《食品檢測研究4300字（論文）》

高效液相色譜法在食品檢測中的應(yīng)用研究—以橙皮苷檢測為例摘要：高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)具有高效、高壓、高靈敏度、操作簡單等優(yōu)點，在現(xiàn)代分析領(lǐng)域如食品衛(wèi)生、環(huán)境安全、石油化工、生物工程、天然產(chǎn)物等方面應(yīng)用廣泛。高效液相色譜的分離原理是利用分析物在固定相上的吸附、解吸速率差異，色譜柱對不同分析物的保留時間不一樣，使各成分依次流出色譜柱而達(dá)到分離的目的。在進(jìn)行高效液相色譜分析之前，需要對分析樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)那疤幚?，并且前處理的好壞直接影響檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。近年來，許多樣品前處理技術(shù)被開發(fā)出來并用于實際樣品的分析，綠色、簡單、快速的前處理方法一直是廣大研究者致力于發(fā)展的方向。關(guān)鍵詞：高效液相、橙皮苷、檢測、高效緒論HPLC概述在現(xiàn)代色譜分析法中，高效液相色譜法（簡稱HPLC）是20世紀(jì)60年代中后期在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上發(fā)展起來的具有高效、高壓、高靈敏度、高分析速度、應(yīng)用范圍廣（一快、一廣、三高、）的一種新型分離分析技術(shù)[1]。高效液相色譜發(fā)的分離原理是基于各組分與流動相及固定相分子間相互作用力的差異，即由于樣品中各組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的差異，樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數(shù)、吸附脫附能力、離子吸引、或親和作用的強弱不同，使得各組分在色譜柱中滯留的時間不同，從而依次從色譜柱中流出而達(dá)到分離。世界上第一臺高效液相色譜儀是由克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)完成，隨著儀器結(jié)構(gòu)變得更加精密和完善，儀器的分離能力和分離效率變得越來越高，尤其是制備色譜柱技術(shù)的進(jìn)步，如今利用化學(xué)鍵合固定相填充的色譜柱能夠完成更多組分的同時分離。根據(jù)固定相、流動相的相對極性大小，可以將液相色譜分為正、反相兩類色譜，流動相及性小于固定相的稱為正相色譜，流動相及性大于固定相的稱為反正相色譜。在實際分析中，反向色譜能夠滿足更多物質(zhì)的分離要求[2]。據(jù)統(tǒng)計，自20世紀(jì)80年代以來，每年約有3/4的色譜分離是在化學(xué)鍵合的反向色譜注中完成的。高效液相色譜的應(yīng)用十分廣泛，可用于分析70%以上的有機化合物，特別適用于大分子、高沸點、極性強和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析；另外外，其對無機物也有很好的分離效果。由于高效液相色譜具有分析速度快、靈敏度高、色譜柱和流動相選擇范圍寬、易于實現(xiàn)自動化、流出組分易收集等優(yōu)點，并且對儀器結(jié)構(gòu)的不斷改進(jìn)，高效液相色譜已經(jīng)成為極為重要的化學(xué)分離分析手段。目前，高效液相色譜法已被廣泛地應(yīng)用于食品衛(wèi)生、生物化學(xué)、有機化學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、中草藥研究、制藥工業(yè)研究和石化分析等領(lǐng)域，也是化學(xué)工作者不可或缺的工具之一[3]。高效液相色譜儀簡述高效液相色譜儀是高效液相色譜法（HPLC）的有效檢測儀器，它是運用液相色譜高效的原理，在高壓分離的狀態(tài)下，通過化學(xué)反應(yīng)將受熱不穩(wěn)定的、沸點高的高分子化合物，轉(zhuǎn)化為有機化合物，根據(jù)的原理就是溶質(zhì)內(nèi)各分子之間的分子大小、吸附力不同和間隔不同，在高壓狀態(tài)下產(chǎn)生排斥阻礙作用后進(jìn)行的分離，最后再對分離結(jié)果加以高準(zhǔn)確度分析的設(shè)備。它的型號有很多種，但部件構(gòu)成和構(gòu)成依據(jù)的原理都是相同的，主要部件包含：溶質(zhì)槽、壓力表、高壓泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、收集器、記錄儀等，最后根據(jù)記錄儀顯示出的數(shù)據(jù)，用圖譜的形式表現(xiàn)出來，便于之后的記錄、分析和打印。在高校色譜分析法的運用中，利用色譜儀器對實驗對象進(jìn)行檢測，根據(jù)試驗樣品色譜柱的顯現(xiàn)，比對參照色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)，有效的檢測樣品中溶質(zhì)的濃度變化，并且最后以圖形、圖譜的形式表示檢測結(jié)果，通過對檢測圖譜的分析對樣品進(jìn)行定量和定性的分析，并在此基礎(chǔ)上，對樣品進(jìn)行改進(jìn)，以實現(xiàn)對所研究物品成分的重新調(diào)配，再進(jìn)行高效液相色譜精確的檢測，以滿足食品添加劑在食品中的嚴(yán)格攝入標(biāo)準(zhǔn)[4]。高效液相色法技術(shù)的特點及其優(yōu)越性相比其他傳統(tǒng)的檢測方法，高效液相色譜法尤其突出的優(yōu)勢，一方面，高效液相色譜的檢測狀態(tài)是流動性的液體狀，相比于氣相色譜免去了溶質(zhì)的氣化過程，使檢測在很大程度上實現(xiàn)了難度低、試用范圍廣的拓展；另一方面，這種方法需要的硬件設(shè)施配備完善，這些硬件設(shè)施都要求精度極高、自動化極強、數(shù)據(jù)精準(zhǔn)，在檢測的過程中達(dá)到最高要求的效率和質(zhì)量，所獲得的檢測結(jié)果也能達(dá)到要求的準(zhǔn)確性，影響檢測結(jié)果的因素包含著好的分離效果和好的回收效果，只有這樣才能保證最終分析結(jié)果呈現(xiàn)出來的高精度性和高靈敏性[5]。高效液相對橙皮苷檢測的方法此次論文以某消化口服液為例，研究高效液相法對橙皮苷檢測的方法研究。某消化口服液從陳皮、茯苓、炒白術(shù)、炒山楂、煨山藥、大棗等十幾味中藥中提取制成，具有健脾消化等功能。臨床用于治療積食、食欲不振等癥狀，經(jīng)多年實驗表明，療效明顯。陳皮中的橙皮苷是主要的活性成分，可作為質(zhì)量控制指標(biāo)性成分[6]。為了能有效地控制制劑質(zhì)量，本研究運用高效液相色譜法對該制劑中橙皮苷的含量進(jìn)行測定，現(xiàn)報告如下。1.材料sP8810高效液相色譜儀，SP4270積分儀，SPloo檢測器(美國光譜公司)。橙皮苷對照品：由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：cr72120011l。樣品由本院中藥制劑室提供，批號：040802，040327，040515，041111，050121。甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。2.方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：VP-BDS(150nⅡn×4．5mm)。柱溫：常溫；流動相為：乙腈．水．磷酸(20：79．8：O．2)；流速：1．0ⅡlL／IIlin，檢測波長：284衄，時間為30IIlin。2.2對照品溶液制備精準(zhǔn)稱取在80℃干燥1h的橙皮苷對照品于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，制成每1IllL含橙皮苷80腭的對照品溶液。2.3供試品溶液制備取本品5支，置100rllL三角瓶中搖勻，精密吸取本品10rIlL，用乙酸乙酯振搖提取4次(20mL，15n1L，1511lL，15mL)，合并乙酸乙酯提取液，加水15HlL洗1次，水洗液再用乙酸乙酯15H1L提取1次，水液棄去，合并乙酸乙酯提取液置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解并定量至25-IlL容量瓶中，搖勻，用0.45止微孔的濾膜過濾，即得。2.4陰性溶液的制備依照本品的制作工藝流程制作出不含陳皮藥材的制劑。制成陰性制作品溶液所依據(jù)的標(biāo)注是供試品溶液的標(biāo)準(zhǔn)。測定步驟：精密吸取對照品溶液、、供試品溶液、陰性液各10皿，加入高效液相色譜儀中，觀察液相色譜圖，經(jīng)對照色譜相應(yīng)位置發(fā)現(xiàn)，在此峰位陰性對照品無吸收，并未干擾對本品橙皮苷含量測定。2..5線性范圍試驗精密稱取在80℃干燥1h的橙皮苷對照品4．80唧置50z11L容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得1n1L含橙皮苷96弘g的溶液。分別精密吸取3、6、9、12、15汕(0．288腭，O．576腭，0．864腭，1．152鵂，1．440腭)溶液，注入高效液相色譜儀中，測定色譜峰面積，以峰面積(A)對濃度(C)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：A=2401542．361X一29236．4，r=0．9995。由測定結(jié)果得知，橙皮苷在0．288．1．440熘范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.6穩(wěn)定性試驗精密吸取供試品溶液10rIlL，按2．3項制備供試品溶液，精密取同一供試液，按o、2、4、6、8h間隔，每隔2h測定1次，結(jié)果為胚D=0．38％。供試品溶液制備后8h內(nèi)測定，橙皮苷含量無明顯變化，在此時間內(nèi)，被測組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。2.7精密度試驗精準(zhǔn)吸取2.2項下對照品溶液10皿，進(jìn)樣重復(fù)5次，測定平均峰面積為2312916，腳為0．18％。2．8重復(fù)性試驗取兒樂康口服液5份，每份10ⅡlL，按2．3項下供試品溶液方法制備，分別進(jìn)樣10皿，計算測得橙皮苷平均值為：0．3855叫支，腳=o．96％(凡=5)。2．8重復(fù)性試驗取研究品5份，每份10ⅡlL，按2.3項下供試品溶液方法制備，分別進(jìn)樣10皿，測得橙皮苷平均值為：0.3855叫支，腳=o．96％(凡=5)。2.9加樣回收率試驗精準(zhǔn)吸取已知含量的本品5mL，5份，精準(zhǔn)加入橙皮苷對照品溶液20ⅡlL，按2．3項下供試品溶液制備方法制備，定容，測定，結(jié)果本法的平均回收率97．5％一100％，麟D為1．03％，符合有關(guān)規(guī)定。結(jié)果見表l。2.10橙皮苷樣品中含量測定精密吸取不同批號樣品，分別按2．3項處理，進(jìn)樣10皿，按上述色譜條件測定，以峰面積計算橙皮苷在樣品中的含量，結(jié)果詳見表2。3.實驗結(jié)論本試驗根據(jù)陳皮的性質(zhì)，振搖萃取實驗證明，以乙酸乙酯為溶劑，振搖提取，能將樣品中的橙皮苷基本提取完全，方法的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、精密度、回收率試驗均符合有關(guān)規(guī)定，可作為本制劑的定量分析方法[7]。結(jié)論高效液相色譜法作為當(dāng)前的一種現(xiàn)代的檢測方法，在眾多產(chǎn)品的檢測的應(yīng)用中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，HPLC在近十幾年里發(fā)展迅速，其操作簡單、靈敏度高，被廣泛的運用于產(chǎn)品的檢測環(huán)節(jié)中，因為這種檢測方法在目前是最具有優(yōu)勢的檢測手段，其檢測結(jié)果的高精確度就是它的價值所在。綜上所述，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人們對生活水平要求的提高，人類生產(chǎn)生活都是HPLC需要進(jìn)軍的領(lǐng)域，涉及食品檢測、化學(xué)成分檢測、醫(yī)療檢測、商業(yè)檢測等各類民生生活。高效液相色譜法也要積極探索、不斷創(chuàng)新，以便能夠更廣泛、更精確、更實用的投入到更多涉及民生發(fā)展的領(lǐng)域當(dāng)中去。參考文獻(xiàn)：[1]楊全偉,肖柳.反向高效液相色譜法同時測定祛斑養(yǎng)陰顆粒中橙皮苷和黃芩苷的含量[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報：醫(yī)學(xué)版,2017,34(3):27-29.[2]張景艷,張宏,王磊,李建喜.高效液相色譜法測定去滯散中柚皮苷和新橙皮苷的含量[J].中國獸藥雜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