǎng)菌苗原液配苗活疫苗保護(hù)劑類(lèi)毒素毒素純化類(lèi)毒素菌液分裝、凍干分裝滅活原料精制類(lèi)毒素活化種子第十頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日三、病毒性動(dòng)物組織疫苗制造

病毒在易感動(dòng)物體內(nèi)可大量增殖，但在各器官組織、部位中增殖病毒的量卻有很大的差異，利用病毒增殖迅速、含毒量高的組織制造的疫苗稱(chēng)為組織疫苗(tissuevaccine)。動(dòng)物組織疫苗包括動(dòng)物組織滅活疫苗和動(dòng)物組織弱毒活苗兩類(lèi)，前者多數(shù)由強(qiáng)毒株制造，如豬瘟結(jié)晶紫疫苗、狂犬病羊腦組織疫苗；后者均以弱毒株生產(chǎn)，如豬瘟兔化弱毒乳兔組織疫苗、牛瘟兔化弱毒組織疫苗等。

動(dòng)物質(zhì)量直接影響到組織疫苗的質(zhì)量，特別是對(duì)疫苗的安全性和效力有著決定性的作用，動(dòng)物必須符合下列標(biāo)準(zhǔn)：

(1)應(yīng)該是清潔級(jí)(二級(jí))以上的等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，即無(wú)規(guī)定的人獸共患性病原體動(dòng)物；

(2)應(yīng)是對(duì)所接種病毒易感性高的動(dòng)物，即在品種、年齡和體重方面合乎要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。（一）動(dòng)物選擇第十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

種毒既可用抗原性?xún)?yōu)良、致死力強(qiáng)的自然毒株臟器組織毒或強(qiáng)毒株增殖培養(yǎng)物，也可用弱毒株組織毒種。無(wú)論何種種毒都須經(jīng)純粹、抗原性和免疫原性檢查合格后使用。接種途徑依病毒性質(zhì)和目的而異，例如豬瘟結(jié)晶紫苗，采取豬肌肉注射血液毒種；牛瘟兔化弱毒疫苗，以兔耳靜脈注射脾淋毒種；狂犬病疫苗，用兔腦毒種接種綿羊腦內(nèi)途徑感染。幾種動(dòng)物常用的接種途徑如下：

1.腦內(nèi)注射：顱前后中線(xiàn)5mm平行線(xiàn)與瞳孔橫線(xiàn)交叉處。

2.靜脈注射：家兔由耳靜脈注入；雞自翅下肢靜脈注入。

3.肌肉注射：選擇腿部、胸部、臀部等肌肉豐滿(mǎn)處注射。

4.皮下注射：家兔和豚鼠可選擇在腹部或后腿內(nèi)注射。

5.腹腔注射：家兔與豚鼠可選腹股溝處刺入腹腔。（二）種毒與接種第十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

動(dòng)物在接種感染后應(yīng)每天觀察和檢查規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)，指標(biāo)或項(xiàng)目因不同病毒而異。常規(guī)觀察、檢查的項(xiàng)目如食欲、精神和活動(dòng)狀態(tài)、體溫、糞便、尿和血液變化等。根據(jù)觀察的征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動(dòng)物按規(guī)定方式剖殺，采取收集含毒量高的器官組織。如豬瘟結(jié)晶紫疫苗采取發(fā)病豬的血液制備；兔出血癥組織滅活疫苗采集病兔肝臟生產(chǎn)；狂犬病疫苗利用發(fā)病羊的羊腦組織制造。（三）觀察與收獲第十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日1．組織滅活疫苗采取收獲的組織經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)及毒價(jià)測(cè)定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液和滅活劑（甲醛、酚、結(jié)晶紫等）制成勻漿，然后按不同病毒的滅活溫度、時(shí)間進(jìn)行滅活。如狂犬病疫苗配制按腦組織1:4加入含有甘油及1%酚蒸餾水，于360.5C滅活7天制成；豬瘟結(jié)晶紫疫苗配制，按血毒4份，結(jié)晶紫甘油溶液1份混合，于37C~38C滅活6~8天。2.弱毒組織疫苗在無(wú)菌操作下剔除臟器上的脂肪與結(jié)締組織等，稱(chēng)重后剪碎，加入適最保護(hù)劑制成勻漿，然后濾過(guò)扣除殘?jiān)?，再按濾液中的實(shí)際組織量計(jì)算稀釋倍數(shù)，加入余量保護(hù)劑和青鏈霉素500~1000U(g/ml)，充分搖勻后置0~4C冷暗處處理一定時(shí)間后作無(wú)菌檢驗(yàn)與毒價(jià)測(cè)定。合格者進(jìn)行分裝，冷凍真空干燥制成凍干疫苗。（四）制苗第十四頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日流程圖2——病毒性組織疫苗制造工藝流程動(dòng)物感染動(dòng)物毒株種毒滅活病毒液鑒定培育檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制原料佐劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒組織含病毒懸液配苗活疫苗保護(hù)劑分裝、凍干分裝滅活原料種子擴(kuò)增收獲配制純化病毒懸液接種第十五頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日四、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造

受精卵必須來(lái)自SPF雞群，至少源于未用抗生素藥物的非免疫雞群，以免受母源抗體的干擾和殘留抗生素的影響。從受精卵入孵開(kāi)始至培養(yǎng)全過(guò)程都應(yīng)保持無(wú)菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動(dòng)，然后選擇。選擇一定日齡、發(fā)育正常的胚用于接毒培養(yǎng)，5~8日齡胚適用于卵黃囊接種；9~11日齡胚用于尿囊腔接種；10~12日齡胚適于羊膜腔接種；11~12日齡胚用于絨毛尿囊膜接種。

痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和皰疹病毒等一類(lèi)生物制品，目前仍然利用禽胚特別是雞胚制備，如雞新城疫苗、鴨瘟雞胚化弱毒疫苗、犬瘟熱雞胚弱毒疫苗等。禽胚疫苗生產(chǎn)的原材料來(lái)源方便、質(zhì)量比較容易控制，制造程序簡(jiǎn)單，不需要過(guò)高的設(shè)備條件，生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量可靠。（一）雞胚選擇第十六頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日（二）種毒與毒種繼代

目前適應(yīng)于雞胚的種毒多系弱毒，包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類(lèi)。各種制苗用的種毒多數(shù)由國(guó)家菌毒種保藏部門(mén)或指定單位保存，保存的種毒多為凍干毒。凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復(fù)壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標(biāo)準(zhǔn)后方可作力生產(chǎn)疫苗的毒種，毒種檢定內(nèi)容包括無(wú)菌檢驗(yàn)、毒價(jià)測(cè)定和其他項(xiàng)目的檢定等。第十七頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日（三）接毒與收獲

雞胚接毒涉及接毒途徑和接毒量?jī)煞矫?。根?jù)不同的病毒與不同疫苗生產(chǎn)程序，選擇最佳接種途徑和接種量。接種途徑：絨毛尿囊膜接種尿囊腔接種羊膜腔接種卵黃囊接種如雞新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接種10~3稀釋毒種0.1ml，后者接種10~4稀釋毒種0.1ml。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗采用絨毛尿囊膜接種50-100倍稀釋毒0.2ml。1.接毒第十八頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時(shí)間和溫度、濕度以及收獲的標(biāo)準(zhǔn)與內(nèi)容物依不同的病毒和不同的疫苗而異。如雞新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39C、相對(duì)濕度60%~70%條件培養(yǎng)增殖，收集接毒后24~48h內(nèi)死亡胚，置0~10C冷卻4~24h，收獲胚液，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)，供制備濕苗用。也可收獲胚液、胎兒及絨毛尿囊膜混合制成乳劑制備凍干苗。鴨瘟雞胚化弱毒疫苗，則收集接毒后48~120h內(nèi)死亡的雞胚，冷卻后采取絨毛尿囊膜、尿囊液、胎兒制造凍干苗用。2.培養(yǎng)收獲第十九頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

按規(guī)定收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)合格后即可進(jìn)行配苗。

1.濕苗通常于雞胚液內(nèi)，按每毫升加入青霉素和鏈霉素500~1000U，放置0~10C冷暗處處理后分裝。

2.凍干苗經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)后合格的胚液或胚液、胎兒、絨毛尿囊膜乳劑，按比例加入保護(hù)劑，充分混合后濾過(guò)，于濾液內(nèi)按每毫升加入青、鏈霉素500~1000U，混合后分裝凍干。

3.滅活苗

收獲雞胚液經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)及毒價(jià)測(cè)定合格后，按規(guī)定比例加入平衡液，按不同病毒的滅活溫度、時(shí)間進(jìn)行滅活，加入相應(yīng)的佐劑，制備成滅活疫苗，放置4-10C保存。（四）配苗第二十頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日流程圖2——病毒性組織疫苗制造工藝流程受精卵禽胚毒株種毒滅活病毒液鑒定培育檢驗(yàn)檢驗(yàn)配制原料佐劑配苗、乳化滅活疫苗含病毒尿囊液或禽胚組織含病毒懸液配苗活疫苗保護(hù)劑分裝、凍干分裝滅活原料種子擴(kuò)增收獲配制純化病毒懸液接種第二十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日五、病毒性細(xì)胞培養(yǎng)疫苗制造

用于制苗用的種毒應(yīng)經(jīng)毒力、最小免疫量、安全性、無(wú)菌檢定合格，通常為凍干品，由國(guó)家指定的苗毒種保藏部門(mén)檢定分發(fā)。領(lǐng)取的種毒應(yīng)按規(guī)定在細(xì)胞繼代培養(yǎng)適應(yīng)后用作毒種，制苗用毒種應(yīng)按規(guī)定控制在一定代數(shù)以?xún)?nèi)，或?yàn)闈穸径痉N，或?yàn)閮龈啥痉N。

細(xì)胞培養(yǎng)疫苗有細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗和細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗兩類(lèi)，前者多以強(qiáng)毒毒株培養(yǎng)增殖制造，后者則用弱毒毒株增殖生產(chǎn)，兩者的制造程序既有相同之處，又有區(qū)別。由于病毒不同與疫苗性質(zhì)不同，所采用的細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)方法也有所不同（一）種毒與毒種繼代第二十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日

1907年美國(guó)生物學(xué)家Harrison，在無(wú)菌條件下以淋巴液為培養(yǎng)基成功地在試管中培養(yǎng)了蛙胚神經(jīng)組織達(dá)數(shù)周，創(chuàng)立了體外組織培養(yǎng)法。在隨后的近一個(gè)世紀(jì)里，隨著細(xì)胞生物學(xué)、培養(yǎng)系統(tǒng)及培養(yǎng)方法等領(lǐng)城的不斷豐富和完善，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)得到了很大的發(fā)展。發(fā)展至今已成為生物、醫(yī)學(xué)研究和應(yīng)用中廣泛采用的技術(shù)方法，利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價(jià)值的酶、生長(zhǎng)因子、疫苗和單抗等，已成為醫(yī)藥生物高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分。大規(guī)模動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)在生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程中顯示出強(qiáng)大的潛力。(二)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)第二十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展第二十四頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的主要優(yōu)點(diǎn)㈡研究的條件可以人為的控制㈠研究的對(duì)象簡(jiǎn)單㈢研究的樣本較均一性㈣研究的內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄㈤研究的范圍比較廣泛㈥研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)第二十五頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)取出組織、細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無(wú)菌、適當(dāng)溫度和一定的營(yíng)養(yǎng)條件下，使之生存和生長(zhǎng)，并維持其結(jié)構(gòu)和功能特性。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件滲透壓水的質(zhì)量營(yíng)養(yǎng)條件氣體條件溫度條件酸堿度無(wú)菌條件細(xì)胞培養(yǎng)第二十六頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日目前合成培養(yǎng)基的種類(lèi)已有數(shù)十種，大多數(shù)培養(yǎng)基都是為適應(yīng)某種組織細(xì)胞的生長(zhǎng)而在某種合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良而來(lái)的。

目前較為常用的有199培養(yǎng)液、Eagle(MEM、DMEM)培養(yǎng)液、RPMI1640培養(yǎng)液、HAM培養(yǎng)液等。

合成培養(yǎng)基的主要成份有：氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽，其它輔助物質(zhì)?；A(chǔ)成分添加成分血清、抗生素、碳酸氫鈉、緩沖劑等(二)培養(yǎng)基生長(zhǎng)液和維持液第二十七頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日(三)細(xì)胞原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限,可稱(chēng)為有限細(xì)胞系(finitecellline)，

如可以連續(xù)培養(yǎng)50代以上，則稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞系(continiouscellline)。1.原代細(xì)胞

取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱(chēng)為原代細(xì)胞。傳代細(xì)胞：細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中培養(yǎng)獲得的細(xì)胞。第二十八頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日原代細(xì)胞的獲?。?/p>

用直接從機(jī)體獲得的細(xì)胞進(jìn)行的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)，這種培養(yǎng)過(guò)程主要是采用無(wú)菌操作的方法，把組織（或器官）從動(dòng)物體內(nèi)取出，經(jīng)酶消化處理，使分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在人工條件下培養(yǎng)，使其不斷地生長(zhǎng)和繁殖。原代細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代：

原代細(xì)胞初代培養(yǎng)后，可以傳代，但代數(shù)有限，細(xì)胞特性有一定的變化。原代培養(yǎng)是建立各種細(xì)胞系的第一步。第二十九頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日傳代細(xì)胞是指能在體外連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)胞系，大都數(shù)來(lái)源于癌變細(xì)胞。

傳代培養(yǎng)是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1:2或其他比率轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的傳代通常是采用胰蛋白酶消化，把細(xì)胞分散成單細(xì)胞再傳代，而懸浮型生長(zhǎng)細(xì)胞則用直接傳代法或離心法傳代。

2.傳代細(xì)胞及培養(yǎng)第三十頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)相比，培養(yǎng)條件更嚴(yán)格，控制難度更大，其培養(yǎng)方法可概括為：靜止培養(yǎng)法懸浮培養(yǎng)法轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)法細(xì)胞培養(yǎng)方法固定化培養(yǎng)法第三十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日單層貼壁培養(yǎng)法接種后，細(xì)胞經(jīng)過(guò)吸附、接觸而貼附于基質(zhì)表面，然后進(jìn)行生長(zhǎng)、分裂繁殖，很快進(jìn)入對(duì)數(shù)期。一般數(shù)天就長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)表面，形成致密的單層細(xì)胞。最后，貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)形成二種形態(tài)，成纖維樣型細(xì)胞(fibroblast-likecelltype)和上皮樣型細(xì)胞(epithilium-likecelltype)。單層貼壁培養(yǎng)(monolayeranchoraged-dependentculture)是指把細(xì)胞貼附于一定的固體支持表面上進(jìn)行的單層培養(yǎng)方法，這是是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的一種重要方法。第三十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，2022年，8月28日旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)是較期培養(yǎng)采用的細(xì)胞培養(yǎng)方法，目前仍用于疫苗等生產(chǎn)。轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)主要優(yōu)點(diǎn)是：旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)簡(jiǎn)單，投資少，經(jīng)濟(jì)，可做成支架，大量培