微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 微生物的實驗室培養(yǎng) 課件

微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1

微生物的實驗室培養(yǎng)巴斯德（近代微生物學(xué)家和奠基人）㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細(xì)胞類：細(xì)菌、支原體、放線菌、藍(lán)藻個體微小、結(jié)構(gòu)簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點(diǎn)：一.微生物基礎(chǔ)知識幾種菌落及其形態(tài)酵母菌青霉菌——青霉素真菌病毒的結(jié)構(gòu):由核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)）吸附注入合成釋放組裝病毒的繁殖病毒的營養(yǎng)方式：寄生1.何為培養(yǎng)基？3.不同的培養(yǎng)基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些營養(yǎng)成分？有何作用？請舉例說明。思考:

2.按照不同的培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基有哪些種類、配制特點(diǎn)及其應(yīng)用？一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基

人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。1.定義:2.分類:一、培養(yǎng)基按成分劃分合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基按形態(tài)劃分固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基按功能劃分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(1)按培養(yǎng)基的成分a.合成培養(yǎng)基:

由成分完全已知的化學(xué)試劑（各成分包括微量元素的量都確切知道）配制而成特點(diǎn):成分已知、精確、重復(fù)性高、但價格較貴、配制麻煩、且微生物在其中生長速度較慢。如:察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。一、培養(yǎng)基b.天然培養(yǎng)基:由天然物質(zhì)配制而成,成分難以確定,但配制方便,營養(yǎng)豐富。蒸熟的馬鈴薯----用于培育霉菌普通牛肉湯----用于培育細(xì)菌一、培養(yǎng)基c.半合成培養(yǎng)基:

一類主要用已知化學(xué)成分的試劑配制，同時又添加某種或某些天然成分的培養(yǎng)基如:馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基

一、培養(yǎng)基(2)按照培養(yǎng)基形態(tài)劃分a.固體培養(yǎng)基

在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑(如:瓊脂、明膠等）的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。用途:常用于微生物的分離、鑒定計數(shù)和菌種保存。b.液體培養(yǎng)基不加入凝固劑,成分均勻,微生物可充分接觸和利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)料,適于生理研究、發(fā)酵工業(yè)等。固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基c.半固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入少量(0.2—0.5%)凝固劑而呈半固體狀態(tài)。(2)按照培養(yǎng)基形態(tài)劃分用途:可用于觀察細(xì)菌的運(yùn)動、鑒定菌種和測定噬菌體的效價等方面固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基主要用于微生物的分離、計數(shù)等主要用于觀察微生物的運(yùn)動、鑒定菌種等主要用于工業(yè)生產(chǎn)需加入凝固劑，如瓊脂(3)按照培養(yǎng)基的功能劃分a.選擇培養(yǎng)基b.鑒別培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其它種類微生物生長的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同種類的微生物。選擇培養(yǎng)基應(yīng)用加入青霉素分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽分離金黃色葡萄球菌不加氮源分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞

培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì).

另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)的需求,例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣等的要求。一、培養(yǎng)基概念來源作用碳源凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)無機(jī)碳源

CO2NaHCO3等有機(jī)碳源

糖類脂肪酸花生餅石油等①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源1、微生物的碳源

自養(yǎng)型和異養(yǎng)型微生物分別能利用哪類碳源物質(zhì)？思考概念來源作用氮源無機(jī)氮源

N2、NH4+、

NO3-、NH3等有機(jī)氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物2、微生物的氮源

哪些微生物能夠利用分子態(tài)氮？氮源能否為微生物提供能量？思考概念成分作用為什么不可缺少？常見的生長因子微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物有機(jī)物酶和核酸的組成成分缺乏合成這些物質(zhì)所需酶或合成能力有限維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等3、生長因子培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。②營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比4∶1時，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3∶1時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。一、培養(yǎng)基根據(jù)配方你能配制出100ml培養(yǎng)基嗎？配方中的各成分為微生物提供了哪些營養(yǎng)？1、何為無菌技術(shù)？無菌技術(shù)包括哪些方面？2、消毒和滅菌的區(qū)別？3、常用的消毒方法有哪些？4、常用的滅菌方法有哪些？5、干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的操作步驟。二、無菌技術(shù)自主學(xué)習(xí)：對實驗操作的空間操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中的微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌操作內(nèi)容消毒使用較溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)所有的微生物，包括芽孢和孢子。二、無菌技術(shù)（1）日常生活經(jīng)常用到的是

煮沸

消毒法；（2）對一些不耐高溫的液體，則使用

巴氏

消毒法（例如牛奶）；（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用

紫外線

進(jìn)行物理消毒。（4）實驗操作者的雙手使用酒精進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用氯氣進(jìn)行消毒。消毒的方法常用的消毒方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒4、氯氣消毒水源5、紫外線消毒……二、無菌技術(shù)1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min。常用的滅菌方法二、無菌技術(shù)實驗原理高壓蒸汽滅菌

是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣,從而使溫度高于100℃。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。干熱滅菌實驗原理紫外線滅菌

是用紫外線燈進(jìn)行殺菌。紫外線殺菌機(jī)制主要是它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制。波長為200-300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強(qiáng)。實驗原理實驗室常用滅菌方法的比較滅菌方法適用對象所需條件滅菌時間灼燒滅菌接種的金屬工具(如接種針、接種環(huán))在酒精燈的火焰外焰灼燒直至燒紅干熱滅菌耐高溫需干燥的物品(如玻璃器皿、金屬用具)干熱滅菌箱內(nèi)160～170℃1～2h高壓滅菌培養(yǎng)基100kPa；121℃15～30minA.培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基或培養(yǎng)皿B.玻棒、試管、燒瓶和吸管C.接種環(huán)、接種針D.實驗操作者的雙手滅菌滅菌滅菌消毒二、無菌技術(shù)消毒與滅菌的區(qū)別滅菌方法條件結(jié)果常用方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法，還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

1、計算：根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計算配制100mL的培養(yǎng)基時，各種成分的用量。2、稱量：準(zhǔn)確地稱取各種成分。牛肉膏比較粘稠，可以用玻綁挑取，放在稱量紙上稱量。牛肉高和蛋白胨都容易吸潮，稱取時動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋。3.溶化

將稱好的牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加入少量的水，加熱。當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。往燒杯中加入稱量好的蛋白胨和氯化鈉，用玻棒攪拌，使其溶解。加入瓊脂，加熱使其熔化。在此過程中，不斷攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。當(dāng)瓊脂完全熔化后，補(bǔ)加自來水100mL。

4、滅菌

將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃條件下，滅菌15—30min。將培養(yǎng)皿用幾層舊報紙抱緊，5—8套培養(yǎng)基作一包，包好后放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160—170℃下滅菌2h。6．無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。5、倒平板

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板操作1.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。1234倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~

20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)12344.等待平板冷卻凝固，大約需5~10min。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。問題討論2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。二實驗操作二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算稱量溶化滅菌倒平板二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?計算二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中，減少誤差。計算二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板②加瓊脂的目的是什么?計算二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板②加瓊脂的目的是什么?作為凝固劑計算常用的凝固劑——瓊脂主要成分是硫酸半乳聚糖熔點(diǎn)為96℃

凝固點(diǎn)為40℃透明度強(qiáng)。二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板③在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？計算二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板③在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？在滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞，在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。計算二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板④培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？計算二實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板④培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？不能，因為培養(yǎng)皿要保持干燥，應(yīng)該用干熱滅菌。計算三、基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存（一）接種

將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種。

接種工具和方法接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法

平板劃線法:

通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.

在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.平板劃線法

一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。

一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。問題探討1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。稀釋涂布平板法

1.將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101~106的順序編號。2.用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。3.從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管離火焰1~2cm處.涂布平板操作

涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？

應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等。問題探討吸取充分均勻后的菌液取含有9mL無菌水之試管，將試管口過火滅菌。將菌液置入，此時試管須做記號為第一次稀釋。將試管于震蕩機(jī)上，使菌液混合均勻取出試管中的第一次十倍稀釋菌液1mL，加入另一個新的含9mL無菌水的試管中。重復(fù)此步驟直至所需要的稀釋濃度。由最后稀釋菌液中以玻璃吸管取出0.1mL菌液，置入準(zhǔn)備好的無菌瓊脂內(nèi)。將三角玻璃棒浸於酒精中將三角玻璃棒在火焰上燃燒須注意勿使燃燒中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃燒）使用玻璃棒將菌液均勻涂布開來，將培養(yǎng)皿置于恒溫培養(yǎng)箱中隔天觀察菌落數(shù)目，再依照稀釋倍數(shù)推算出菌液濃度。3、微生物的恒溫培養(yǎng)3、微生物的恒溫培養(yǎng)單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體四、課題成果評價1、未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？（對照組）沒有。若有菌落，說明滅菌不徹底。2、在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了獨(dú)立的菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小相似嗎？是。相似。如在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。

四、課題成果評價3、培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因。

菌落的大小不同，菌落分布位置相同。原因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大。4、如果你在培養(yǎng)基上觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

說明有雜菌污染。可能原因：滅菌不徹底、接種過程或培養(yǎng)過程中有雜菌污染。四、課題成果評價（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。

（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。

2、長期保存：甘油管藏法4、菌種的保存1、下列細(xì)菌中，能利用含碳無機(jī)物作碳源的是()A光合細(xì)菌B根瘤菌C硝化細(xì)菌D乳酸菌2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是()A糖、有機(jī)酸等B二氧化碳、碳酸鹽C蛋白質(zhì)D無機(jī)氮化物ACAC練習(xí)3、下列敘述不正確的是()A培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)B液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基所含的最基本物質(zhì)不相同C微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見的單個細(xì)菌BC練習(xí)4.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是（）A將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B接種純種細(xì)菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵D練習(xí)5.下列操作與無菌技術(shù)無關(guān)的是()A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成C練習(xí)練習(xí)6.外科手術(shù)器械和罐頭食品的處理，要以能夠殺死什么為標(biāo)準(zhǔn)()A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢D7.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是()A．計算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B．計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C．計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D．計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板C8.下列有關(guān)平板劃線接種法的操作錯誤的是（）A．將接種環(huán)放在火焰上灼燒B．將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)液C．蘸取菌液和劃線要在火焰旁進(jìn)行D．劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連D9.產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是(

)A．一個細(xì)菌，液體培養(yǎng)基B．許多細(xì)菌，液體培養(yǎng)基C．一個細(xì)菌，固體培養(yǎng)基D．許多細(xì)菌，固體培養(yǎng)基C解析：菌落是一個或幾個細(xì)菌的子細(xì)胞群體，在固體培養(yǎng)基上肉眼可見，是作為菌種鑒定的重要依據(jù)，若是多種細(xì)菌形成的菌落則不是標(biāo)準(zhǔn)菌落。答案：C評析：本題考查菌落的形成和特點(diǎn)，以及在計數(shù)中的應(yīng)用。10.消毒和滅菌是兩個不同的概念，滅菌是指徹底殺滅微生物使其永遠(yuǎn)喪失生長繁殖的能力。消毒僅指殺死一部分對人體有害的病原菌而對被消毒的物體基本無害。下列哪些事物適用于消毒處理 (

)①皮膚②飲用水③牛奶④注射器⑤培養(yǎng)皿⑥接種環(huán)⑦培養(yǎng)基⑧果汁⑨醬油⑩手術(shù)刀A．①②③⑧