消毒滅菌方法

消毒滅菌方法第一頁，共十六頁，2022年，8月28日滅菌的方法基本上分為二大類：物理方法（干熱滅菌、濕熱滅菌、射線滅菌、濾過滅菌）和化學(xué)方法（氣體滅菌、藥液滅菌）。下面將分別介紹幾種常用的滅菌方法。滅菌涉及到廠房、設(shè)備、容器、潔具、工作服裝、原輔材料、成品、包裝材料、儀器等等的滅菌。無菌藥品特別是注射液、供角膜創(chuàng)傷或手術(shù)用滴眼劑等無菌制劑是直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)而產(chǎn)生療效的藥品，所以對其質(zhì)量有特殊要求，它必須符合藥典無菌檢查的要求，為此，在生產(chǎn)過程中，要努力消除微生物的污染，殺滅藥品中的微生物，這就是滅菌要達(dá)到的目的。第二頁，共十六頁，2022年，8月28日第一節(jié)干熱滅菌法及其設(shè)備

1.

干熱滅菌

干熱可用于能耐受較高溫度，卻不宜被蒸汽穿透，或者易被濕熱破壞的物品的滅菌。同時干熱也是制藥工業(yè)中用于除熱原的方法之一。由于在相同的溫度下，干熱對微生物的殺滅效果遠(yuǎn)低于飽和蒸汽，故干熱滅菌需要較高的溫度或較長的滅菌時間。評價干熱法滅菌的相對能力時，一般可采用相似于F0值的致死率單位和生物指示劑2.

干熱滅菌的主要設(shè)備3.

干熱滅菌的主要設(shè)備有干熱滅菌柜、隧道滅菌系統(tǒng)。干熱滅菌設(shè)備一般由下列幾個重要部分組成：·

加熱器―――它是干熱滅菌設(shè)備的主要組成部分，對滅菌效果的好壞影響極大。加熱器故障是造成干熱滅菌設(shè)備滅菌效果下降的主要原因之一，其主要表現(xiàn)為升溫速度下降；影響熱分布；產(chǎn)生塵埃物質(zhì)。而造成加熱器故障的原因，主要是加熱器的長期使用或通過加熱器的空氣質(zhì)量較差所致。所以一般應(yīng)在滅菌器的加熱系統(tǒng)配置電流監(jiān)測器，以及時發(fā)現(xiàn)其故障。第三頁，共十六頁，2022年，8月28日高效過濾器―――在干熱滅菌設(shè)備中，進(jìn)風(fēng)應(yīng)通過高效過濾器；除去內(nèi)部空氣循環(huán)系統(tǒng)中產(chǎn)生的塵埃物質(zhì)需要高效過濾器；防止排風(fēng)倒流的污染也可裝高效過濾器。所以高效過濾器必須滿足干熱滅菌工藝用風(fēng)量的要求，并能承受相應(yīng)的風(fēng)壓?！?/p>

緩沖板、風(fēng)閥、氣流調(diào)節(jié)器或空氣檔板―――緩沖板或空氣檔板用于控制干熱滅菌器的空氣流量，多安裝于進(jìn)風(fēng)或排風(fēng)風(fēng)管或加熱器附近，用于正壓控制的氣流調(diào)節(jié)器可以安裝排風(fēng)系統(tǒng)中的防止倒流風(fēng)污染的高效過濾器附近，通過控制排風(fēng)量控制正壓，也可以用氣流調(diào)節(jié)器控制進(jìn)風(fēng)和排風(fēng)風(fēng)量以保持正壓。一般情況下，干熱滅菌器腔室內(nèi)的壓力略高于其相臨的非無菌區(qū)而略低于其相臨的無菌區(qū)。·

風(fēng)機―――對干熱滅菌器中的氣流循環(huán)影響很大，風(fēng)機的風(fēng)量應(yīng)該可以測量，并可調(diào)整，必要時可以要求供應(yīng)商將此項要求增加到其設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)中，因為風(fēng)機風(fēng)量的測量指示值，可以為設(shè)備使用過程中檢查風(fēng)機狀態(tài)提供依據(jù)。

第四頁，共十六頁，2022年，8月28日傳送帶（僅適用于連續(xù)法）―――傳送帶的速度，在連續(xù)傳送干熱滅菌系統(tǒng)中是十分重要的滅菌效果影響因素。目前大多數(shù)干熱連續(xù)法滅菌系統(tǒng)中已設(shè)有傳送帶速度控制器，但較少有速度記錄裝置。由于傳送帶速度決定了物料經(jīng)過滅菌器時所接受的熱量，所以其速度記錄是證明滅菌器在控制狀態(tài)下運行的基本資料之一，生產(chǎn)工藝中亦有必要保存每次滅菌過程的傳送速度的記錄。同時干熱滅菌器的SOP，也應(yīng)明確規(guī)定各種滅菌過程傳送帶的運行速度范圍，此運行速度范圍應(yīng)是經(jīng)過驗證確定的?！?/p>

運行連鎖控制系統(tǒng)―――干熱滅菌器中連鎖控制系統(tǒng)設(shè)有：門連鎖控制系統(tǒng)；壓力傳感器；溫度傳感、控制、停止傳送帶運行的連鎖控制裝置等，以保證在任何情況下出現(xiàn)溫度低于設(shè)計要求時防止滅菌物品在低于滅菌溫度的情況下通過滅菌器?！?/p>

溫度控制器及記錄儀―――在干熱滅菌系統(tǒng)中，溫度探測、傳感、控制、記錄系統(tǒng)是整個滅菌過程控制的基礎(chǔ)，其控制系統(tǒng)必須能保證滅菌器腔室內(nèi)滅菌溫度可以保持在設(shè)定的滅菌溫度范圍內(nèi)，其記錄系統(tǒng)必須將溫度探測、傳感系統(tǒng)的溫度讀數(shù)準(zhǔn)確無誤地記錄清楚。第五頁，共十六頁，2022年，8月28日第二節(jié)

濕熱滅菌法及其設(shè)備

一、濕熱滅菌法是在飽和蒸汽或沸水或流通蒸汽中進(jìn)行滅菌的方法。由于蒸汽潛熱大，穿透力強，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，所以滅菌效率比干熱滅菌法高。這是注射劑生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種滅菌方法，它具有滅菌可靠，操作方便，易于控制和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點。影響濕熱滅菌的因素有：1.

細(xì)菌的種類與數(shù)量：不同細(xì)菌，同一細(xì)菌的不同發(fā)育階段對熱的抵抗力有所不同。細(xì)菌數(shù)越少，滅菌時間越短。2.

藥物性質(zhì)與滅菌時間：一般來說，滅菌溫度越高滅菌時間越短。但考慮到藥物的穩(wěn)定性，應(yīng)在達(dá)到有效滅菌的前題下可適當(dāng)降低滅菌溫度或縮短滅菌時間。3.

蒸汽的性質(zhì)：蒸汽有飽和蒸汽，濕飽和蒸汽和過熱蒸汽。飽和蒸汽熱含量較高，熱穿透力較大，因此滅菌效力高。濕飽和蒸汽帶有水分，熱含量較低，穿透力差，滅菌效力較低。過熱蒸汽溫度高于飽和蒸汽，但穿透力差，滅菌效率低。4.

介質(zhì)的性質(zhì)：制劑中含有營養(yǎng)物質(zhì)，如糖類、蛋白質(zhì)等，增強細(xì)菌的抗熱性。細(xì)菌的生存能力也受介質(zhì)PH值的影響。一般中性環(huán)境耐熱性最大，堿性次之，酸性不利于細(xì)菌發(fā)育。第六頁，共十六頁，2022年，8月28日

濕熱滅菌法的主要設(shè)備濕熱滅菌法的主要設(shè)備是滅菌釜，滅菌釜種類很多，性能差異也很大，但其基本結(jié)構(gòu)大同小異，所用的材質(zhì)為堅固的合金?，F(xiàn)在國內(nèi)很多企業(yè)使用的方型高壓滅菌釜，能密閉耐壓，有排氣口、安全閥、壓力和溫度指示裝置。帶有夾套的滅菌柜備有帶軌道的格車，分為若干格。滅菌柜頂部裝有壓力表二只，一只指示蒸汽夾套內(nèi)的壓力，另一只指示柜室內(nèi)的壓力，兩壓力表中間為溫度計。滅菌柜的上方還應(yīng)安裝排氣閥，以便開始通入加熱蒸汽時排除不凝性氣體。近年來，一些制藥企業(yè)已經(jīng)開始采用具有抽真空能力及F0控制的蒸汽滅菌釜，目前國內(nèi)使用的進(jìn)口滅菌釜主要有二種：一種以蒸汽為滅菌介質(zhì)的旋轉(zhuǎn)式滅菌釜，如奧地利的HDRR009．20／IS，另一種以過熱水作介質(zhì)的噴淋式滅菌釜，如意大利FEDEGARI公司的FOW5－500。進(jìn)口滅菌釜的主要優(yōu)點是批次量較大，溫度控制系統(tǒng)準(zhǔn)確度及精密較好，產(chǎn)品滅菌過程中受熱比較均勻。

第七頁，共十六頁，2022年，8月28日國產(chǎn)快速冷卻滅菌釜工作原理如下：滅菌釜的基本滅菌程序為：第八頁，共十六頁，2022年，8月28日第三節(jié)其他滅菌方法及消毒方法

一、輻射滅菌法以放射性同位素，（60CO或137CS）放射的g射線殺菌的方法。射線可使有機化合物的分子直接發(fā)生電離，產(chǎn)生破壞正常代射的自由基，導(dǎo)致微生物體內(nèi)的大分子化合物分解。輻射滅菌的特點是不升高滅產(chǎn)品的溫度，穿透性強，適合于不耐熱藥物的滅菌，醫(yī)療器械、高分子材料、包裝材料等的滅菌。滅菌劑量一般用2.5×104GY（弋瑞）。此法已為《英國藥典》（1998），《日本藥局方》十三版所收載。我國有些企業(yè)亦用60CO對某些中藥和醫(yī)療器械進(jìn)行滅菌。輻射滅菌，設(shè)備費用高，對某此藥品可能產(chǎn)生藥效降低，產(chǎn)生毒性物質(zhì)或發(fā)熱物質(zhì)，使用輻射滅菌還應(yīng)注意安全防護(hù)措施。第九頁，共十六頁，2022年，8月28日二、紫外線滅菌法

是指用紫外線照射殺滅微生物方法。一般用于滅菌的紫外線波長是200~300nm，滅菌力最強的波長是253.7nm。紫外線作用于核酸蛋白促使其變性，同時空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧，從而起共同殺菌作用。紫外線進(jìn)行直線傳播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但較易穿透清潔空氣及純凈的水。因此本法適用于照射物體表面之滅菌、無菌室的空氣及水的滅菌；不適用于藥液的滅菌、固體物質(zhì)深部的滅菌；普通玻璃可吸收紫外線，因此裝于玻璃容器中的藥物不能用此法滅菌。紫外線對人體照射過久，會發(fā)生結(jié)膜炎，紅斑及皮膚燒灼等現(xiàn)象，故一般在人入室前開啟紫外線燈1~2小時，關(guān)閉后人才進(jìn)入潔凈室，如果必須在人進(jìn)去后仍要開紫外線滅菌，則人的皮膚及眼睛應(yīng)有有效的防護(hù)措施。用紫外線照射滅時要注意下列問題：1．紫外線的殺菌力，隨使用時間增加而減退，一般使用時間達(dá)到額定時間70％時應(yīng)更換紫外線燈管，以保證殺菌效果。國產(chǎn)紫外線燈平均壽命一般為2000h。2．紫外線的殺菌作用隨菌種不同而不同，殺霉菌的照射量要比殺桿菌大40~50倍。3．紫外線照射通常按相對濕度為60％的基礎(chǔ)設(shè)計，室內(nèi)濕度增加時，照射量應(yīng)相應(yīng)增加。4．紫外線滅菌效果與照射的時間長短有關(guān)，這需要通過驗證來確定照射時間。紫外照射燈的安裝形式及高度，應(yīng)根據(jù)實際情況，參考使用說明決定。第十頁，共十六頁，2022年，8月28日三、環(huán)氧乙烷滅菌法

環(huán)氧乙烷滅菌法是利用環(huán)氧乙烷氣體進(jìn)行殺菌的方法。它是一種傳統(tǒng)的滅菌方法，可應(yīng)用于工衣滅菌、不耐加熱滅菌的藥品、醫(yī)用器具、設(shè)施、設(shè)備等滅菌。環(huán)氧乙烷滅菌系統(tǒng)，主要有下列四項互相制約的重要因素影響滅菌效果：1.

濕度；2.

溫度；3.

氣體濃度；4.

滅菌時間。因為環(huán)氧乙烷是易燃易爆物質(zhì)，明火可以引起燃燒，同時由于氣體分解不可能引起爆炸，環(huán)氧乙烷滅菌中應(yīng)十分注意安全問題。環(huán)氧乙烷具有非常強的滲透和擴散能力，其滅菌的機理主要是強氧化，因此具有殺菌譜廣，滅菌能力強的特點，對微生物的繁殖體、芽孢有較強的殺滅效果。雖然環(huán)氧乙烷在高濃度時有刺激性臭味和毒性，但屬中度毒性，一般可以很快揮發(fā)，不會在系統(tǒng)內(nèi)表面殘留余毒。用環(huán)氧乙烷氣體滅菌的程序,大致為將滅菌物品置于滅菌器內(nèi)，減壓排除空氣，預(yù)熱，環(huán)氧乙烷氣體采用混合氣（一般環(huán)氧乙烷氣體含10~20％，二氧化碳含80~90％），在減壓下輸入混合氣體，保持一定濃度、溫度和濕度，經(jīng)過一定時間后，抽真空排除環(huán)氧乙烷氣體，然后送入無菌空氣置換環(huán)氧乙烷氣體，直至排凈。第十一頁，共十六頁，2022年，8月28日四、過濾滅菌法

過濾滅菌法是用濾過方法除去活的或死的微生物的方法，是一種機械除菌方法，這種機械叫除菌過濾器。主要用于對熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體、水的滅菌。供滅菌用的濾器，要求能有效地從溶液中除凈微生物，溶液順暢地由濾器通過，濾液中不落入任何不需要的物質(zhì)，濾器容易清洗，操作簡便。繁殖型細(xì)菌很少小于1mm的，芽胞大小為0.5mm或更小些。所以，對于以過篩作用濾過的濾器，例如纖維素酯膜濾器，其孔徑大小必須小到足以阻止細(xì)菌和芽孢進(jìn)入濾孔之內(nèi)，孔徑約為0.2mm?？孔枇粲诳椎纼?nèi)或靜電作用的濾器，孔徑可稍大于所要濾除的顆粒，但壓力過大或波動，顆粒就有被擠過的可能。最常用測定孔徑的方法，是用大小為0.7mm左右的靈菌（B．prodigilsus）混懸液濾過，濾液通過培養(yǎng)實驗，觀察有無靈菌生長。常用除菌濾器有微孔薄膜器，摺疊式纖維素濾棒，一般選用孔徑0.22mm。濾過法應(yīng)配合無菌操作技術(shù)，并必須對成品進(jìn)行無菌檢查，以保證其除菌質(zhì)量。第十二頁，共十六頁，2022年，8月28日五、臭氧消毒法

臭氧（O3）的消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧（O2）和單個氧原子（O），后者具有很強的活性，對細(xì)菌有極強的氧化作用,臭氧氧化分解了細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細(xì)胞膜，將它殺死。多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普遍氧分子（O2），不存在任何有毒殘留物，故稱為無污染消毒劑。它不但對各種細(xì)菌（包括肝炎病毒、大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）有極強的殺來滅能力，而且對霉菌也很有效。生產(chǎn)臭氧的原料主要是電能和空氣，一般通過高頻臭氧發(fā)生器（電子消毒器）來獲得，消毒時,直接將臭氧發(fā)生器直于房間中間即可。臭氧消毒效果的驗證中需確誶和校正的臭氧發(fā)生器技術(shù)指標(biāo)有：臭氧產(chǎn)量、臭氧濃度和時間定時器，并通過驗證檢查細(xì)菌數(shù)來確定消毒時間。第十三頁，共十六頁，2022年，8月28日六、甲醛消毒方法·

計算房間體積，按10g/m3的比例秤出甲醛?！?/p>

將甲醛倒甲醛發(fā)生器或加熱盤或燒杯中，并放好加濕用水，必要時還可加入高錳酸鉀（2-3g/m3）,然后加熱（甲醛發(fā)生器用蒸汽加熱，加熱盤或燒杯可用熱水盛入其中加熱）使其蒸發(fā)成氣體?！?/p>

滅菌流程：空調(diào)器停止運轉(zhuǎn)→啟動甲醛氣體發(fā)生器或在加熱盤中熱甲醛→讓甲醛氣體擴散約30分鐘→啟動空調(diào)器讓甲醛氣體循環(huán)約30分鐘→停止空調(diào)器，房間熏蒸消毒，時間不少于8小時→房間排氣，用新鮮空氣置換約2小時→恢復(fù)正常運行。當(dāng)相對溫度在65％以上，溫度在24－40℃時，甲醛氣體的消毒效果最好。·

甲醛消毒滅菌的氣體發(fā)生量、熏蒸時間，換氣時間等應(yīng)以驗證結(jié)果來最后確定。第十四頁，共十六頁，2022年，8月28日第四節(jié)消毒劑消毒潔凈室的墻面、天花板、門窗、機器設(shè)備、儀器、操作臺、車、桌、椅等表面以及人體雙手（手套）在環(huán)境驗證及日常生產(chǎn)時，應(yīng)定期清潔并用消毒劑噴灑。常見的消毒劑有異丙醇（75％）、乙醇（75％）、新潔而滅（0.1~0.2％）等。亦可用0.5~3%石碳酸或2~5％的甲苯酚。無菌室用的消毒劑必須在層流工作臺中，用0.22μm的濾膜過濾后方能使用。六、滅菌管理要點一)、選用濾過器材和處理方法應(yīng)符合工藝要求，微孔濾膜使用前后應(yīng)作完整性試驗，以保證其滅菌效果。二)、藥液從配制到滅菌開始，其間隔不得超過工藝規(guī)定的時間。三)、滅菌應(yīng)有溫度、壓力及升溫時間、恒溫時間、數(shù)量及全過程的溫度壓力曲線圖或溫度曲線圖。四)、按批號進(jìn)行滅菌，不得混批。滅菌前后的中間產(chǎn)品應(yīng)有可靠的防混措施。五)、滅菌設(shè)備使用前都必須進(jìn)行驗證