福建省三明市第一中學(xué)高中生物選修一專題5-實驗-DNA的粗提取與鑒定

【實驗】DNA的粗提取與判斷一、實驗原理1.DNA在NaCI溶液中的溶解度隨NaCI濃度的不同樣而不同樣。當(dāng)NaCI的濃度為0.14mol/L時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可使溶解在NaCI溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的其余好多物質(zhì)溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取含雜質(zhì)較少的DNA3.DNA遇二苯胺（開水?。境伤{(lán)色；DNA還有遇甲基綠溶液被染成藍(lán)綠色的特點(diǎn)。上述兩種方法均可用于判斷DNA的存在。二、資料器具雞血細(xì)胞液；鐵架臺，鐵環(huán)，鑷子，三腳架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，玻璃棒，濾紙，滴管，量筒（100mL1個），燒杯（100mL1個，50mL500mL各2個），試管（20mL2個），漏斗，試管夾，紗布；體積分?jǐn)?shù)為95%勺酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)24h）,蒸餾水，質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2moI/L和0.015moI/L的氯化鈉溶液，二苯胺試劑三、方法步驟步驟操作方法原理取0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液防止血100mL,與新鮮液凝固，制備雞的雞血混雜并攪血細(xì)胞使血細(xì)拌，爾后靜置一液胞與血天或離心機(jī)離心約2?漿分別3min，除去上清液取20mL蒸餾水與約5?10mL提取細(xì)的雞血細(xì)胞液使細(xì)胞胞核物混雜并充分?jǐn)囘^分吸質(zhì)拌，爾后用單水而破層紗布過濾，裂取濾液于燒杯中溶解DNAJ析出DNA并濾取JDNA的再溶解J含DKA的耕殉物提取較純凈的DNAJ

2OmL2mol/L瓠化鈉溶液

取2mol/L的DNA在NaCl溶液40mL高濃度與上述濾液混氯化鈉合后，用玻璃溶液中棒沿一個方向溶解度攪拌1min最大沿?zé)瓋?nèi)壁慢慢加入蒸餾水DNA的并輕輕攪拌，溶解度至白色絲狀粘隨氯化稠物不再增添鈉溶液時停止加水，濃度的爾后用多層紗降低而布過濾，取紗降低布上的粘稠物用鑷子夾取紗布上的粘稠物放入20mL濃度DNA在為2mol/L氯化高濃度鈉溶液中，攪氯化鈉拌至完整溶解，溶液中爾后用兩層紗布溶解度過濾，取其濾液最大放入小燒杯中取95%勺、冷卻的酒精50mL與DNA不濾液混雜攪溶于酒拌，待岀現(xiàn)絲精，岀狀物時用玻璃現(xiàn)沉淀棒將其卷起取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為0.015mol/L的NaCI溶液5mL,將絲狀物溶解。爾后放入此中一支試管中，用玻ShLO.Ol5maL/L提取物如L二葦胰璃棒攪拌，使絲(DNA遇狀物溶解。爾后，二苯胺DNA的r向兩支試管中各（開水判斷tali'②

加入4mL的二苯?。景吩噭；祀s均成藍(lán)勻后，將試管置于開水中加熱5min，等試管冷卻后，觀察而且比較兩支試管中溶液顏色的變化。四、常有問題解析1.從雞血細(xì)胞核中提取的物質(zhì)是DNA嗎？在雞血細(xì)胞中加入蒸餾水，而且攪拌，利用浸透作用原理使雞血細(xì)胞破碎，攪拌進(jìn)一步促進(jìn)了雞血細(xì)胞的破碎，于是開釋出此中的DNA自然也有少許的RNA還的蛋白質(zhì)。所以,開釋出的物質(zhì)是DNARNA和蛋白質(zhì)的混雜物，不只是只有DNA怎樣提升血細(xì)胞因低滲而破碎的效率？血細(xì)胞的細(xì)胞膜對低滲溶液有必然的抵抗能力，這稱為浸透脆性。一般而言，血細(xì)胞與蒸餾水相混雜而使血細(xì)胞處于極度的低滲環(huán)境之中，細(xì)胞因大批失水而致最后破碎并開釋出胞內(nèi)物（包含細(xì)胞核）。為促進(jìn)細(xì)胞在低滲條件下破碎，能夠輔以快速而有力的攪拌，使之受機(jī)械震蕩而更易破碎。3.怎樣才能把血細(xì)胞開釋的DNA濾入采集的濾液中？這一步較難辦理，在過濾過程中經(jīng)常發(fā)生因粘稠的果胨樣物質(zhì)擁塞過濾紗布的網(wǎng)眼而

使后續(xù)的過濾難以完成，好多

DNA

沒能濾入濾液中，這是造成失敗的主要原由之一。解決的方法有：過濾時待過濾溶液倒入漏斗的速度應(yīng)遲緩，

省得聚積于溶液中層的膠狀

物一下就把紗布堵住，使過濾不能夠完成；一旦出現(xiàn)大批膠狀物使過濾不能夠進(jìn)行下去，切忌使勁擠壓而使膠狀物也濾入濾液之中，能夠把膠狀物重新用適合的2molNaCI溶液進(jìn)行攪拌，使此中的DNA獲得溶解，爾后再進(jìn)行過濾。4.實驗中看到的絲狀物的粗細(xì)是否是DNA分子的直徑呢？不是。因為DNA分子直徑只有2nmo絲狀物是多個DNA分子聚在一起形成的。5.盛放雞血細(xì)胞液的容器，最好是塑料容器。雞血細(xì)胞破碎今后開釋出的DNA簡單被玻璃容器吸附，，，提取到的DNA就會更少。因為細(xì)胞內(nèi)DNA的含量原來就比較少再被玻璃容器吸附去一部分所以，實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣能夠減少提取過程中DNA的損失。同理，玻璃棒有吸附DNA的作用，可經(jīng)過慢慢旋轉(zhuǎn)玻璃棒的方法卷起濃縮后的DNA絲狀物。6.利用DNA在濃度較低的氯化鈉溶液中溶解度小的原理，向含有DNA的濃度較高的