實驗4 薄層色譜法分離鑒定食品中的黃酮類化合物131031

實驗4薄層色譜法分離鑒定食品中的黃酮類化合物一實驗?zāi)康耐ㄟ^卡瑪薄層色譜儀分析食品中黃酮類化合物的實驗，了解薄層色譜分離方法的原理及薄層色譜儀的大致結(jié)構(gòu)；掌握使用薄層色譜儀的及其相關(guān)軟件的方法。二實驗原理將黃酮類粗提物采用半自動上樣法，借助于混合物中的組分，在互不相容的組分件進行吸附或分配，以達到分離的目的。三儀器與藥品瑞士卡瑪(CAMAG,三儀器與藥品瑞士卡瑪(CAMAG,Switzerland)薄層色譜儀構(gòu)造如下圖所示(本實驗室薄層色譜儀包含除6之外的所有部件)。色譜展開流動相為：氯仿:甲醇=9:1。抿告4T四實驗方法及操作步驟薄層板使用前先活化,如有特殊要求,還應(yīng)預(yù)洗?；罨椒ǎ簩⒐枘z板移入烘箱，緩慢升溫至105-110°C恒溫活化半小時，取出放入干燥器中備用。點樣點樣是平面色譜中最重要的步驟，點樣過程中產(chǎn)生的誤差無法通過色譜展開和計算來校正。本設(shè)備采用噴霧點樣，條帶狀等多種方式點樣。其中條帶狀點樣適合中藥分析。

條帶狀點樣的優(yōu)勢《中國藥典薄層圖譜集》對點樣的要求從左到右兩個一組分別為手動點狀點樣、噴霧點狀點樣、手動條帶狀點樣、噴鬢式條帶狀點樣條帶狀點樣的優(yōu)勢《中國藥典薄層圖譜集》對點樣的要求從左到右兩個一組分別為手動點狀點樣、噴霧點狀點樣、手動條帶狀點樣、噴鬢式條帶狀點樣■一般采用條帶狀點樣，帶寬8~10mm(TLC),5~8mm(HPTLC),高度不超過1mm?點狀點樣，直徑一般不大于3mm(TLC)。釆用接觸式時盡量不要損傷薄層板?定量點樣，提高樣品色譜和對照藥材色譜可比性■點樣時應(yīng)注意選擇適宜的溶劑。樣品的溶解度、溶液粘度等均會對點樣質(zhì)畳產(chǎn)生影響。n-hexanetoluenemethanoln-hexanetoluenemethanol3.展開展開式薄層色譜中受影響因素最多的步驟，展開劑的選擇、不同展開方式、溫度、展開距離對成分分離的影響。其中展開濕度的影響值得重視且較難控制。飽和&預(yù)平衡對色譜展開影響 濕度對Rf值的影響展開時間22展開時間22min 17min 13minJR開鋼：二氯乙烷-甲図-異丙審-氨水(50:10:10:2)本實驗室使用的為全自動展開系統(tǒng)。L1ir=三無與倫t可進行IL1ir=三無與倫t可進行I平面色譜展開用標(biāo)準化前展層析缸中進行■全自動全自動展開系統(tǒng)ADC24.色譜后衍生化本實驗室使用的薄層色譜儀器帶熱激發(fā)反應(yīng)，可短時間內(nèi)將展開板進行烘干5.圖譜記錄和評價該系統(tǒng)優(yōu)點：曝光時間自動偵測、曝光時間課手動調(diào)節(jié)、專業(yè)圖像增強—圖像校正、專業(yè)圖像增強—空白板背景扣除。五軟件設(shè)定 導(dǎo)入雙擊軟件f 設(shè)定參數(shù)f新建"1.點樣器2?展開器3.觀察器點樣器設(shè)置：進入Linomat5General界面*■調(diào)整Sequence.defaults?進入Sequence界面（調(diào)整Numberoftracks、Bandlength、點樣位置x,y軸、樣點間隔、點樣量、點樣順序等等）展開器設(shè)置：新建 進入界面設(shè)定參數(shù)（預(yù)飽和時間、預(yù)飽和液所需體積、展開劑體積、展開距離、吹干體積）—開始—提示加預(yù)報和液—加預(yù)飽和液過程中加展開劑—展開完畢，待吹干、取出、放入觀察室觀察設(shè)置：新建 選擇所需要用觀察光，如“254nm,360n